存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

O-GlcNAc转移酶介导的Kruppel样因子5 O-GlcNAc糖基化修饰调控细胞周期素D1参与结直肠癌发生、发展实验研究

目的:探讨O-GlcNAc转移酶(OGT)通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定Kruppel样因子5(KLF5)蛋白并上调细胞周期素D1(CCDN1)表达参与结直肠癌(CRC)发生、发展的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析KLF5 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CRC细胞中KLF5的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。通过生物信息学方法分析KLF5的靶基因和潜在结合位点,并通过双荧光素酶实验证实KLF5蛋白可与CCDN1结合,采用RT-qPCR检测KLF5对CCDN1 mRNA的影响。抑制KLF5并过表达CCDN1,分析KLF5是否通过正调控CCDN1促进细胞增殖和促进细胞进入G 1期。采用生物信息学分析KLF5蛋白是否存在O-GlcNAc糖基化位点,OGT mRNA和蛋白在结直肠癌组织中的表达以及OGT和KLF5表达的相关性。使用OGT抑制剂OSMI-1处理CRC细胞,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析KLF5蛋白表达,O-GlcNAc糖基化蛋白表达水平通过免疫荧光实验检测。并用Western blot法检测OSMI-1和放线菌酮(CHX)处理后KLF5蛋白的稳定性。最后抑制OGT并过表达KLF5,分析OGT是否通过正调控KLF5促进CCDN1表达。结果:KLF5 mRNA和蛋白在CRC中高表达。KLF5在CRC细胞中高表达并可促进细胞增殖和促进细胞进入G 1期。CCND1是KLF5的靶基因并可与CCND1靶向结合。KLF5通过正调控CCND1促进细胞增殖和促进细胞由G 1期向S期转化。生物信息学分析证实KLF5蛋白存在O-GlcNAc糖基化位点。OGT mRNA和蛋白在CRC中高表达,并且OGT和KLF5表达水平呈正相关。抑制OGT表达可降低O-GlcNAc糖基化蛋白和KLF5蛋白水平,并可降低KLF5蛋白的稳定性。OGT通过正调控KLF5上调CCND1表达。结论:KLF5通过正调控CCND1促进CRC细胞增殖,并促进细胞进入G 1期。OGT通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定KLF5并上调CCND1表达。

位点特异DNA甲基化调控细胞周期素D1基因

DNA甲基化是基因表达调控的重要方式,一般被认为以CpG岛形式发挥作用;近年的研究表明,位点特异的DNA甲基化以元件(cis-regulatory element)的形式在生物微进化以及基因精细调控中发挥重要作用。我们的研究结果显示,曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)导致细胞周期蛋白D1基因表达下调,以及其核心启动子的+65到+77之间的两段串联CpG序列发生DNA甲基化。报告基因结果显示,由细胞周期素D1核心启动子片段驱动的报告基因活性在TSA处理后下降到原来0.12,而前段(A)突变与后段(B)突变时,报告基因活性分别下降到原来1/7.6与1/8.36,双突变则下降到原来1/7.51。对于CMV启动子嵌合15 bp片段驱动的报告基因活性,野生型、A、B与AB双突变型报告基因活性分别下降1/1.48、1/1.17、1/1.51以及1/1.21。体外甲基化研究结果显示,与对照组相比,M.SssⅠ处理组的启动子活性中,野生型活性下降到原来1/8800,A突变型活性下降到原来1/2700,B突变型活性下降到原来1/4156,双突变型活性下降到原来1/6222。应用M.HhaⅠ处理进一步区分甲基化位点,A和B突变型报告基因活性分别下降到原来1/1.11和1/1.40。有趣的是,比对发现劳亚兽总目的+66位点为T。由此,我们联合应用DNA定点突变与体外DNA甲基化模拟技术,研究了细胞周期蛋白D1基因位点DNA甲基化元件的作用。我们的研究表明,细胞周期蛋白D1基因核心启动子的+65位点的甲基化在转录调控过程中可能发挥关键作用,为位点特异甲基化在基因精细调控的机制研究提供实验数据。

细胞周期素E、D1与增殖细胞核抗原在肝癌中的表达及临床意义

目的研究肝癌组织中细胞周期素E(cyclin E)、细胞周期素D1(cyclin D1)与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,探讨其在肝癌发生发展中的作用及临床意义。方法用免疫组化链霉菌素-生物素(SP)法,对术前未使用过化疗、放疗及免疫治疗的60例肝癌组织及35例癌旁肝组织进行检测。结果cyclin Ec、yclin D1与PCNA的表达在肝癌组织中高于癌旁肝组织(P<0.01),在分化差的和有转移的肝癌中表达高于分化好的和无转移的,而且cyclin E与cyclin D1的表达密切相关(P<0.01)。结论cyclin E、cyclin D1与PCNA表达与肝癌的增殖、分化、转移有关,其表达状况可以作为判断恶性程度及预后的指标。

细胞周期素G_1和G_2在膀胱癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌(尿路上皮癌)中的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2000-2006年有完整临床和病理资料的膀胱移行细胞癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱移行细胞癌和5例癌旁组织中细胞周期素G1和G2的表达水平。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对细胞周期素G1和G2的表达进行定量分析,并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果细胞周期素G1在膀胱移行细胞癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达。而细胞周期素G2在膀胱移行细胞癌中呈低表达,癌旁组织中呈高表达。膀胱移行细胞癌与癌旁组织相比,差异有显著性(P<0.05)。随着移行细胞癌组织中细胞周期素G1表达的增高,周期素G2的表达却显著下降,两者呈显著负相关(P<0.01)。结论细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌与癌旁组织中对细胞周期调控和/或DNA修复起了重要作用,并参与了诱导细胞凋亡的过程。

乙型和丙型肝炎病毒对细胞周期素及细胞周期素依赖性蛋白激酶的调节

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝细胞癌(HCC)发生发展之间的密切关系,早已被大量的临床医学和临床流行病学资料所证实[1].随着细胞周期(cell cycle)调节的分子生物学机制研究不断深入,特别是关于细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)的发现,使得细胞周期这一经典的概念又有了新的内容,大大促进了肿瘤形成的分子生物学研究的进展[2].

番茄红素上调细胞周期素依赖性激酶4和细胞周期素D1的表达促进人外周血内皮祖细胞周期进展

目的探讨番茄红素对人外周血内皮祖细胞活性、周期调控的作用及其分子机制。方法体外原代培养人外周血内皮祖细胞,采用噻唑蓝法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应、实时聚合酶链反应和Western blot方法检测番茄红素对内皮祖细胞活性、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白细胞周期素依赖性激酶4和细胞周期素D1的表达情况。结果噻唑蓝比色实验显示,不同浓度(0.01、0.1、1μmol/L)番茄红素能显著增加内皮祖细胞的生长能力,且呈一定的量效与时效关系;流式细胞仪分析显示,番茄红素呈浓度依赖性使内皮祖细胞的G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增多;逆转录聚合酶链反应、实时聚合酶链反应和Western blot分析表明,番茄红素呈浓度依赖性使内皮祖细胞中细胞周期素依赖性激酶4和细胞周期素D1表达上调。结论番茄红素对内皮祖细胞的促进生长作用,可能与上调细胞周期素依赖性激酶4、细胞周期素D1的表达,使G0/G1期细胞比例减少有关。

胆道梗阻肝脏部分切除后肝细胞周期素及其依赖性激酶mRNA的表达变化

目的 检测胆道梗阻肝脏部分切除术 (PH)后肝细胞周期素 (cyclin)D1 、E及细胞周期素依赖性激酶CDK2、CDK4mRNA的表达变化。方法 Wistar大鼠随机分为正常 70 %肝部分切除组 (N PH)、胆道梗阻 (BDO)胆流再通 (RBF) 70 %PH组 (BDO PH)及胆道梗阻胆流再通组 (BDO RBF)。RT PCR法检测肝细胞cyclinD1 、cyclinEmRNA及CDK2、CDK4mRNA表达。结果 BDO PH后肝细胞cyclinD1 mRNA和CDK4mRNA、cyclinEmRNA和CDK2mRNA表达变化时限一致 ,其表达增长缓慢 ,表达高峰晚于N PH组 1 2～ 2 4h ,分别于 70 %PH后 2 4h及 48h达到高峰 ,且其高峰表达值亦明显低于N PH组。结论 胆道梗阻大鼠 70 %PH后肝细胞cyclinD1 mRNA、cyclinEmRNA及CDK2mRNA、CDK4mRNA表达高峰延后 。

肺癌细胞株中发现一种细胞周期素A2的异常剪接体

目的检测细胞周期素(cyclinA1和cyclinA2)在4种肿瘤细胞中的表达,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用RT PCR和DNA测序技术观察cyclinA1和cyclinA2的基因表达并进行序列分析。结果cyclinA1在4种肿瘤细胞中均未检测到表达,而cyclinA2在4种肿瘤细胞中均有表达;在肺癌细胞株(LTEP a2)细胞中,发现一种cyclinA2异常的剪接体,其保留了第四内含子,而缺失了第五外显子,其序列编码蛋白质也发生了突变,只保留了5′端194氨基酸。结论细胞周期素表达与肿瘤发生有一定相关性,LTEP a2细胞中存在细胞周期素A2异常表达,其机制与作用有待进一步的研究。

细胞周期素D_1、CDK4和VEGF在舌鳞状细胞癌中的表达及相互关系研究

目的探讨细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素依赖激酶4(CDK4)和血管内皮生长因子(VEGF)在舌鳞状细胞癌中的表达及其作用。方法采用免疫组织化学方法检测cyclin D1、CDK4和VEGF在39例舌鳞癌和15例正常舌黏膜中的表达情况,分析其与舌鳞癌组织学分级和颈部淋巴结状态之间的关系。结果cyclin D1、CDK4和VEGF在舌鳞癌中的阳性表达率分别为69.2%、61.5%和66.7%,均高于正常舌黏膜,差异均有显著性意义(均P<0.01),cyclin D1、CDK4和VEGF在舌鳞癌中的表达均有相关性(均P<0.01),伴有颈部淋巴结转移组的阳性表达率高于无转移组。结论cyclin D1、CDK4和VEGF在舌鳞癌组织中呈过表达,三者之间的相互作用与舌鳞癌增殖、侵袭和转移密切相关。

结直肠腺癌术后组织中细胞周期素A1、E与磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的关系

目的检测结直肠腺癌术后组织中细胞周期素(Cyclin)A1、Cyclin E和磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)的表达,分析三者在不同临床病理特征中的意义及相关性。方法 102例结直肠腺癌术后组织为观察组,距肿瘤边缘>5 cm的非肿瘤性结肠黏膜组织23例为对照组。应用免疫组化SP法检测两组中Cyclin A1、Cyclin E和PTEN的表达。结果观察组中Cyclin A1和Cyclin E的表达明显高于对照组,PTEN表达明显低于对照组(P<0.01)。观察组中Cyclin A1、Cyclin E和PTEN阳性率均与肿瘤最大径和增殖指数相关,Cyclin A1、Cyclin E表达与肿瘤浸润深度和脉管累犯相关。相关性分析显示观察组中Cyclin A1和Cyclin E表达呈正相关。结论结直肠腺癌组织中Cyclin A1、Cyclin E和PTEN异常表达对肿瘤形成和进展均有一定促进作用。Cyclin A1和Cyclin E具有正向协同作用。

细胞周期素G_1、G_2在皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期素G1、G2与血管瘤发生发展及退化的关系。方法采用免疫组织化学S-P法对50例血管瘤和5例正常皮肤组织检测细胞周期素G1、G2的表达;对所获得的检测结果进行图像分析处理。结果增生期血管瘤内皮细胞胞浆或胞核内cyclin G1呈强阳性表达,退化期血管瘤内皮细胞胞浆内cyclin G1无表达;增生期血管瘤内皮细胞胞浆内无cyclin G2表达,退化期血管瘤内皮细胞胞浆内cyclin G2呈强阳性表达。增生期组与退化期组、正常皮肤组分别相比,细胞周期素G1阳性表达差异有显著性(P<0.05),退化期组与增生期组、正常皮肤组之间,细胞周期素G2的阳性表达差异有显著性(P<0.05)。结论细胞周期素G1、G2在血管瘤发生、发展及退化中起着重要作用。

细胞周期素D1、Ki67在鼻咽癌中的表达及意义(英文)

目的 检测cyclinDl及Ki67在鼻咽癌中的表达,探讨其与鼻咽癌的生物学行为及预后的关系。方法 收集我院1996年鼻咽癌放疗前活检组织石蜡标本56例,应用cyclinDl及Ki67单克隆抗体进行SP法免疫组化染色,并对患者进行定期随访,统计分析其生物学行为及预后。结果 cyclinDl 阳性表达范围为0%～54%,其中30例(53.6%)高表达;26 例(46.4%)低表达。Ki67阳性表达范围为0%～31%,其中16例(28.6%)高表达(HPI);40例(71.4%)低表达(LPI)。cyclinDl低表达或Ki67高表达者,对射线敏感,预后较好;反之,cyclinDl高表达或Ki67低表达者对射线较为抗拒,预后较差。结论cyclinDl、Ki67可分别作为评估鼻咽癌患者放射敏感性和预后的独立指标,并为患者的个体化治疗提供了理论依据。

细胞周期素依赖激酶抑制剂研究进展

过去十年中,有关细胞增殖周期的研究进展十分迅速.细胞增殖周期受细胞周期素依赖激酶(cyclin depend kinase,CDKs)调节.CDKs与细胞周期素结合被活化,其中cyclin作为调节亚基、CDKs作为催化亚基、cyclin-CDKs复合物对细胞周期具有正调节的作用,促进细胞分裂.cyclin-CDKs复合物的抑制因子:细胞周期素依赖激酶抑制剂(cyclindepend kinase inhibitor,CKIs,CDKIs)对细胞周期具有负调节的作用.CKIs通过与cyclin-CDKs1复合物再形成稳定的复合物,抑制CDKs催化亚单位的活性而发挥负调节作用,从而阻止细胞分裂.

多发性骨髓瘤患者骨髓细胞周期素D1、D3、p21的表达及与预后的相关性研究

目的:检测多发性骨髓瘤患者骨髓中细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素D3(Cyclin D3)、p21的表达情况,并探究其表达水平与多发性骨髓瘤患者预后的相关性。方法:选取2015-07—2016-12在本院血液科确诊并住院治疗的多发性骨髓瘤患者80例为多发性骨髓瘤组,选取同期本院诊断为营养性贫血患者20例为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测所有研究对象骨髓中Cyclin D1、D3、p21 mRNA表达水平;通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线,评估骨髓中Cyclin D1、D3、p21表达水平对多发性骨髓瘤患者预后的影响;采用Cox回归分析多发性骨髓瘤患者预后的影响因素。结果:多发性骨髓瘤组Cyclin D1、D3 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),p21 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05)。Cyclin D1、D3高表达组术后3年总生存率低于Cyclin D1、D3低表达组(P<0.05),p21高表达组术后3年总生存率高于p21低表达组(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,Cyclin D1、D3高表达、p21低表达是影响多发性骨髓瘤患者预后的独立危险因素(HR=2.884,95%CI为1.714-4.853;HR=2.575,95%CI为1.266-5.239;HR=2.979,95%CI为1.671-5.312;P均<0.05)。结论:Cyclin D1、D3、p21或可作为多发性骨髓瘤的病情评估及不良预后预测的的潜在生物学指标。

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞细胞周期素依赖性激酶的影响

目的 探讨视黄酸 (retinoicacid ,RA)及其诱导的反义 (anti sense,AS)cyclinD1对HL 6 0细胞的细胞周期素激酶CDK4的影响。方法 通过构建含有视黄酸反应元件 (retinoicacidresponseelement,RARE)的反义cyclinD1RNA表达载体 pCI neo/RARE3 TK/AscyclinD1,使反义cyclinD1的表达可受视黄酸诱导调控。以脂质体转染HL 6 0白血病细胞后 ,运用MTT比色法检测细胞增殖功能、NBT还原实验观测细胞分化状况 ,RT PCR以及western blot等方法观测视黄酸处理后CDK4的mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 RA处理后 ,细胞生长显著减慢 ,分化能力明显增强 ,CDK4mRNA和蛋白表达水平均有所降低 ,其中 ,以反义cyclinD1转染细胞经RA处理后变化更为显著。结论 RA及其诱导的反义cyclinD1对HL 6

三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D_1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响(英文)

背景:国内外多年的研究表明稀土化合物在体内、外均具有明显的抑瘤性能。目的:观察三氯化镧对大鼠肝癌细胞细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响。设计:对照观察。单位:吉林大学第一临床医院肾病科。材料:实验于2002-06/2003-07吉林大学基础医学院组织胚胎教研室细胞培养室完成。CBRH-7919细胞按三氯化镧剂量不同分为4组,即空白对照组,0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧组,每组分别培养1,3,5d,每组细胞各接种6复孔。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧,培养后1,3,5d观察CBRH-7919细胞生长变化。①运用流式细胞术计算各期细胞所占比例。②四甲基偶氮唑蓝实验测定各孔吸光度值(A值)。③免疫细胞化学检测与G1期调控有关的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的变化情况。主要观察指标:CBRH-7919细胞在不同剂量和不同培养时间的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的表达情况。结果:①三氯化镧对CBRH-7919细胞生长的作用:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后3,5d吸光度值低于空白对照组(3d分别为1.140±0.070,0.706±0.092,1.461±0.087;5d分别为1.888±0.020,0.625±0.037,2.544±0.032),差异有显著性意义(P<0.05,0.001)。②三氯化镧对CBRH-7919细胞G0/G1期百分率的影响:1.0mmol/L三氯化镧组培养后1,3,5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(60.70±0.20)%,(39.49±0.67)%;(61.66±0.97)%,(45.56±1.00)%;(69.92±0.18)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.01,0.001);0.1mmol/L三氯化镧组培养后5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(58.88±0.73)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.05)。③三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4阳性表达的影响:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后1d细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4表达(A)明显低于空白对照组(分别为562±35,453±22,860±82;705±84,680±28,762±16),差异有显著性意义(P<0.05,0.01,0.001)。结论:三氯化镧可通过下调细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。

汉坦病毒感染对体外培养的内皮细胞细胞周期素表达的影响

为研究汉坦病毒感染对体外培养的脐静脉内皮细胞细胞周期素 E (cyclin E)和细胞周期素 D1 (cyclin D1 )表达的影响 ,用重型、中轻型肾综合征出血热患者及正常人血清感染体外培养的脐静脉内皮细胞 ,应用 ABC免疫组化染色方法和多媒体彩色病理图文分析系统定量分析感染汉坦病毒后内皮细胞周期素表达的变化。结果显示 :重型组内皮细胞中 cyclin E、 cyclin D1 的表达均明显低于阴性对照组和中轻型组 ;中轻型组细胞 cyclin E和 cyclin D1 的表达与阴性对照组间均无明显差异 (P>0 .0 5 )。提示 :汉坦病毒对血管内皮细胞有直接致病变作用 ,可减慢细胞周期 ,抑制细胞增殖 。

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A(CyclinA)、细胞周期素B(CyclinB1)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果:芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论:芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。