沉默细胞周期检测点激酶1基因对肺腺癌顺铂敏感性的影响

目的探讨小干扰核糖核酸(siRNA)沉默Chk1基因表达对肺腺癌A549细胞顺铂敏感性的影响。方法分组培养肺腺癌A549细胞,采用Chk1 siRNA沉默细胞中Chk1表达,Western Blot法检测肺腺癌A549细胞中Chk1蛋白表达,流式细胞术分析沉默Chk1基因对肺腺癌A549细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果Chk1蛋白在肺腺癌A549细胞中高表达,转染siRNA后Chk1蛋白表达水平明显降低。与对照组比较,顺铂组Chk1蛋白表达减少,但差异无统计学意义( P >0.05);Chk1 siRNA组和联合组Chk1蛋白表达明显降低( P 均<0.05);联合组Chk1蛋白表达明显低于顺铂组( P <0.05)。正常培养的肺腺癌A549细胞以G 0/G 1期为主,顺铂组和联合组肺腺癌A549细胞出现明显的G 2/M期阻滞,S期、G 2/M期细胞比例较对照组和Chk1 siRNA组明显增多( P 均<0.05),而联合组S期、G 2/M期细胞比例又低于顺铂组( P 均<0.05)。联合组、Chk1 siRNA组及顺铂组早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数均高于对照组( P 均<0.05);联合组与Chk1 siRNA组及顺铂组比较,早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数增多( P 均<0.05)。结论SiRNA沉默Chk1基因可明显消除顺铂引起的肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡,增强肺腺癌对顺铂化疗的敏感性。

老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达特征,关注其在不同临床特征中的表达差别及相关性。方法 121例老年宫颈鳞癌患者作为观察组,以70例慢性宫颈炎组织作为对照组,采用免疫组织化学方法检测CHK1、2和RAD51表达及在不同临床病理特征中的表达差别及相关性。结果观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率与肿瘤最大径、淋巴结转移、脉管浸润、累及宫颈管深度和Ki67表达密切相关。观察组CHK1和2、CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达均呈正相关性。结论老年宫颈鳞癌患者癌组织中CHK1、2和RAD51高表达且具有协同作用,不仅可以加速肿瘤发生和进展,也可能对判断肿瘤生物学行为有重要意义。

胃腺癌中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测胃腺癌中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达,分析三者在不同临床特征中的表达意义及相关性。方法以97例胃腺癌术后组织为观察组,以切端经病理证实为正常胃黏膜组织80例为对照组,应用免疫组化方法检测两组CHK1、CHK2和RAD51表达,分析其表达的特征及相关性。结果观察组CHK1、CHK2和RAD51表达的阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、CHK2和RAD51表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和临床分期相关,而与淋巴结转移无关。CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达具有正相关性。结论 CHK1、CHK2和RAD51高表达可以有效促进胃腺癌发生和进展,CHK1、CHK2和RAD51具有一定协同作用。

细胞周期检测点激酶2在调节DNA损伤以及维持染色体稳定中的作用

细胞周期检测点激酶2(cell cycle checkpoint kinase 2,CHK2)是由抑癌基因CHEK2编码的丝氨酸/苏氨酸激酶,是DNA双链断裂后参与DNA修复应答反应的重要的信号转导蛋白。CHK2被毛细血管扩张性共济失调突变基因(ataxia telangiectasia mutated,ATM)磷酸化后,CHK2可磷酸化多个底物,包括细胞分裂周期25同源物(cell division cycle 25 homolog,Cdc25)、P53、乳腺癌遗传易感基因1(breast cancer 1,early onset,BRCA1)蛋白、E2F-1转录因子和早幼粒细胞白血病(promye-locytic leukemia,PML)蛋白,使细胞周期进程发生阻滞,促进细胞对DNA损伤进行修复或诱导凋亡。细胞在没有DNA损伤时,CHK2也可以将BRCA1磷酸化,这一过程对保持有丝分裂纺锤体组装的正确性以及染色体稳定性十分必要。基于在DNA损伤和细胞有丝分裂中的作用,CHK2有望成为抗肿瘤治疗的靶点。

细胞周期检测点激酶l研究进展

本文结合国内外相关文献,分析细胞周期检测点激酶1(Chk1)的结构、功能、生物学机制和在人类肿瘤发生、发展中的作用,总结Chk1抑制剂在肿瘤治疗中的应用现状,为今后治疗肿瘤和抑制肿瘤发生提供新的思路。

细胞周期蛋白依赖性激酶1在人结直肠癌组织中的表达意义

目的验证细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinases 1,CDK1)在人结直肠癌组织中的表达。方法以首都医科大学附属北京天坛医院2018年10月至2019年9月诊治的30例病理证实为结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织标本为研究对象,检测CDK1在结肠癌及癌旁正常黏膜组织中的相对表达量(ΔCt)。结果CDK1在结直肠癌组织中均呈高表达,对比癌旁组织差异有显著性(P<0.05),CDK1在结直肠癌组织中比癌旁组织中表达增高4.69倍。结论CDK1属于调控细胞周期的基因,在结直肠癌肿瘤组织中高表达。

Chk1基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖及细胞周期调控的影响及可能机制

目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段。将Chk1 si RNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1si RNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果:3个si RNA中,1条是有效si RNA。该有效Chk1 si RNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000)。转染48 h后,Chk1 si RNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)%,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)%(P=0.000)。流式细胞仪检测显示Chk1 si RNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)%,明显低于未转染组(19.35±2.19)%和脂质体转染组(19.76±2.67)%(P=0.000)。Western blot结果显示转染Chk1 si RNA后,细胞内与细胞周期相关的Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:si RNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。

细胞周期素D1、S期激酶相关蛋白2与p27^(kip1)在结直肠癌中的表达及相关性研究

细胞周期调控机制是由复杂的网络调控系统组成,其调控紊乱是肿瘤发生发展的重要分子事件。参与细胞周期调控的主要因子有：

P15^(INK4b)对人黑色素瘤细胞周期及G_1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15^(INK4b)缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15^(INK4b)cDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15^(INK4b)稳定表达细胞模型MLIK6。流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G_1期升高11％,S期下降14％。利用TdR-N_2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1％和76.8％,而G_1期的比例分别为74.3％和76.4％。~3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G_1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱。进一步探讨P15^(INK4b)对G_1/S相关调控基因的影响,发现G_1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G_1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G_1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G_1→S全部时间进程中。说明P15^(INK4b)是通过对G_1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G_1/S进程。

LncRNA PVT1对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞活性的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 收集41例DLBCL病人和15例淋巴结反应性增生(RLH)病人的组织标本,体外培养人正常B淋巴细胞GM12878和人DLBCL细胞(OCI-Ly3、U2932、TMD8),对TMD8细胞进行转染,将其分为control组(只转染Lipofectamine-2000)、si-NC组(转染si-NC)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、si-PVT1组(转染si-PVT1)、miR-145-5p inhibitor组(转染miR-145-5p inhibitor)、si-PVT1+miR-145-5p inhibitor组(转染si-PVT1和miR-145-5p inhibitor)。应用qRT-PCR方法检测各组细胞PVT1 mRNA和miR-145-5p表达,Western Blot方法检测CDK6蛋白表达,CCK-8法检测TMD8细胞增殖,流式细胞术检测TMD8细胞周期变化,Transwell实验检测TMD8细胞迁移和侵袭能力,RNA pull down和双荧光素酶报告基因法验证PVT1、miR-145-5p与细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的靶向关系。结果 DLBCL组织PVT1 mRNA、CDK6蛋白的表达水平高于RLH组织,miR-145-5p表达低于RLH组织(t=14.264~24.445,P<0.05)。与GM12878细胞比较,OCI-Ly3、U2932、TMD8细胞中PVT1 mRNA、CDK6蛋白表达均增加,miR-145-5p表达均减少(F=69.557~234.718,P<0.05)。6组细胞PVT1 mRNA、miR-145-5p、CDK6蛋白表达及增殖率、G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数差异有统计学意义(F=25.589~319.150,P<0.05);与control组比较,si-PVT1组细胞PVT1 mRNA、CDK6蛋白、增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量降低,miR-145-5p表达、G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),miR-145-5p inhibitor组呈相反变化(P<0.05);下调miR-145-5p表达可减弱敲低PVT1对TMD8细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。过表达PVT1 mRNA增高CDK6蛋白表达、细胞增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量,降低miR-145-5p表达、G0/G1期的细胞比例(F=38.025~327.887,P<0.05)。miR-145-5p是PVT1的靶基因,且miR-145-5p可靶向下调CDK6表达。结论 敲低PVT1可抑制DLBCL细胞恶性生物学行为,其作用机制可能与调控miR-145-5p/CDK6轴有关。

2型糖尿病患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因及其剪接异构体的表达水平和临床意义

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血淋巴细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶5调节亚基相关蛋白1类似物1(CDKAL1)基因及其剪接异构体的表达水平,并探讨其临床意义。方法:收集65例糖尿病患者,其中T2DM患者20例(T2DM组)、糖尿病肾病(DN)患者23例(DN组)和糖尿病视网膜病变(DR)患者22例(DR组),并选择同期健康体检者28名(健康对照组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组研究对象外周血淋巴细胞中CDKAL1基因及其2种剪接异构体CDKAL1-X1和CDKAL1-X2表达水平,分析其表达与T2DM及其糖尿病微血管并发症的关系。结果:与健康对照组比较,T2DM组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因表达水平升高(Z=4.705,P<0.01),CDKAL1-X1表达水平升高(Z=2.698,P=0.007)。与健康对照组比较,DR组和DN组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因和CDKAL1-X1表达水平升高(P<0.05);DR组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因表达水平高于DN组(P<0.05)。结论:T2DM患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因和CDKAL1-X1表达水平升高可能参与糖尿病及其并发症的发生发展。

细胞周期激酶CHEK2和p53在恶性肿瘤细胞周期和凋亡中的作用

细胞周期检测点激酶2（cell cycle checkpoint ki-nase2，CHEK2）是由抑癌基因CHEK2编码的丝氨酸／苏氨酸激酶，CHEK2激酶是DNA双链断裂损伤中重要的信号转导蛋白，参与细胞周期G1、S或G2／M期的阻滞，促进细胞对损伤进行修复。CHEK2基因发生突变后，其编码的激酶会丧失活性，无法修复DNA的损伤，受损伤的DNA不断复制，产生大量异常的细胞，进而导致癌变。CHEK2是继BRCA1／2后发现的另一个重要的乳腺癌易感基因。

miRNA-21对结直肠癌耐药细胞ATM/CHK2/CDC25A信号通路的影响

目的 探讨miRNA-21在结直肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株HCT116/L-OHP中对毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)/细胞周期检测点激酶(CHK)2/细胞分裂周期素(CDC)25A信号通路的影响。方法 应用细胞转染技术干扰HCT116/L-OHP细胞中miRNA-21的表达,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HCT116/L-OHP中ATM、CHK2、CDC25A和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2 mRNA表达,Western印迹检测该细胞株中miRNA-21表达变化后ATM、CHK2、CDC25A和CDK2蛋白表达。结果 转染miRNA-21 mimic使miRNA-21表达升高时,ATM、CHK2、CDC25A和CDK2 mRNA和蛋白的表达均随之升高,且与未转染组和阴性转染组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05);转染miRNA-21 inhibitor使miRNA-21表达降低时,ATM、CHK2、CDC25A和CDK2 mRNA和蛋白的表达均随之降低,且与未转染组和阴性转染组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 在结直肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP中,miRNA-21对ATM/CHK2/CDC25A信号通路有调控作用,抑制miRNA-21的表达可阻断ATM/CHK2/CDC25A信号通路,进而抑制耐药细胞的无限增殖。

siRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的探讨siRNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和周期的影响及其作用机制。方法采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF-7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF-7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P<0.05)。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7%,明显高于脂质体转染组的5.26%(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2/M期比例为(11.3±0.7)%,明显低于未转染组(44.2±1.9)%和脂质体转染组(45.3±2.1)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。

siRNA沉默Chk1基因对二烯丙基二硫诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡敏感性的影响

目的:探讨siRNA沉默Chk1基因表达对二烯丙基二硫诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡和细胞周期的影响。方法:采用RNA干扰技术在胃癌细胞SGC-7901中将Chk1基因沉默,Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达的变化,流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导胃癌细胞凋亡及细胞周期变化的影响。结果:转染Chk1 siRNA后,胃癌细胞SGC-7901中Chk1蛋白表达受抑制,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示:si-Chk1组较空白对照组G2/M期百分比有所降低(P<0.05),si-Chk1+DADS组G2/M期比例明显低于Empty vector+DADS组(P<0.05)。siRNA沉默Chk1基因使二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(15.2±1.0)%上升到(30.9±1.9)%。结论:siRNA沉默Chk1基因可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的敏感性,提示Chk1可作为二烯丙基二硫治疗胃癌的有效增敏靶点。

辛伐他汀通过调控Chk1基因的表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

目的:探讨辛伐他汀(simvastatin,SVA)通过调控细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1,Chk1)基因表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,采用不同浓度(3.25μmol/L、6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)SVA处理细胞,以0μmol/L SVA为空白组(Con组)。采用MTT法检测SVA对细胞的增殖抑制率,筛选SVA最适浓度(SVA组)用于后续研究。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用2、4、6、8 Gy剂量X射线照射细胞。将Chk1阴性对照质粒、Chk1 si RNA分别转染至Hela细胞,分别命名为si-NC、si-Chk1组;重组pc DNA 3.1/Chk1基因过表达质粒及空载体对照质粒分转染至SVA组细胞中,分别命名为SVA+pc DNA-Chk1组、SVA+pc DNA组。采用q RT-PCR与Western blot法检测各组细胞中Chk1 m RNA及蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。结果:随着SVA浓度的增加Hela细胞增殖抑制率明显升高且呈剂量依赖性,SVA浓度为12.5μmol/L时Hela细胞增殖抑制率约为50%,以此用作后续实验研究。SVA组Hela细胞凋亡率显著高于Con组,且不同剂量X射线照射后Hela细胞存活分数明显降低(P<0.05);SVA处理Hela细胞后可显著降低Chk1 m RNA及蛋白表达水平(P<0.05);si-Chk1组Hela细胞中Chk1蛋白表达水平及细胞存活分数均显著低于si-NC组(P<0.05),细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高(P<0.05);SVA+pc DNA-Chk1组Hela细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均显著低于SVA+pc DNA组(P<0.05),细胞存活分数显著升高(P<0.05)。结论:SVA可通过下调Chk1基因表达进而抑制宫颈癌细胞增殖并促使细胞凋亡,同时能够增强宫颈癌细胞放疗敏感性。

沉默Chk1基因对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡敏感度的影响

目的探讨siRNA沉默Chk1基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡和细胞周期的影响,评价其作为姜黄素治疗胃癌增敏靶点的有效性。方法采用RNAi技术在胃癌细胞SG-7901中将Chk1基因沉默,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达的变化,采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡及细胞周期变化的影响。结果转染Chk1siRNA后,胃癌细胞SGC7901中Chk1蛋白表达受抑制,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示,si-Chk1组较空白对照组G2/M期百分比有所降低(P<0.05),si-Chk1+Curcumin组G2/M期比例明显低于Empty vec-tor+Curcumin组(P<0.05)。siRNA沉默Chk1基因使姜黄素诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.1)%上升到(28.9±1.8)%。结论 siRNA沉默Chk1基因可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的敏感度,提示Chk1可作为姜黄素治疗胃癌的有效增敏靶点。

Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡中的作用

目的:探讨Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡和细胞周期中的作用。方法:采用siRNA转染MCF-7细胞靶向干扰Chk1基因,采用Western blot检测Chk1蛋白表达;采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:转染Chkl siRNA后,乳腺癌细胞MCF-7中Chkl蛋白表达水平降低,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示,转染Chkl siRNA后,G2/M期乳腺癌细胞数量有所降低(P<0.05),并且si-Chkl+DADS组G2/M期比率明显低于NC siRNA+DADS组(P<0.05)。Chk1基因沉默后,二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.0)%上升到(29.8±1.7)%。结论:siRNA抑制Chk1基因表达可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的敏感性。