存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

细胞周期蛋白依赖性激酶2及相关蛋白研究进展

在所有真核细胞中,细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,CDK）调控着细胞周期各个环节的起始与进程,进而控制细胞的增生和凋亡。CDK2在20世纪90年代初鉴定并命名,是目前已发现的11个CDK成员中研究极为深入的细胞周期调控因子之一,在决定细胞周期进程中起着重要作用。

细胞周期突变体相关蛋白激酶2、P-糖蛋白和谷胱甘肽巯基转移酶-π在宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测宫颈癌中细胞周期突变体(NIMA)相关蛋白激酶(Nek2)与耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、胱甘肽巯基转移酶-π(GST-π)的表达及其与临床病理特征的相关性。方法应用免疫组织化学法检测144例宫颈癌组织和32例慢性宫颈炎非癌组织中Nek2、P-gp、GST-π的表达。结果 1Nek2、P-gp和GST-π在宫颈癌及宫颈炎组织中的阳性表达率分别为(51.4%vs 31.2%)、(55.6%vs 12.5%)和(73.6%vs 53.1%),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2Nek2表达与宫颈癌组织学分级、临床分期相关(P<0.05),与年龄、组织学类型、浸润深度、细胞角蛋白(CK)、CK14、癌胚抗原(CEA)、抗癌基因P16、生存时间无关(P>0.05)。P-gp、GST-π在宫颈癌的阳性表达与以上临床病理特征无相关性(P>0.05)。3宫颈癌中Nek2与P-gp、GST-π表达呈正相关(r=0.193和0.207,P<0.05)。结论 Nek2可能介导宫颈癌中P-gp、GST-π的表达。Nek2、P-gp及GST-π蛋白在宫颈癌发生、发展及耐药机制中发挥重要作用。联合检测对宫颈癌治疗方案的合理制定及化疗反应性的评估可能具有积极的临床指导意义。

细胞周期检测点激酶2在调节DNA损伤以及维持染色体稳定中的作用

细胞周期检测点激酶2(cell cycle checkpoint kinase 2,CHK2)是由抑癌基因CHEK2编码的丝氨酸/苏氨酸激酶,是DNA双链断裂后参与DNA修复应答反应的重要的信号转导蛋白。CHK2被毛细血管扩张性共济失调突变基因(ataxia telangiectasia mutated,ATM)磷酸化后,CHK2可磷酸化多个底物,包括细胞分裂周期25同源物(cell division cycle 25 homolog,Cdc25)、P53、乳腺癌遗传易感基因1(breast cancer 1,early onset,BRCA1)蛋白、E2F-1转录因子和早幼粒细胞白血病(promye-locytic leukemia,PML)蛋白,使细胞周期进程发生阻滞,促进细胞对DNA损伤进行修复或诱导凋亡。细胞在没有DNA损伤时,CHK2也可以将BRCA1磷酸化,这一过程对保持有丝分裂纺锤体组装的正确性以及染色体稳定性十分必要。基于在DNA损伤和细胞有丝分裂中的作用,CHK2有望成为抗肿瘤治疗的靶点。

食管上皮癌变过程中细胞周期蛋白E细胞周期蛋白依赖性激酶2表达及DNA含量的研究

本文探讨食管上皮癌变过程中DNA含量的变化．以及细胞周期蛋白E（cyclinE）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase2，CDK2）表达的变化及其意义。

细胞周期蛋白依赖性激酶-2两种剪接体在SH-SY5Y细胞中共表达

目的观察细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK-2)在SH-SY5Y细胞中的表达情况。方法采用RT-PCR方法研究CDK-2的表达,用DNA银染技术观察PCR产物,割胶回收后,克隆到载体上、测序。结果在聚丙烯酰胺胶上可以观察到两条DNA带,相对分子质量小的DNA带染色较弱;将两条DNA带切下,回收后与载体连接,测序证实两条DNA带均为CDK-2基因的产物。结论CDK-2的两种剪接形式在SH-SY5Y细胞中共表达,其中一种剪接形式是第五外显子缺如,但其表达量比较弱,其作用机制仍有待于进一步研究。

细胞周期蛋白依赖性激酶2在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的:检测上皮性卵巢癌、卵巢交界性肿瘤及正常卵巢组织中细胞周期蛋白依赖性激酶2(P34cdc2激酶)的表达,探讨其与临床病理因素之间的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测30例上皮性卵巢癌、14例交界性肿瘤及20例正常卵巢组织中P34cdc2激酶的表达,应用BioMias图像分析系统计算阳性指数(positive index,PI)并结合临床资料,分析P34cdc2激酶与各临床病理因素的关系。结果:P34cdc2激酶在正常卵巢组织、卵巢交界性肿瘤及上皮性卵巢癌组织中的PI呈递增趋势,每两组间比较差异有统计学意义;P34cdc2在分期晚、组织分化差或伴有淋巴结转移时表达强度高,差异有统计学意义(P<0.05);在不同年龄组、不同病理类型间的P34cdc2激酶表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P34cdc2激酶过度表达可能促进上皮性卵巢癌的发生、发展,高表达可能提示预后不良。

基于生物信息学研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A基因与宫颈癌的关系及调控机制

目的采用生物信息学方法分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)基因与宫颈癌的关系,并探讨其对宫颈癌潜在的调控机制。方法从GEO数据库中下载数据集GSE7803、GSE64217和GSE63514,并使用GEO2R软件筛选宫颈癌组织和正常组织之间的差异性表达基因,得到CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,并利用GEPIA数据库验证CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达水平。通过DAVID在线工具针对差异性表达基因进行通路富集分析;利用STRING数据库和Cytoscape软件筛选与CDKN2A基因编码蛋白相互作用密切的蛋白。利用UALCAN在线工具分析CDKN2A基因表达与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系,以及宫颈癌组织中CDKN2A基因启动子甲基化水平。利用TIMER数据库分析CDKN2A基因表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的相关性。利用ENCORI和mirDIP软件分析与CDKN2A基因有结合靶点的miRNA。结果共获得347个差异性表达基因,其中CDKN2A基因为上调基因;GEPIA数据库验证结果提示CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织组织中呈高表达水平(P<0.05)。CDKN2A基因参与了细胞周期、p53信号通路及膀胱癌信号通路;共有22个蛋白与CDKN2A基因编码蛋白相互作用密切。淋巴结转移阳性宫颈癌患者中的CDKN2A基因表达水平高于淋巴结转移阴性者,CDKN2A基因高表达的宫颈癌患者的生存期短于低表达者(均P<0.05)。宫颈癌组织中CDKN2A基因启动子的甲基化水平较正常宫颈组织升高(P<0.05)。CDKN2A基因表达水平与巨噬细胞浸润水平呈负相关,与中性粒细胞、树突状细胞浸润水平呈正相关(均P<0.05)。共有9个miRNA可能与CDKN2A基因有结合靶点。结论CDKN2A基因与宫颈癌发生、发展密切相关,或可作为宫颈癌诊断及预后评估的潜在新分子标志物,并可为研究宫颈癌的免疫治疗提供新线索;该基因可能通过启动子区域甲基化或上游miRNA靶向调控在宫颈癌的发生、发展中发挥作用。

细胞周期素依赖性激酶2及p27^(Kipl)与血管瘤

目的:进一步探讨细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)及p27Kip1在血管瘤发生、发展及退化过程中的作用机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测49例皮肤毛细血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中CDK2和p27Kip1的表达水平;采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对CDK2和p27Kip1表达的平均光密度和阳性面积率进行图像分析。结果:增生期组CDK2的表达明显高于退化期组和正常皮肤组织组;增生期血管瘤内皮细胞p27Kip1的表达显著低于退化期血管瘤内皮细胞。结论:p27Kip1能抑制血管瘤内皮细胞的增殖,在血管瘤的退化过程中起了重要作用;而CDK2能促进血管瘤内皮细胞增殖,在血管瘤的增生过程中起了重要作用。

细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制对人鼻咽癌细胞株CNE-2衰老的影响及机制研究

目的研究抑制细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase,CDK2)对人鼻咽癌细胞株CNE-2衰老的影响并探讨其分子机制。方法实验分为Control组、Control siRNA组、CDK2-siRNA组、CVT-313组,分别用PI单染流式细胞仪检测各组细胞增殖情况,衰老相关β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老情况,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)含量,Annexin-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;进一步通过Western blot法检测衰老相关蛋白表达情况。结果人鼻咽癌细胞株CNE-2中,CDK2-siRNA组和CVT-313组细胞增殖指数明显降低,衰老细胞增多,活性氧含量增加,与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05),而细胞凋亡率无显著性变化(P>0.05)。CDK2-siRNA组和CVT-313组p53、p21、p16蛋白表达明显增加,而pRb蛋白表达明显减少。结论抑制CDK2可诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2的衰老,其机制可能是通过促进衰老相关蛋白的表达来实现的。

细胞周期相关蛋白激酶2在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探索细胞周期相关蛋白激酶2(NIMA-related kinase 2,NEK2)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:回顾性分析武汉市第一医院2012年11月至2015年5月间收治的120例结肠癌患者临床资料及随访情况。采用免疫组织化学法检测结肠癌组织与癌旁组织中NEK2的表达情况,依据结肠癌免疫组织化学结果分成NEK2高表达组和低表达组,卡方检验分析NEK2的表达与病理因素的关系,单因素及多因素分析影响总生存率及累计复发率的危险因素,Kaplan-Meier(K-M)法绘制生存曲线。结果:NEK2在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织。NEK2高表达组与年龄(P=0.260)、性别(P=0.580)、肿瘤直径(P=0.522)、浆膜浸润(P=0.116)无关,而与肿瘤分化程度(P=0.021)、淋巴结转移(P=0.017)、AJCC分期(P=0.018)相关。AJCC分期及NEK2的表达为影响总生存率和累计复发率的独立影响因子。NEK2高表达组1,3年总生存率分别为33.4%,19%,NEK2低表达组1,3年总生存率为70.3%,35%,NEK2高表达组1,3年总生存率低于NEK2低表达组(P<0.05);NEK2高表达组1,3年累计复发率分别为69.7%,84.3%,NEK2低表达组1年累计复发率为35.8%,72.4%,NEK2高表达组1,3年累计复发率高于NEK2低表达组(P<0.05)。结论:NEK2在结肠癌组织中高表达,NEK2高表达与恶性临床病理因素相关,NEK2是影响结肠癌患者预后的独立危险因素。

细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2B基因多态性与维吾尔族2型糖尿病的关系研究

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2B(CDKN2A/2B)基因多态性与维吾尔族2型糖尿病(T2DM)的关系。方法选取2012年3月—2013年9月在新疆医科大学第一附属医院住院的维吾尔族T2DM患者1 000例作为T2DM组,及同期在本院体检的无糖尿病、无血缘关系的维吾尔族人群1 010例作为对照组。受试者均进行体格检查及生化指标测定;采用Sequenom Mass ARRAYSNP技术检测CDKN2A/2B基因2个T2DM易感位点;采用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析;采用SNPStats在线软件进行遗传模型分析,并对基因型、单体型与BMI的交互作用进行分析。结果由于少量样本基因位点未检测成功,故最终位点rs10811661成功分型1 940例(其中对照组967例、T2DM组973例),位点rs564398成功分型1 962例(其中对照组和T2DM组均为981例)。两组位点rs10811661的基因型和等位基因分布间差异均有统计学意义(P<0.05);而位点rs564398的基因型和等位基因分布间差异无统计学意义(P>0.05)。在调整年龄、性别、BMI后,两组位点rs10811661的共显性、显性、超显性及加性遗传模型间差异均有统计学意义(P<0.05),其中加性遗传模型赤池信息准则(AIC)和施瓦兹贝叶斯信息准则(BIC)最小,分别为2 602.4、2 630.3;而隐性遗传模型间差异无统计学意义(P>0.05)。两组位点rs564398的各遗传模型间差异均无统计学意义(P>0.05)。与位点rs10811661表现为T/T基因型的体质量正常者比较,表现为T/T、T/C基因型的肥胖者发生T2DM的OR值分别为2.53〔95%CI(1.80,3.55)〕、2.17〔95%CI(1.50,3.13)〕,P<0.05。与位点rs564398表现为A/A基因型的体质量正常者比较,表现为A/A基因型的超重者和表现为A/A、A/G、G/G基因型的肥胖者发生T2DM的OR值为1.44〔95%CI(1.03,2.02)〕、2.79〔95%CI(1.99,3.91)〕、2.69〔95%CI(1.86,3.88)〕、4.81〔95%CI(2.49,9.29)〕,P<0.05。位点rs10811661表现为T/T基因型中的肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为2.53〔95%CI(1.80,3.55)〕,P<0.05;表现为T/C基因型中的超重、肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为1.56〔95%CI(1.01,2.40)〕、3.21〔95%CI(2.09,4.92)〕,P<0.05。位点rs564398表现为A/A基因型中的超重、肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值分别为1.44〔95%CI(1.03,2.02)〕、2.79〔95%CI(1.99,3.91)〕,P<0.05;表现为A/G基因型中的肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为2.09〔95%CI(1.38,3.15)〕;表现为G/G基因型中的肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为5.31〔95%CI(1.68,16.73)〕,P<0.05。肥胖者中位点rs10811661表现为C/C基因型者较T/T基因型者发生T2DM的OR值为0.48〔95%CI(0.27,0.88)〕,P<0.05。选取两位点均成功分型的1 933例样本进行连锁不平衡分析及单体型构建,在调整年龄、性别和BMI后,位点rs10811661和rs564398间无强连锁不平衡(D'=0.268 2);CA单体型者较频率最高的TA单体型者发生T2DM的OR值为0.78〔95%CI(0.65,0.94)〕,P<0.05。与体质量正常的TA单体型者比较,肥胖的TA、CA、CG、TG单体型者发生T2DM的OR值分别为2.94〔95%CI(1.92,4.50)〕、2.14〔95%CI(1.41,3.25)〕、3.05〔95%CI(1.48,6.28)〕、3.02〔95%CI(1.98,4.60)〕,P<0.05。TA、CA、CG、TG单体型者中肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值分别为2.94〔95%CI(1.92,4.50)〕、2.39〔95%CI(1.59,3.59)〕、3.70〔95%CI(1.11,12.31)〕、2.59〔95%CI(1.72,3.90)〕,P<0.05。肥胖者中CA单体型者较TA单体型者发生T2DM的OR值为0.73〔95%CI(0.55,0.97)〕,P<0.05。结论 CDKN2A/2B基因位点rs10811661多态性与维吾尔族T2DM的发病风险可能有关,这种关联可能与BMI有交互作用。位点rs10811661携带T/T基因型者较携带C/C基因型者发生T2DM的风险增加,T为风险等位基因。rs564398多态性与维吾尔族T2DM发病风险无关。位点rs10811661与rs564398之间的CG单体型合并肥胖者发生T2DM的风险最高。

细胞周期监测点激酶2突变与乳腺癌相关的研究进展

细胞周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHEK2)是由CHEK2基因编码的DNA双链断裂损伤的重要信号转导蛋白,参与G_1期、S期和G_2/M期的阻滞。CHEK2基因突变和乳腺癌病理特征与预后相关,是乳腺癌重要的易感基因。CHEK2有1100del C、Y390C以及I157T等多种突变形式,通过多条不同通路,如SDF-1和IL-6、BRCA1/2等影响细胞周期监测点的功能。在化疗方面,寻找CHEK2抑制剂以增强化疗或放疗对肿瘤细胞的杀伤效果也是当前的研究热点之一。本文针对乳腺癌中CHEK2突变的形式、机制以及可能的治疗靶点做一综述。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因和妊娠糖尿病的关系

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因(CDKN2A/2B)和妊娠糖尿病(GDM)的相关性,为GDM的早期诊断和治疗提供依据。方法选取本院2014年12月-2015年12月收治的GDM患者56例(GDM组)进行研究,同时选取正常糖耐量孕妇108例(正常组)以及2型糖尿病患者98例(T2DM组)进行对比,所有受试者均进行清晨空腹采血后进行DNA的提取,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,观察三组受试者CDKN2A/2B基因分布频率情况,并对CDKN2A/2B基因多态性与GDM的相关性进行分析。结果三组受试者中CDKN2A/2B基因rsl0811661位点均存在于TT、TC、CC三种基因型。TT基因分布频率,GDM和T2DM组显著高于正常孕妇组,差异有统计学意义;而GDM组和T2DM组相比,差异无统计学意义。正常组CC分布频率显著高于GDM组和T2DM组,差异有统计学意义;GDM组和T2DM组CC分布频率差异无统计学意义。三组TC分布频率相似,组间差异无统计学意义。正常组等位基因T的分布频率(34.3%)显著低于GDM组(58.9%)和T2DM组(60.2%),差异有统计学意义;但GDM组与T2DM组间的基因型和等位基因频率分布相近,组间差异无统计学意义。相关性分析发现,rs10811661危险等位基因T与GDM具有显著的相关性(r=4.227,P<0.05)。结论 CDKN2A/2B基因rs10811661位点存在基因多态性,其等位基因T可能为GDM的风险最高的等位基因,CDKN2A/2B基因可能是GDM的易感基因之一,可能为GDM和T2DM共同的易感基因。

猪细胞周期蛋白依赖性激酶2多克隆抗体的制备与鉴定

为研究猪细胞周期蛋白依赖性激酶2(pCDK2)的生物学功能,本试验构建重组原核表达载体pET28apCdk2,转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,用IPTG诱导重组蛋白(rpCDK2)表达并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定,蛋白经纯化及与弗氏佐剂乳化后免疫家兔制备多克隆抗体。分别用Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。结果显示,成功表达了rpCDK2蛋白,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,可溶性rpCDK2蛋白分子质量约为38ku,包涵体rpCDK2蛋白在38~43ku间有3种不同分子质量形式;IPMA检测结果显示,所制备的pCDK2蛋白多克隆抗体与猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)免疫染色呈特异性反应,且Western blotting分析显示,多克隆抗体与这两种细胞的总蛋白反应出现4条特异性条带(分子质量在34~50ku之间),可能跟pCDK2的多种磷酸化形式有关。本试验利用原核表达系统成功制备了rpCDK2蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的pCDK2蛋白多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。

葡萄糖6-磷酸脱氢酶调控细胞周期蛋白E1和细胞周期蛋白依赖性激酶2促进细胞增殖及其在肾透明细胞癌中的预后价值

肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是一种转移率高、预后差的细胞代谢性疾病,对其有效诊疗及预后分子标志物的研究十分重要。葡萄糖6-磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphatedehydrogenase,G6PD)在ccRCC中高表达,并提示患者不良预后,其促进ccRCC细胞增殖的分子机制有待进一步揭示。本研究发现,降低G6PD可抑制细胞周期G_(1)/S期转化并显著抑制ccRCC细胞增殖。G6PD可在细胞水平调控G_(1)/S期转化及增殖相关因子Cyclin D1,CDK4,CDK6,Cyclin E1和CDK2基因表达。TCGA数据库分析结果表明,ccRCC中Cyclin D1,Cyclin E1和CDK2的mRNA水平显著升高,而CDK4表达无明显差异,CDK6表达却显著降低。相关性分析结果显示,G6PD与Cyclin D1呈显著负相关(P<0.0001),G6PD与CDK4,CDK6之间无显著相关性(P>0.05),G6PD与Cyclin E1(P<0.0001)以及CDK2(P<0.05)显著正相关。进一步免疫组化检测结果表明,Cyclin E1和CDK2在ccRCC肿瘤组织中表达显著升高。生存预后分析结果显示,Cyclin D1高表达提示ccRCC患者整体预后更为良好,CDK4和CDK6表达水平在ccRCC患者总生存率预测中无意义;而Cyclin E1和CDK2高表达均可提示ccRCC患者预后不良。进一步细胞水平检测发现,Cyclin E1、CDK2表达降低可显著逆转G6PD促进ccRCC细胞增殖的能力。综上,与增殖相关因子Cyclin D1,CDK4和CDK6相比,G6PD有可能通过促进Cyclin E1和CDK2表达升高而发挥促进ccRCC肿瘤细胞增殖的作用,并且这3者的异常高表达有望成为ccRCC患者不良预后的独立生存预测因素。

细胞周期S期激酶相关蛋白2预测乳腺癌预后价值的Meta分析

目的:基于现有文献的Meta分析试阐述Skp2对乳腺癌(breast cancer,BC)预后的价值。方法:2015年10月之前在PubMed、EMBASE和Web of Science等数据库检索到的符合标准的研究。在95%可信区间(confidence interval,CI)内,以风险比(hazard ratio,HR)阐明Skp2表达和BC临床结果之间的相关性,包括总存活数(overall survival,OS)、无病生存数(disease-free survival,DFS)和BC带病生存数。结果:共计9个研究包括1820个病例。Meta分析结果表明:Skp2过表达与BC患者低OS(HR=2.58,95%CI:1.83~3.63,P=0.000)和低DFS(HR=2.12,95%CI:1.48~3.05,P=0.000)相关。结论:Skp2过表达是肿瘤低生存率的独立危险因素。

人细胞周期蛋白依赖性激酶2与抑制剂roscovitine作用的理论研究

目的:研究人细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)与抑制剂roscovitine相互作用的机制。方法:利用分子动力学模拟的方法研究roscovitine与CDK2之间的相互作用。结果:和空载CDK2相比,roscovitine的存在会使RMSD和RMSF值略微降低,但roscovitine会显著影响CDK2活性位点残基侧链二面角。Roscovitine在分子动力学模拟过程中会与Ile10和Leu83形成稳定的氢键作用。结论:Roscovitine对CDK2骨架运动影响不大,但会使CDK2活性位点残基的侧链构象发生变化。Roscovitine与Ile10和Leu83之间的氢键作用是CDK2对roscovitine进行识别的重要途径。

鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体制备和鉴定

目的制备特异性鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体(m Ab)。方法反转录PCR扩增cChk2基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-4T-3中,在BL21(DE3)中经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-PAGE检测可溶性。用cChk2腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株。结果 cChk2主要以包涵体形式存在,多抗血清具有良好的效价,获得9株阳性杂交瘤细胞株,即1F4、2D9、2G1、3D9、3E3、4B5、4E2、5C9及5F7。结论成功制备了特异性良好的cChk2 m Ab。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-453细胞分为CDKN2B-AS1阴性对照(si-NC组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA(si-CDKN2B-AS1组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p阴性对照(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用RT-qPCR法对CDKN2B-AS1及微小RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及MTT实验;采用Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS1对miR-339-5p的靶向调控。结果 在乳腺癌组织中CDKN2B-AS1表达水平上调[(2.23±0.08)比(1.00±0.06)](P<0.05)。抑制CDKN2B-AS1可增加G0期细胞比例[(43.29±3.76)%比(30.25±3.01)%]、P21表达水平升高,S期细胞比例[(21.91±3.10)%比(34.19±3.32)%]、细胞存活率[(53.02±5.38)%比(100.00±7.12)%]、迁移、侵袭数以及Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。CDKN2B-AS1靶向调控miR-339-5p,抑制miR-339-5p逆转抑制CDKN2B-AS1对MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 抑制CDKN2B-AS可抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控miR-339-5p表达。