细胞周期素依赖激酶抑制剂研究进展

过去十年中,有关细胞增殖周期的研究进展十分迅速.细胞增殖周期受细胞周期素依赖激酶(cyclin depend kinase,CDKs)调节.CDKs与细胞周期素结合被活化,其中cyclin作为调节亚基、CDKs作为催化亚基、cyclin-CDKs复合物对细胞周期具有正调节的作用,促进细胞分裂.cyclin-CDKs复合物的抑制因子:细胞周期素依赖激酶抑制剂(cyclindepend kinase inhibitor,CKIs,CDKIs)对细胞周期具有负调节的作用.CKIs通过与cyclin-CDKs1复合物再形成稳定的复合物,抑制CDKs催化亚单位的活性而发挥负调节作用,从而阻止细胞分裂.

Survivin、细胞周期素依赖激酶4、细胞增殖相关抗原在急性白血病患儿中表达的意义

目的探讨Survivin、细胞周期素依赖激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞增殖相关抗原(Ki-67)在儿童急性白血病(AL)中的表达及其相关性,同时观察其与AL临床分型和预后的关系。方法应用免疫组织化学链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)方法检测37例AL患儿骨髓细胞Survivin、CDK4、Ki-67表达,对照组10例为非恶性血液病且骨髓正常的儿童。结果37例AL患儿中,Survivin表达阳性率为45.9%,CDK4表达阳性率为56.8%,Ki-67表达阳性率为40.5%,均显著高于正常骨髓组织(P均<0.05);Survivin与CDK4表达呈强相关(P=0.007),Survivin与Ki-67表达呈强相关(P=0.008)。结论Survivin、CDK4、Ki-67在AL患儿中均过度表达,共同参与AL患儿白血病细胞凋亡和增殖的调控过程。联合检测Survivin、CDK4、Ki-67有助于AL的诊断、预后及疗效判断。

细胞周期素依赖激酶4在颌骨软骨肉瘤的表达及意义

目的 分析细胞周期素依赖激酶 4(CDK4)在颌骨软骨肉瘤的表达及意义 .方法 利用免疫组化法检测 CDK4在2 0例颌骨软骨肉瘤、8例骨软骨瘤和 8例骨质增生中的表达 .结果 6 5 .0 % (13/ 2 0 )的软骨肉瘤中 CDK4呈阳性表达 ,CDK4表达率随病理学分级的升高呈增高趋势 ,但未见统计学差异 (P>0 .0 5 ) ;CDK4在骨软骨瘤和骨质增生中的阳性表达率分别为 12 .5 % (1/ 8)和 0 (0 / 8) ,且均与软骨肉瘤有显著性差异 (P<0 .0 5 ) .结论 CDK4在颌骨软骨肉瘤中过表达并与其发生发展相关 .

细胞周期素依赖激酶抑制因子p16表达与神经母细胞瘤发生发展的相关性研究

目的 :探讨细胞周期素依赖激酶抑制因子 p1 6表达与神经母细胞瘤 ( NB)发生发展的关系。方法 :应用原位杂交和免疫组织化学技术检测 2 6例 NB标本中 p1 6m RNA和蛋白产物表达。结果 :2 6例 NB中 ,应用原位杂交检测 p1 6m RNA表达未见阳性染色细胞 ;免疫组织化学技术检测发现 3例标本有 p1 6蛋白表达阳性细胞。结论 :神经母细胞瘤中无 p1 6表达或表达很低 ,其发生发展可能与细胞周期素依赖激酶抑制因子p1 6不表达或低表达、不能抑制细胞周期素依赖激酶促进细胞周期演进的功能关系密切。

存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

视黄酸影响大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达

目的 研究视黄酸影响培养大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达。 方法 分离、培养正常大鼠肝星状细胞，传代细胞经1ng/ml转化生长因子β1刺激后再以1nmol/ml视黄酸处理，然后采用MTT法、免疫细胞化学法、原位杂交技术并结合图像定量分析观察细胞增殖、α-平滑肌肌动蛋白、视黄酸受体β2及p16、p21与p27等基因的表达情况。 结果 视黄酸明显抑制星状细胞增殖（41.50%, P＜0.05）、降低α-平滑肌肌动蛋白水平（55.09%, P＜0.05），并诱导视黄酸受体β2基因的表达。同时，视黄酸增高p16蛋白水平（218.75%, P＜0.05），促进p21蛋白表达；而两组细胞均未能以免疫细胞化学法检出p27。此外，视黄酸对p16、p21与p27 mRNA水平均无影响。 结论 视黄酸抑制由转化生长因子β1介导的大鼠肝星状细胞激活与其上调p16、p21基因转录后表达有关。

神经母细胞瘤细胞周期素依赖激酶抑制因子p27表达检测及其意义

目的 探讨细胞周期素依赖激酶 (CDKs)抑制因子p2 7表达对神经母细胞瘤 (NB)发生发展的影响。方法 检测 2 6例NB标本中p2 7基因表达 ,结合增殖细胞核抗原 (PCNA)表达和细胞凋亡检测结果进行分析。结果 III及IVS期、神经节母细胞瘤 (GNB)、预后好组织 (FH )型标本p2 7表达指数 (EI)为 2 7.2 8± 13 .61、3 4 .60± 12 .16、2 6.2 9± 14 .71,显著高于Ⅲ～Ⅳ期、NB、预后差组织 (UFH )型标本 15 .81± 12 .92、18.77± 14 .77、13 .3 4± 13 .79(P值均 <0 .0 5 ) ;Ⅰ～Ⅱ或IVS期、GNB、FH型标本PCNAEI为 9.47± 8.43、0 .83± 0 .5 7、11.0 5± 10 .71则显著低于Ⅲ～Ⅳ期、NB、UFH型标本 2 7.0 5± 19.2 4、2 4.44± 17.42、3 2 .0 9± 17.0 4(P值均 <0 .0 5 )。p2 7EI与有丝分裂核碎裂指数 (MKI)呈负相关 (n =2 6,r =-0 .5 13 ) ,与NB细胞凋亡指数呈正相关 (n =17,r =0 .490 ) ,与存活时间呈正相关 (n =12 ,r =0 .63 5 ) ;PCNAEI与MKI呈正相关 (n =2 0 ,r =0 .90 3 )。结论 p2 7抑制细胞增殖周期及诱导细胞凋亡的功能 。

维甲酸对人胃癌细胞HGC-27增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(P16、P21、P27)表达的影响

目的 观察维甲酸 (RA)作用人胃癌细胞系GHC - 2 7后 ,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白 (CKIs) (P16、P2 1、P2 7)表达的变化 ,探讨RA抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化的作用机制。方法 不同浓度RA作用HGC 2 7细胞后 ,MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,Westermblot、Northernblot分别检测CKIs(P16、P2 1、P2 7)蛋白、mRNA水平。结果 在一定浓度范围之内 ,RA能抑制HGC 2 7细胞增殖 ,细胞周期发生G1→S期阻滞 ,并上调P2 1、P2 7的蛋白、mRNA水平 ,但对P16的蛋白、mRNA水平没有影响。结论 RA能通过上调CKIs尤其是P2 1、P2 7的表达而抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化。

复方甘草甜素下调细胞周期素依赖性激酶1启动子表达

目的:了解复方甘草甜素调节细胞周期素依赖性激酶 1(CDK1)基因启动子的活性,为甘草甜素的作用机制提供理论依据． pCAT3-basic空载体的12．4倍,是甘草甜素刺激转染pCAT3- CDK1-P的HepG2细胞的9．3倍．结论:复方甘草甜素可以下调CDK1基因启动子的活性,进而下调CDK1基因的表达,为深入了解甘草甜素在肝纤维化和肝癌中的作用机制提供新的分子生物学依据．

番茄红素上调细胞周期素依赖性激酶4和细胞周期素D1的表达促进人外周血内皮祖细胞周期进展

目的探讨番茄红素对人外周血内皮祖细胞活性、周期调控的作用及其分子机制。方法体外原代培养人外周血内皮祖细胞,采用噻唑蓝法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应、实时聚合酶链反应和Western blot方法检测番茄红素对内皮祖细胞活性、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白细胞周期素依赖性激酶4和细胞周期素D1的表达情况。结果噻唑蓝比色实验显示,不同浓度(0.01、0.1、1μmol/L)番茄红素能显著增加内皮祖细胞的生长能力,且呈一定的量效与时效关系;流式细胞仪分析显示,番茄红素呈浓度依赖性使内皮祖细胞的G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增多;逆转录聚合酶链反应、实时聚合酶链反应和Western blot分析表明,番茄红素呈浓度依赖性使内皮祖细胞中细胞周期素依赖性激酶4和细胞周期素D1表达上调。结论番茄红素对内皮祖细胞的促进生长作用,可能与上调细胞周期素依赖性激酶4、细胞周期素D1的表达,使G0/G1期细胞比例减少有关。

乙型和丙型肝炎病毒对细胞周期素及细胞周期素依赖性蛋白激酶的调节

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝细胞癌(HCC)发生发展之间的密切关系,早已被大量的临床医学和临床流行病学资料所证实[1].随着细胞周期(cell cycle)调节的分子生物学机制研究不断深入,特别是关于细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)的发现,使得细胞周期这一经典的概念又有了新的内容,大大促进了肿瘤形成的分子生物学研究的进展[2].

细胞周期素依赖性激酶、细胞周期调控与肝纤维化

肝纤维化是多种肝脏疾病的共同病理学结局.在肝纤维化过程中,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)发生活化,表型发生改变,使其具有收缩性、再生性,并能生成胶原成分.肝纤维化的发生发展与活化的HSCs的增殖情况有关;而细胞增殖情况则与细胞周期素依赖性激酶、细胞周期调控密切相关.但是,目前对与此相关的分子机制尚未明确.此综述就近年来与肝纤维化过程中细胞周期素依赖性激酶及细胞周期调控方面的研究加以总结,以揭示可能存在的引起肝纤维化的部分机制.

胆道梗阻肝脏部分切除后肝细胞周期素及其依赖性激酶mRNA的表达变化

目的 检测胆道梗阻肝脏部分切除术 (PH)后肝细胞周期素 (cyclin)D1 、E及细胞周期素依赖性激酶CDK2、CDK4mRNA的表达变化。方法 Wistar大鼠随机分为正常 70 %肝部分切除组 (N PH)、胆道梗阻 (BDO)胆流再通 (RBF) 70 %PH组 (BDO PH)及胆道梗阻胆流再通组 (BDO RBF)。RT PCR法检测肝细胞cyclinD1 、cyclinEmRNA及CDK2、CDK4mRNA表达。结果 BDO PH后肝细胞cyclinD1 mRNA和CDK4mRNA、cyclinEmRNA和CDK2mRNA表达变化时限一致 ,其表达增长缓慢 ,表达高峰晚于N PH组 1 2～ 2 4h ,分别于 70 %PH后 2 4h及 48h达到高峰 ,且其高峰表达值亦明显低于N PH组。结论 胆道梗阻大鼠 70 %PH后肝细胞cyclinD1 mRNA、cyclinEmRNA及CDK2mRNA、CDK4mRNA表达高峰延后 。

HSV-1感染后认知功能障碍小鼠海马组织细胞周期素依赖性蛋白激酶5mRNA的表达

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)感染后认知功能障碍小鼠海马组织中的表达变化及其作用。方法将雄性C57BL/6小鼠100只随机分为模型组、假手术组及正常组。采用颅内注射法建立单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)动物模型,感染后20 d进行水迷宫实验评价认知功能,应用RT-qPCR方法检测小鼠海马组织CDK5 mRNA的相对表达量。结果与正常组及假手术组比较,模型组小鼠学习、记忆能力受损明显,模型组小鼠海马组织CDK5的表达水平明显升高(P<0.05)。结论 CDK5有可能参与了HSV-1感染后小鼠认知功能障碍的发生。

细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂治疗实验性单纯疱疹性脑炎的效果及其机制

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK)抑制剂(Olomoucine)治疗实验性单纯疱疹性脑炎(HSE)效果及其机制。方法45只小鼠随机分为1型单纯疱疹病毒(HSV-1)假感染组、感染对照组和Olo-moucine治疗组,每组15只。应用流式细胞术测定各组脑细胞表面抗原CD11b的表达;使用逆转录-聚合酶链反应方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的表达;TUNEL染色检测神经细胞凋亡,脑组织病理切片观察组织形态学变化。另40只小鼠HSV-1感染后随机分为Acyclovir治疗组和Olomoucine治疗组,每组20只;2周后应用Kaplan-Meier法进行生存率比较。结果HSV-1感染后脑组织中CD11b阳性细胞、TNF-α、IL-6表达较假感染组显著增高(均P<0.01);TUNEL阳性细胞数明显增多;脑组织细胞变性、出血及炎性细胞浸润。Olomoucine治疗后,脑组织中CD11b阳性细胞、TNF-α、IL-6表达明显降低(均P<0.01),神经细胞凋亡减少,脑组织病理改变减轻。Olomoucine治疗组生存率较Acydovir治疗组显著提高(P<0.05)。结论Olo-moucine治疗可以减弱HSE小鼠脑组织的免疫病理损伤,保护神经细胞,改善其预后。

黄色羊驼皮肤细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)完整CDS区结构域分析

用RT-PCR法获得了黄色羊驼皮肤的CDK5完整CDS区,其长度为891bp,与其他哺乳动物相比,高度保守。通过对其结构域分析,发现羊驼CDK5编码区在第10-203位氨基酸间含有多个激活位点如ATP结合位点和P25底物结合位点(?)第1-9位氨基酸和第204-292位氨基酸为两个非活性部位,其中在第204-292位氨基酸中,亮氨酸排列与亮氨酸拉链结构相似,而且位于羊驼CDK5的C-端,可能是与基因转录调控有关。

免疫介导的脊髓运动神经元损伤过程中细胞周期素依赖蛋白激酶5的表达及意义

目的:研究免疫介导的神经元损伤过程中细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)表达的特征,探讨其损伤机制。方法:建立免疫介导的脊髓前角运动神经元损伤的模型,利用免疫组化方法观察脊髓前角运动神经元CDK5及p35/ p25的表达特征。结果:对照组豚鼠脊髓运动神经元CDK5及p35/p25主要在细胞核及细胞膜下表达,胞质着色淡;注射牛脊髓前角匀浆而无肢体瘫痪的豚鼠,脊髓运动神经元CDK5及p35/p25表达在数量上增加,强度上增强;有明显肢体瘫痪的豚鼠CDK5及p35/p25免疫反应阳性神经元数量明显减少,部分胞质内无着色。结论:CDK5及p35/ p25在神经元胞质内的易位表达,在免疫介导的神经元损伤过程中具有重要的作用。

血浆细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子、环腺苷酸反应元件结合蛋白水平与糖尿病视网膜病变关系研究

目的检测糖尿病视网膜病变(DR)病人血浆中细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子(P15INK4b)、环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)水平,探讨P15INK4b、CREB与DR发生发展的关系。方法选取2017年6月至2019年6月仙桃市第一人民医院收治糖尿病(观察组)198例作为研究对象,其中,非DR(非DR组)95例,DR(DR组)103例;根据病变阶段将DR病人分为非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)Ⅰ期组(24例)、NPDRⅡ期组(29例)、NPDRⅢ期组(26例)和增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)组(24例);同期健康体检者(对照组)200例作为对照。采集清晨外周血提取血浆、血清,蛋白质免疫印迹(Western blotting)法检测血浆P15INK4b、CREB水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;采用Pearson法分析DR病人血浆P15INK4b、CREB水平与血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平相关性;采用多因素logistic回归分析影响DR发生的因素。结果观察组血浆P15INK4b、CREB水平较对照组明显升高[(3.26±1.04)比(1.71±0.55),(0.84±0.26)比(0.53±0.16),P<0.05],血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平较对照组明显升高(P<0.05);DR组血浆P15INK4b、CREB水平较非DR组明显升高[(4.23±1.39)比(2.21±0.72),(1.01±0.33)比(0.65±0.21),P<0.05],血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平较非DR组明显升高(P<0.05);随着病变阶段升级,DR病人血浆P15INK4b、CREB水平、血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平逐渐升高(P<0.05);DR病人血浆P15INK4b、CREB水平与血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平均明显正相关(P<0.05);血浆P15INK4b、CREB、血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平均为影响DR发生的危险因素(P<0.05)。结论糖尿病病人血浆P15INK4b、CREB水平均明显升高,随DR的发生发展均异常表达,与血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平均关系密切,可能通过与TNF-α、TGF-β1、VEGF相互调控影响疾病发生发展,均为影响DR发生的危险因素,可作为DR发生和严重程度的标志物。