P15^(INK4b)对人黑色素瘤细胞周期及G_1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15^(INK4b)缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15^(INK4b)cDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15^(INK4b)稳定表达细胞模型MLIK6。流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G_1期升高11％,S期下降14％。利用TdR-N_2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1％和76.8％,而G_1期的比例分别为74.3％和76.4％。~3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G_1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱。进一步探讨P15^(INK4b)对G_1/S相关调控基因的影响,发现G_1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G_1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G_1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G_1→S全部时间进程中。说明P15^(INK4b)是通过对G_1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G_1/S进程。

G1期细胞周期相关蛋白对POLD1基因启动子活性的调控

POLD1基因编码DNA聚合酶δ的催化亚基.然而作为最重要的复制蛋白,目前并不清楚其表达的细胞周期调控机制.研究中运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了POLD1启动子在细胞周期不同时相的活性,结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化,在早S期最高.为进一步确定调控POLD1表达的细胞周期相关因子,应用不同质粒转染MCF7细胞,分别筛选得到稳定细胞系.荧光素酶实验表明增强p53或p21的表达,抑制CyclinE或CDK2的表达都能抑制POLD1启动子活性;而抑制CDK4或Cyclin D1的表达对启动子活性没有明显影响.瞬时共转染实验进一步验证Cyclin E或CDK2受到抑制后能够降低POLD1启动子活性.研究初步探讨了POLD1基因表达的细胞周期调控通路,进一步了解细胞周期因子对DNA复制体调控的复杂机制.

补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用

目的:比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用。方法:采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT-PCR、Western blot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16^(INK4)、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果:补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA/蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA/蛋白的表达。而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显。结论:补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现。

鼻咽癌相关基因NGX6对鼻咽癌细胞周期的影响

为了探讨鼻咽癌(NPC)候选抑瘤基因NGX6对NPC细胞的细胞周期进程及细胞周期素的影响,阐明它的作用机制,通过建立稳定表达NGX6的鼻咽癌HNE1细胞株,采用细胞免疫组织化学,流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,用westernblot验证它对细胞周期的影响.结果显示稳定表达NGX6的HNE1细胞较对照组细胞周期中G0 G1期比例明显增加,而S期比例减少.细胞凋亡率无明显变化.流式细胞仪检测发现cyclinD1、A和E的表达明显减少,以cyclinD1的改变最为明显.Westernblot检测也发现cyclinD1的表达明显下调.以上结果说明NGX6主要通过下调cyclinD1的表达,延缓细胞周期的G1→S的进程,从而抑制NPC细胞的过度增殖.

肿瘤抑制基因Rb与细胞周期调控研究新进展

Ｒｂ 与人类多种肿瘤发生关系密切， 是一种重要的肿瘤抑制基因． Ｒｂ 蛋白参与细胞周期调控， 与ｐ１６、ＣＤＫ４／６、ｃｙｃｌｉｎＤ１ 等形成复杂的反馈调节网络， 在Ｇ１／Ｓ关卡调控中处于中心环节， 决定着细胞周期的进程．Ｒｂ 又是核内信号与胞外信号相互作用的界面， 受到胞内外多种因素的调控， 使Ｒｂ 功能与细胞生长、分化状态相适应．

细胞周期相关基因微阵列在中药抑制肝癌细胞增殖作用机理研究中的应用

目的 :设计DNA微阵列并利用其研究中药抗肿瘤的分子机制。方法 :制备了包含有与细胞周期和DNA损伤调控检测相关的 2 4个基因的cDNA微阵列 ,选择了本实验室已证明对肝癌细胞有抑制效果的中药 ,通过流式细胞仪检测其对细胞周期的影响 ,提取药物作用后的RNA ,反转录后标记探针与微阵列杂交 ,检测中药作用细胞后对细胞周期及损伤检测相关基因转录的影响。结果 :4种中药作用SMMC 772 1后 ,细胞周期基因和损伤检测点基因均有不同程度改变 ,表现为部分上调 ,部分下调 ,这些和流式细胞术检测的结果是相符合的。结论

苦参碱对白血病细胞癌基因和细胞周期调控蛋白表达的影响

目的：探讨在苦参碱诱导下，白血病细胞株Ｋ５６２增殖和分化时相关癌基因及细胞周期调控蛋白表达的改变及意义。方法：应用分子生物学 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和 Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术检测人红白血病细胞株 Ｋ５６２在苦参碱作用后的ｃ－ｍｙｃ、Ｎ－ｒａｓ 及 ｐ５３ ｍＲＮＡ表达；同时用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ－ＥＣＬ分析苦参碱作用前、后２４、４８、７２，小时Ｋ５６２ 细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１，ＣｙｃｌｉｎＥ，Ｃｄｋ２，Ｃｄｋ５的不同表达水平。结果：在增殖的 Ｋ５６２细胞（培养４８小时）中，伴随着 ＤＮＡ合成增加，ＣｙｃｌｉｎＥ和 Ｃｄｋ２保持高表达；而在苦参碱作用２４小时分化启动的细胞中，随着ＤＮＡ合成减少，Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３ｍＲＮＡ表达增强； ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达明显受抑；同时 ＣｙｃｌｉｎＤ， Ｃｄｋ５表达增强。结论：苦参碱抑制 Ｋ５６２细胞增殖并诱导分化可能与相关癌基因表达和 ＣｙｃｌｉｎＤ１／Ｃｄｋ５，ＣｙｃｌｉｎＥ／Ｃｄｋ２不同表达有关。

细胞周期相关基因CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2在恶性肿瘤中的研究进展

CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2是细胞周期相关基因,主要通过转录合成细胞周期相关蛋白,在细胞增殖和凋亡的调控方面发挥重要作用。并且CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2基因在多种肿瘤的发生发展以及肿瘤的治疗和预后方面扮演重要角色。本文就近年来对CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2在肿瘤中作用以及对患者治疗疗效和预后影响的研究进展进行综述。

HMBA对人肝癌SMMC-7721细胞周期相关基因表达的影响

本文研究HMBA对人肝癌SMMC-7721细胞周期G_0/G_1期阻滞相关基因表达的影响。免疫细胞化学和核酸原位杂交检测结果显示,HMBA可明显上调p21^(WAFl/CIPl)、p16蛋白表达并增强p21^(WAFl/CIPl)基因转录,同时对CDK4、Cyclin D1蛋白表达以及c-myc基因转录均具有明显的下调作用。结果表明,HMBA可通过增强p21^(WAFl/CIPl)、p16基因表达而抑制Cyclin D1-CDK4活性,最终导致细胞进入S期所需的c-myc等基因转录活性下降,从而将细胞周期阻滞于G_0/G_1期,诱导人肝癌细胞分化。

分块PCA提取细胞周期调控基因的研究

用主成分分析(PCA)方法处理基因表达微阵列数据能够实现基因选择、基因表达模式提取、基因分类等,有其独特的优点。然而,PCA方法却存在容易丢失重要信息的弱点。为了克服这一方法的弱点,提出分块PCA,并以此为基础形成一种提取细胞周期调控基因的新方法。通过理论分析和对酵母微阵列数据的仿真实验研究,表明这种方法可行、有效,能够全面地提取出隐含在方差较小变量中的细胞周期调控基因,并能够给予实验结果较好的生物意义解释,在微阵列数据处理中具有应用前景。

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G_1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响

目的 探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1 期相关调控因子的影响。 方法 通过细胞转染技术将PKCαcDNA正向插入的真核表达质粒PXJ4 1 PKCα导入正常肝细胞 (L 0 2 ) ,并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )检测细胞的生长曲线 ,细胞周期以及细胞对G1 期相关调控因子cylinD1和cyclinE的影响。 结果 构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,过表达PKCα可促进L 0 2细胞增殖 ,促进细胞由G1 期向S期的过渡 ;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升 ,反之表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )增殖被抑制 ,阻抑细胞由G1 期向S期的过渡 ,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降。 结论 从正反两个方面表明 ,PKCα可通过作用于G1 期相关周期蛋白的水平影响G1 S期的进程。

细胞周期调控基因p21^(WAF1/CIP1)与肿瘤

对细胞周期运转机制的研究,揭示了肿瘤发生的细胞调控机制紊乱、分化受阻的分子机理。p21^(WAF1/CIP1)(简称p21)是最早发现并克隆的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白,参与细胞多种功能。近年发现p21基因多态性及阳性表达与多种肿瘤的生物学行为有关,新近研究更显示出p21介导的基因治疗改传统的破坏性肿瘤治疗策略为诱导肿瘤细胞分化新策略的前景。本文从基因分子水平对p21与人类肿瘤发生、发展的关系及其临床意义作一综述。

人DNA修复基因hR24L参与细胞周期检定点调控

目的：研究酵母ＲＡＤ２４Ｌ基因功能，克隆人类同源物。方法：分离ＲＡＤ２４基因区域ｒａｄ２４Ｌ突变株，以人的ｃＤＮＡ表达文库转化突变株，筛选回复表型；大剂量Ｘ线照射观察细胞周期。结果：ｒａｄ２４Ｌ对紫外线敏感，从转化文库后的回复表型中克隆出人类ｈＲ２４Ｌ全长ｃＤＮＡ。结论：克隆的人类ＤＮＡ修复基因ｈＲ２４Ｌ，它能校正ｒａｄ２４Ｌ的突变表型，参与细胞周期检定点调控。

一种基于基因表达模型识别酵母细胞周期条件特异调控子网的方法(英文)

由高通量微阵列技术产生的数据集可以用于解释生物系统基因调控的未知机制.生物过程是动态的,所以很有必要关注某些条件下特异的基因调控子网络.细胞周期是一个基本的细胞过程,识别酵母的细胞周期特异调控子网是理解细胞周期过程的基础,并且有助于揭示其他细胞条件的基因调控机理.使用一个基因表达微分方程模型(GEDEM),从静态网络中识别了动态的细胞周期相关调控关系.与已经报道的细胞周期相关调控相互作用相比,该方法识别了更多的真实存在的条件特异调控关系,取得了比当前的方法更好的性能.在大数据集上,GEDEM 识别了具有高敏感性和特异性的调控子网.组合调控的深入分析显示,条件特异调控子网的转录因子之间的相关性呈现出比静态网络中转录因子相关性更强,这说明条件特异网络比静态网络更加接近真实情况.另外,GEDEM 方法还识别更多潜在的共调控转录因子.

FRIL蛋白体外维持脐血造血干/祖细胞的作用及细胞周期调控基因的表达

为探讨新的豆类凝集素(Flt3 receptor-interacting lectin,FRIL)体外维持脐血CD34^+细胞的作用以及维持过程中细胞周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达及意义,我们利用FRIL维持培养脐血CD34^+细胞,对其增殖曲线、细胞周期及集落形成能力进行常规分析,并用半定量RT-PCR法分别测定FRIL体外维持不同时间后脐血CD34^+细胞中周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达变化。结果显示,FRIL培养的CD34^+造血干/祖细胞的增殖趋势平缓,整个培养期间细胞增殖倍数不超过起始的3倍;14d之前,FRIL培养细胞的高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)形成集落数与FL组无差别,其后则维持高于FL的情况。细胞周期分析则显示,在28d的培养过程内,利用FRIL培养的细胞始终有80%以上维持在G0期;而周期调控基因HTm4及HTm4S在刚分离的脐血CD34^+细胞中的表达水平较高;但培养1d后,几乎检测不到HTm4基因的表达;培养3～14d,该基因的表达回升并持续维持在高水平。而HTm4S基因的表达在第7d达最高水平,其余时间基本呈稳定表达。转染HTm4和HTm4S,亚细胞定位结果显示HTm4主要定位于核周围,而HTm4S则定位于整个胞浆,由此可能导致它们功能的区别。以上结果提示,长期培养体现出FRIL在维持造血干/祖细胞多能性上的优势;

细胞周期中胃癌相关基因的研究进展

胃癌是世界上主要的癌症之一，现已公认，它是一个多因素、多基因共同作用所致的疾病。多种基因的异常表达导致了细胞的凋亡减少、增殖增加及细胞去分化等多个细胞生命活动，最终引起细胞的失控性生长，而这些基因的异常表达最终都要汇聚到对细胞周期的调控上来，使细胞周期发生紊乱。eDNA microarray技术和蛋白质组学等方法，能对细胞周期中异常表达的基因进行广泛的筛选。从而发现新的胃癌相关基因，最终明确对胃癌发生发展起决定作用的基因。本文通过对细胞周期各个环节中。目前重点研究的关键基因的简单介绍，阐释细胞周期紊乱在胃癌研究中的意义。