靶向干扰细胞周期检验点激酶2增强5-氟尿嘧啶对鼻咽癌细胞SUNE-1的毒性作用研究

目的探讨靶向抑制细胞周期检验点激酶2（Chk2）对5-氟尿嘧啶（5-FU）抗鼻咽癌鳞状上皮细胞SUNE-1的增敏作用。方法根据Chk2基因设计siRNA干扰序列，在mRNA和蛋白水平检测其干扰效果；通过细胞生长曲线观察Chk2siRNA对SUNE-1细胞增殖能力的影响；通过细胞毒性试验检测Chk2siRNA是否影响SUNE-1细胞对代谢类抗肿瘤药5-FU的敏感性；采用AnnexinV／PI双染方法检测细胞凋亡的变化情况。结果所采用的siRNA在mRNA和蛋白水平均显著降低SUNE-1细胞中Chk2表达，验证了该siRNA的干扰效果；Chk2siRNA对SUNE-1细胞增殖能力无显著影响，但能显著增强5-Fu的细胞毒作用（P〈0．05）；细胞凋亡检测结果显示，Chk2siRNA显著增加5-FU引起的SUNE-1细胞凋亡水平。结论尽管Chk2对SUNE-1细胞生存和增殖不发挥关键作用，但在5-Fu引起的细胞损伤中对细胞起保护作用，该作用与其抑制5-FU引起的细胞凋亡有关，因此Chk2可成为在鼻咽癌治疗中增强5-FU的疗效的靶点。

鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体制备和鉴定

目的制备特异性鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体(m Ab)。方法反转录PCR扩增cChk2基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-4T-3中,在BL21(DE3)中经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-PAGE检测可溶性。用cChk2腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株。结果 cChk2主要以包涵体形式存在,多抗血清具有良好的效价,获得9株阳性杂交瘤细胞株,即1F4、2D9、2G1、3D9、3E3、4B5、4E2、5C9及5F7。结论成功制备了特异性良好的cChk2 m Ab。

CHK1-CDK1通路介导的G2/M检验点对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨检查点激酶1(CHK1)-细胞周期依赖激酶1(CDK1)信号通路异常与上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别将CDK1、CHK1基因特异性shRNA质粒及阴性对照质粒转染卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞,分别采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中CDK1和CHK1的表达情况,采用Western blot法检测各组细胞中p-CDK1、Cyclin B1、p-CHK1(ser345)、CDC25C、p-CDC25C以及增殖和凋亡相关蛋白PCNA、Ki-67、Caspase8、Cleaved-Caspase3的表达情况。结果:分别沉默CDK1、CHK1基因后,SK-OV-3和OVCAR-3细胞增殖受到抑制、凋亡率增加;PCNA、Ki-67蛋白表达减少,Caspase8、Cleaved-Caspase3蛋白表达增加(P<0.05)。此外,沉默CHK1基因可引起p-CHK1和p-CDC25C表达减少、p-CDK1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:CHK1-CDK1信号通路介导的G2/M检验点参与调节卵巢癌细胞的增殖和凋亡。

检验点激酶1的研究进展

检验点激酶1(checkpointkinase1,Chk1)为一种进化保守的蛋白激酶,是细胞检验点的转导因子。当电离辐射、紫外线等引起细胞DNA损伤或者DNA复制叉停滞时Chk1活化,诱导细胞产生细胞周期阻滞、DNA修复或细胞凋亡等特征。现对Chk1的结构、功能以及病毒通过Chk1调控宿主细胞周期等方面进行简述。

纺锤体检验点蛋白在卵母细胞减数分裂过程中的研究进展

纺锤体组装检验点蛋白在卵母细胞减数分裂中发挥着重要作用。它可以看作是一个高保真的监控染色体准确分离的系统,延缓分裂中期向后期的转变,直到所有的染色体准确排列到赤道板上。而在纺锤体组装检验点研究中,最重要的是各个纺锤体检验点蛋白对减数分裂的调控机制。如果纺锤体检验点蛋白异常或发生突变,可能会产生染色体数目或形态不正常的细胞。本文对参与减数分裂过程中重要的纺锤体检验点蛋白的定位及功能进行综述。

细胞周期调控因子的研究进展

细胞周期调控是细胞周期在不同时相的调控点受到调节因子的调控,其中有二个调控点最重要,Ｇ１/Ｓ期,Ｇ２/Ｍ期,已有二类细胞周期调控因子被发现,分别是细胞周期蛋白依赖性激酶ＣＤＫ(ｃｅｌｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ)和细胞周期蛋白(ｃｙｃｌｉｎ),它们之间的相互作用调控细胞周期的进程。

G2/M期P53/CDK1通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨细胞周期G2/M期P53-P21WAF1-细胞周期依赖激酶1(cyclin dependent kinases 1,CDK1)通路与上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的关系。方法分别将CDK1、p53基因特异性shRNA质粒及阴性对照质粒转染卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞,MTT法、TUNEL法和FCM法分别检测细胞增殖、凋亡和细胞周期分布情况,Western blot法分别检测各组细胞中CDK1、磷酸化CDK1(Thr14/Tyr15)、P53、p-P53(ser15)、P21WAF1、Cyclin B1以及增殖和凋亡相关蛋白Ki-67、Survivin、Caspase3蛋白的表达。结果分别沉默CDK1、p53基因后,SK-OV-3和OVCAR-3细胞增殖受到抑制、凋亡增加、G2期细胞数目增加;Ki-67、Survivin蛋白表达减少,cleaved-Caspase3蛋白表达增加。此外,沉默p53基因可引起p-P53(ser15)和P21WAF1蛋白表达减少、p-CDK1(Thr14/Tyr15)蛋白表达升高。结论 G2/M检验点P53/CDK1信号通路可能参与卵巢癌上皮性细胞增殖和凋亡的调节。

对肿瘤细胞中p27^(kip1)蛋白功能的再认识

p27kip1（以下简称p27）蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子,被认为是人类多种肿瘤独立的预后因子和未来可能的肿瘤治疗靶点。传统经典观点认为p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子（cyclindepen dent kinaseinh ibitor，CDKI），

细胞周期检测点激酶1在食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的探讨细胞周期检测点激酶1（Chk1）在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学、原位杂交技术分别检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中Chk1蛋白及mRNA的表达，探讨Chk1表达与食管鳞状细胞癌发生发展及浸润转移之间的关系。结果正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中，Chk1蛋白的阳性表达率分别为14．5％、38．7％和88．7％，三者间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；其mRNA表达水平亦依次升高，分别为82．3％、35．5％和8．1％，3组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；深层浸润组食管鳞癌组织中Chk1的表达（蛋白：94．5％，mRNA：85．5％）均显著高于浅层浸润组（蛋白：42．9％，mRNA：57．1％），两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；有淋巴结转移组的食管鳞癌组织中Chk1的表达（蛋白：100．0％，mRNA：95．0％）显著高于无淋巴结转移组（蛋白：83．3％，mRNA：76．2％），两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；随着食管鳞癌分化级别的升高，鳞癌组织中Chk1蛋白、mRNA的表达依次升高，组间两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Chk1蛋白及mRNA表达与食管鳞癌发生发展及浸润转移有关。

细胞周期检测点激酶1小干扰RNA干扰表达载体体内对顺铂诱导的食管癌移植瘤细胞生长、凋亡的影响

目的构建裸鼠食管癌移植瘤模型，观察细胞周期检测点激酶1（Chkl）小干扰RNA（siRNA）干扰表达载体对顺铂诱导的食管癌移植瘤细胞生物学行为的影响。方法分组饲养荷瘤裸鼠。A组：对照组，瘤体注射无菌生理盐水；B组：瘤体注射ChklsiRNA2加浓度为（5mg/kg）的顺铂；C组：瘤体注射顺铂（5mg/kg）。观察各组移植瘤的生长；采用免疫组织化学、原位杂交方法检测各组移植瘤组织中Chkl蛋白和mRNA的表达；运用原位缺口末端标记（TUNEL）检测各组细胞凋广。结果B组[（279．11±27．23）mm^3]移植瘤体积明显小于C组[（512．41±35．18）mm^3]及A组[（907．82±58．09）mm^3]，组问两两比较差异均有统计学意义（P〈0．01）；B组移植瘤组织中Chkl蛋白（26．87±5．31）及mRNA（45．29±6．47）表达明碌低于C组（蛋白：56．80±7．00；mRNA：87．51±8．38）及A组（蛋白：98．23±15．67；mRNA：187．23±18．55），组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；B组细胞中凋亡指数[（21．03±1．35）％]明显高于c组[（12．41±1．23）％]及A组[（1．34±O．12）％]，组问两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论沉默Chkl表达，可体内增强顺铂对裸鼠食管癌移植瘤生长抑制，诱导移植瘤细胞凋亡的效应。

单极纺锤体蛋白激酶1是一个可能的新型抗肿瘤靶标

纺锤体装配检验点是有丝分裂分裂过程中一个非常重要的监督机器,其作用在于有丝分裂中期向后期转化前将所有的染色体排列到中期板上.近年来的研究表明,该检验点缺陷与肿瘤发生密切相关.单极纺锤体蛋白激酶1是纺锤体装配检验点的必需基因,存在于正常分裂细胞,并在肿瘤组织中高表达.最近研究发现,单极纺锤体蛋白激酶1的表达水平与乳腺癌恶性程度相关.更有意思的是抑制其激酶活性或降低其蛋白水平将会导致多种肿瘤细胞的纺锤体装配检验点功能缺陷和细胞死亡.这表明,单极纺锤体蛋白激酶1是一个潜在的抗癌药物新靶标.本文对单极纺锤体蛋白激酶1如何调控纺锤体装配检验点以及其在抗肿瘤应用研究中的最新进展进行了回顾.

细胞外信号调节激酶信号通路调控磷脂酰肌醇-3-激酶相关激酶研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路通过传递胞外刺激信号使下游元件磷酸化,从而参与多种肿瘤性疾病的进程。在DNA损伤反应(DDR)探究试验中发现,磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3)相关激酶(PIKK)家族的DNA依懒性蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)、共济失调-毛细血管扩张症突变(ATM)和ATR(ATM-和Rad3-相关联)激酶3种成员与细胞周期监测点密切相关。实验证明,MAPK/ERK信号通路具有双重作用,可一方面激活ATM和ATR的活化,另一方面抑制DNA-PKcs的活化,从而调控机体DNA修复体统,参与多种肿瘤细胞的演变。本文通过MAPK/ERK信号通路对ATM、ATR及DNA-PKcs调节细胞周期监测点进行综述。

CHK1和RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期检验点激酶1(CHK1)和RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌组织中的表达及意义。方法选取食管胃结合部腺癌组织141例份(腺癌组)及距肿物≥5 cm的胃黏膜组织作为正常胃黏膜组;同期胃黏膜上皮内瘤变组织112例份,其中低级别上皮内瘤变44例(低级别瘤变组),高级别上皮内瘤变68例(高级别瘤变组)。用免疫组化法和Western blotting法检测CHK1和RAD51蛋白在各组中的表达,并分析其与食管胃结合部腺癌患者临床病理征特的关系。Spearman法分析RAD51与CHK1蛋白表达的相关性。结果 CHK1和RAD51蛋白在正常胃黏膜组、低级别瘤变组、高级别瘤变组和腺癌组中表达依次升高(P均<0.05)。CHK1蛋白表达与食管胃结合部腺癌患者病理分化程度及lauren分型有关(P均<0.05);RAD51蛋白表达与患者病理分化程度、lauren分型及有无淋巴结转移有关(P均<0.05);CHK1和RAD51蛋白表达呈正相关(r=0.342,P<0.05)。结论 CHK1和RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌组织中呈高表达,二者在食管胃结合部腺癌发生发展和转移中起协同作用。

CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌患者中差异表达及其机制探讨

目的探讨人类表皮生长因子受体2(CerbB-2)、细胞周期检验点激酶1(CHK1)及RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌(AEG)患者中的表达意义。方法回顾性分析2020年1月至2022年1月在邯郸市第一医院确诊为AEG的180例患者资料,取癌变部位组织标本180份作为癌变组,取其远端正常胃黏膜组织180份作为对照组,选取同时期胃黏膜上皮内瘤变组织152份,并按照瘤变程度分为中低级别上皮内瘤变组(n=69)及高级别上皮内瘤变组(n=83)。采用蛋白质印迹法检测CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白在各组中的表达;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白联合检测对AEG的诊断价值;分析各蛋白与AEG患者临床病理特征的关系并探讨其相关机制。结果CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白在各组别之间的表达水平差异有统计学意义,且均为对照组<中低级别上皮内瘤变组<高级别上皮内瘤变组<癌变组(均P<0.05);ROC曲线显示CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白联合检测的曲线下面积高于单一检测,敏感度为90.30%,特异度为85.60%;CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白阳性表达均与分化程度、Lauren分型相关,但RAD51蛋白阳性表达还与淋巴结转移相关(均P<0.05);CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白阳性表达率均与分化程度、Lauren分型呈负相关,其中RAD51与淋巴结转移呈正相关(均P<0.05)。结论CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白均在AEG患者中呈现高表达,且与疾病进程及病理特征相关,可通过检测其表达水平或阳性率诊断疾病发生及进展情况。

NCAPG基因的表达上调促进肺腺癌细胞增殖并与不良临床预后相关

目的探究非SMC凝聚素I复合亚基G(NCAPG)基因在肺腺癌组织中的表达以及与临床预后的相关性和其分子机制。方法2017年1月至2019年12月在连云港市第二人民医院确诊并接受手术治疗的肺腺癌患者的肿瘤组织及邻近正常组织110份。使用TCGA数据库分析NCAPG基因表达与肺腺癌患者预后的关系。使用免疫组织化学(IHC)评估NCAPG在110个肺腺癌组织和正常组织中的表达。使用慢病毒介导的shRNA获得稳定敲低NCAPG的肺腺癌的细胞系。采用CCK-8和集落形成实验研究NCAPG对肺腺癌细胞系(A549,H1975)增殖能力的影响。通过蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)和共表达分析探究NCAPG的共表达基因,并使用免疫共沉淀(CO-IP)验证。采用Log-rank方法判定总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的统计差异,采用卡方检验评估110例患者的临床病理特征和NCAPG的表达之间的相关性。结果NCAPG在TCGA肺腺癌数据库和110个肺腺癌组织中上调,并且与肺腺癌患者的肿瘤大小(P=0.048)和临床分期(P=0.021)有关。此外,敲低NCAPG抑制了肺腺癌细胞增殖和生长。机制上,我们进一步发现细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)与NCAPG具有表达相关性,并相互结合,共同促进了肺腺癌的进展。结论NCAPG可以用作肺腺癌预后不良的标志物和肺腺癌治疗的潜在靶点。

鞘氨醇激酶1参与依托泊苷抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的研究

目的利用抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中SK-1基因表达，结合依托泊苷对细胞增殖的影响，研究乳腺癌的治疗新方法。方法将依托泊苷分别处理野生型及SK-1敲除型MDA-MB-231细胞，^3H-TdR掺入法分析细胞增殖，Transwell法分析细胞迁移，Western印迹检测SK-1蛋白表达及细胞周期检验点相关信号因子的蛋白表达，RT-PCR检测细胞内SK-1的mRNA表达量。结果依托泊苷在较高剂量时，MDA-MB-231细胞存活率明显下降，但依托泊苷却呈浓度依赖性促进乳腺癌细胞SK-1 mRNA及蛋白水平表达，将SK-1敲除，细胞迁移率下降，而且可以增强G1期各抑癌基因的激活或高表达，使细胞周期阻滞。结论SK-1基因敲除有效增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

酿酒酵母形态变化检验点的研究进展

真核细胞周期调控和检验点机制是目前生物学研究的热点。模式生物酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞周期运转的研究为哺乳动物和其他真核生物细胞周期调控的研究提供了基础信息。细胞周期与细胞的形态变化(morphogenesis)间存在一定的关系。本研究介绍了酿酒酵母形态变化检验点(morphogenesis checkpoint)的研究进展。当细胞形态发生缺陷时,形态变化检验点对其做出响应,延迟细胞核分裂,直到芽体正常形成。该延迟过程是通过抑制CDK抑制蛋白激酶(CDK-inhibitory kinase)Swe1p的降解来实现的。Swe1p的作用是通过抑制Clb-Cdc28p的活性,调节细胞周期进程。细胞形态变化和细胞周期间的正确交流对保证细胞的成功分裂起到关键作用。虽然目前已取得了一定的进展,但仍有许多问题有待进一步研究。

Chk1表达与食管鳞癌浸润转移的关系

目的探讨Chk1表达与食管鳞癌浸润转移的关系。方法采用Western Blot、RT-PCR技术分别检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中Chk1蛋白及mRNA的表达,探讨Chk1表达与食管鳞状细胞癌浸润转移之间的关系。结果正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织以及食管鳞癌组织中,Chk1蛋白、mRNA的表达水平依次升高,三者间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);深层浸润组食管鳞癌组织中Chk1蛋白、mRNA的表达水平均显著高于浅层浸润组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移组的食管鳞癌组织中Chk1蛋白、mRNA的表达水平显著高于无淋巴结转移组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Chk1高表达与食管鳞癌浸润转移有关。

FDA受理施贵宝PD-1药物新药申请

以PD-1等细胞周期检验点为靶点的药物在过去几年中可谓是火得一塌糊涂。许多制药巨头如百时施贵宝、默沙东等生物医药巨头都在这一领域投入了巨大的人力物力。而这也反过来导致这一领域的竞争趋于白热化。最近FDA宣布已经受理了施贵宝公司开发的Opdivo的上市申请。