miR-367-3p调控细胞周期素D2重组蛋白表达对肺癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-367-3p调控细胞周期素D2重组蛋白(CCND2)表达对肺癌细胞增殖、迁移的影响。方法选取人肺癌细胞Calu、MSTO-211H、NCI-H2347、NCI-H1437、NCI-H1944、NCI-H647、人正常肺细胞HLF-a,qRT-PCR法测定细胞中miR-367-3p表达水平;将Calu细胞分为对照组、miR-367-3p NC组、miR-367-3p mimic组、miR-367-3p mimic+pc-CCND2组;CCK-8法测定Calu细胞活力;流式细胞仪测定细胞凋亡能力;Transwell实验测定细胞侵袭能力;划痕实验测定Calu细胞迁移能力;WB法测定Calu细胞CCND2及凋亡、侵袭相关蛋白表达;荧光素酶实验测定miR-367-3p与CCND2的靶向关系。结果miR-367-3p在人肺癌细胞中呈现低表达;与对照组比较,miR-367-3p mimic组Calu细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低,凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);CCND2过表达可逆转miR-367-3p过表达对Calu细胞活力、侵袭、迁移能力的抑制作用。荧光素酶实验结果显示,miR-367-3p与CCND2存在靶向调节关系。结论miR-367-3p可抑制人肺癌细胞Calu的增殖及迁移能力,可能是通过抑制CCND2实现的。

存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

细胞周期蛋白D2同源模建及其与CDKs抑制剂对接研究

细胞周期蛋白D2(CyclinD2,CCND2)在细胞中的异常表达会诱发肿瘤等疾病,设计高选择性CCND2药物对抑制肿瘤具有重要意义。本文选用PDB数据库中与CCND2一级序列同源性最高的3G33为模板蛋白建模,通过Loop环区能量优化最终得到具有较高合理性和可信度的三维蛋白结构模型,最优模型VerifyScore为100.920,预测获得10个可能的活性位点。构建药物小分子的最低能量结构,将小分子对接至蛋白活性位点,根据对接模型确定不同药物小分子与蛋白活性位点的相互作用方式,筛选细胞周期依赖性激酶(CDKs)类似物作为药物小分子配体,实验结果对进一步研究CyclinD2的结构、功能具有理论指导意义,也为相关疾病的临床治疗奠定了理论基础。

乳腺浸润癌组织中骨桥蛋白、环氧化酶-2和细胞周期素D1的表达及其意义

目的探讨骨桥蛋白（OPN）、环氧化酶-2（cox-2）和细胞周期素D1（CyclinD1）在乳腺浸润癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组化法检测70例乳腺浸润癌标本中三者的表达情况，并分析三者问的关系及其与临床病理特征的关系。结果：≤45岁和〉45岁患者OPN阳性表达率分别为78．8％和73．0％：肿块直径≤3 cm和〉3 cm者阳性表达率分别为79.3％和73．2％；I、Ⅱ、Ⅲ级浸润癌者阳性表达率分别为77．8％、73．8％和78．9％，组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。在无、有淋巴结转移组中OPN阳性率分别为62．5％和93.3％：在I～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期浸润癌中OPN的阳性表达率分别为68．O％和95．O％，差异均有统计学意义（P〈0．05）；OPN与ER、PR负相关，与CerbB2、COX-2、CyclinD1表达正相关。结论：OPN在乳腺癌的侵袭、转移过程中起重要作用．COX-2、CyclinD1可能为其协同分子。

环氧化酶-2和细胞周期素D1蛋白在胆管癌中的表达及其临床意义

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxy-genase-2,COX-2)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白在胆管癌(CHC)中的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法,检测50例胆管癌(CHC)和30例癌旁胆管组织(TAC)和20例正常胆管组织(NBDT)中COX-2和Cyclin D1蛋白表达水平。结果 CHC中COX-2和Cyclin D1蛋白阳性表达率分别为78.0%(39/50)和68.0%(36/50)。CHC中COX-2和Cyclin D1表达阳性率显著高于TAC和NBDT(P<0.05)。COX-2表达与CHCTNM分期和转移相关(P<0.05),而与CHC肿瘤分化程度无关(P>0.05);Cyclin D1表达与CHC TNM分期、肿瘤分化程度和转移相关(P<0.05)。结论 COX-2和Cyclin D1蛋白可作为评估CHC生物学行为和预后的参考指标。

人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能及反应性的相关性研究

目的探讨人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2(cyclin D2)的表达与卵巢功能及超排卵过程中卵巢反应性的相关性。方法收集48例行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者的卵巢黄素化颗粒细胞,根据取卵时卵泡发育数不同将卵巢反应性分为高反应组(12例)、中反应组(30例)及低反应组(6例)。采用免疫细胞化学方法检测颗粒细胞膜上cyclin D2及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测颗粒细胞cyclin D2 mRNA的表达水平;化学发光法测定基础血清卵泡刺激素(FSH),人绒毛膜促性腺激素(hCG)日E_2水平。分析颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达与IVF临床各项参数、卵巢反应性的关系以及和颗粒细胞增殖活性PCNA标记指数(PCNA-LI)的相关性。结果 (1)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白表达与年龄、基础FSH水平及促性腺激素(Gn)支数呈负相关(r=0.547,P<0.01;r=-0.456,P<0.05;r=0.451,P<0.05);cyclin D2蛋白表达与获卵数和hCG日E_2水平呈正相关(r=0.592,P<0.01;r=0.626,P<0.01);高、中和低反应三组cyclin D2蛋白表达有显著统计学差异(F=4.995,P<0.05)。(2)黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA表达与年龄、基础FSH水平呈负相关(r=-0.510,P<0.05;r=-0.891,P<0.01);与获卵数和hCG日E_2水平呈正相关(r=0.629,P<0.01;r=0.524,P<0.05);高、中和低反应三组cyclin D2 mRNA的表达有显著统计学差异(F=8.843,P<0.01)。(3)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白及mRNA表达与PCNA-LI均呈显著正相关(r=0.696,P<0.01;r=0.498,P<0.05)。结论黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达可反映卵巢储备功能并与卵巢反应性正相关。cyclin D2可能通过调节颗粒细胞的增殖分化参与卵泡的发育。

淫羊藿素通过调控黏着斑激酶及下游细胞外信号调节激酶/细胞周期蛋白D1和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

目的探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5μmol/L不同浓度的ICA给药干预72小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7肝癌细胞生存的影响;将Huh7肝癌细胞给与ICA高(10μmol/L)、中(5μmol/L)、低(2.5μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7肝癌细胞给与ICA IC 50值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析。另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析。结果ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在G1期发生阻滞(P<0.05)。另外,研究发现ICA可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1以及p-Akt、p-mTOR、p-S6的表达水平。结论ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长。

视网膜母细胞瘤蛋白、基质金属蛋白酶3和人细胞周期素D2在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨人细胞周期素D2(Cyclin-D2)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)和视网膜母细胞瘤蛋白(p Rb)在上皮性卵巢癌癌组织中的表达及与上皮性卵巢癌生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测80例上皮性卵巢癌和30例正常卵巢组织中Cyclin-D2、MMP-3和p Rb蛋白的表达。结果 Cyclin-D2、MMP-3和p Rb在上皮性卵巢癌癌中的阳性率分别为76.25%、73.75%和41.25%;Cyclin-D2和p Rb蛋白在上皮性卵巢癌癌中的表达与病理类型有关(P<0.05),MMP-3在上皮性卵巢癌中的表达与病理类型无关(P>0.05);Cyclin-D2、MMP-3和p Rb蛋白在上皮性卵巢癌复发组中的阳性率与无复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Cyclin-D2与p Rb在上皮性卵巢癌中的表达呈负相关,与MMP-3表达呈正相关。结论 Cyclin-D2、MMP-3和p Rb蛋白的异常表达在上皮性卵巢癌发生、发展和复发中起重要作用,联合检测多个指标可能对患者预后的判断有指导意义。

上皮钙粘素、β-连环蛋白、细胞周期素D1在进行期寻常型银屑病皮损的表达

目的通过检测银屑病患者皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1的表达,探讨其在银屑病角质形成细胞高度增殖中的意义。方法用免疫组化方法检测正常组织及进行期银屑病皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1蛋白的表达。结果银屑病患者皮损增生的表皮细胞上皮钙粘素和β-连环蛋白在颗粒层和基底细胞层表达明显降低,与正常人相比有显著性差异(P<0.01)。而细胞周期素D1在银屑病患者皮损基底细胞层表达显著升高,并与β-连环蛋白的异常表达相关。结论上皮钙粘素和β-连环蛋白表达的下调可能与银屑病角质形成细胞高度增殖有关,Wnt信号转导系统异常可能参与银屑病的发病机制。

膀胱癌组织中细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶2的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨膀胱癌组织中细胞周期蛋白(cyclin)D1和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达及与临床病理特征的相关性。方法 2010年7月至2015年1月来该院就诊的膀胱癌患者的膀胱癌组织及癌旁组织各62例,另取同期的膀胱囊肿患者术后正常膀胱组织60例进行对照,检测cyclin D1和MMP-2在各组的表达,记录并对比结果后分析二者的表达与其病理特征关系。结果膀胱癌组织的cyclin D1 mRNA与MMP-2 mRNA表达显著高于正常组织及癌旁组织的表达(P<0.05)。癌症分期为T2~T4期的cyclin D1及MMP-2基因的表达水平显著高于Tis^T1期,癌症分级为Ⅲ级的cyclin D1及MMP-2基因的表达水平显著高于Ⅰ~Ⅱ级(P<0.05)。肿瘤直径>3 cm的cyclin D1 mRNA表达显著高于≤3 cm者,肿瘤分级为Ⅲ级的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于Ⅰ~Ⅱ级者,肿瘤分期为T2~T4期的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于Tis^T1者,有淋巴结转移的cyclin D1 mRNA及MMP-2 mRNA显著高于无转移者(P<0.05)。相关性分析发现,膀胱癌组织cyclin D1 mRNA表达与肿瘤直径、分级、分期以及淋巴结呈正相关,MMP-2 mRNA表达与肿瘤分级、分期以及淋巴结转移呈正相关。结论膀胱癌组织中cyclin D1和MMP-2的表达及其与临床病理特征具有紧密的联系,因此在临床可考虑通过监测二者的表达以掌握患者的病情进展。

细胞周期蛋白D2对HBV复制的影响

目的研究细胞周期蛋白D2(cyclin D2)对HBV复制的影响并探讨其作用的分子机制。方法运用qRT-PCR分析细胞周期蛋白家族成员在HBV复制细胞系中的表达水平;qRT-PCR、Western blot检测HBV复制对cyclin D2表达的影响;Western blot验证cyclin D2沉默效果,Real-time PCR,Southern blot验证沉默cyclin D2对HBV复制中间体表达的影响及ELISA验证cyclin D2对HBs Ag、HBe Ag分泌的影响;并检测cyclin D2过表达对HBV复制的影响。结果在细胞周期蛋白中,HBV复制对cyclin D2表达的影响最为显著,HBV感染明显促进cyclin D2 mRNA和蛋白水平的升高,下调cyclin D2显著抑制HBV的复制中间体的表达,HBs Ag和HBe Ag的分泌,过表达cyclin D2明显促进HBV的复制。结论 HBV复制可以促进细胞内cyclin D2的表达,cyclin D2有利于HBV的复制。这一发现为降低HBV的感染率,探索治疗乙型肝炎新的靶点提供了新的策略。

乳腺癌中细胞周期素D1基因扩增和过表达及其与c-erbB-2的关系

目的 探讨细胞周期素D1基因和表达的改变在乳腺癌中的作用及其与c erbB 2表达的关系。方法 采用原位分子杂交和免疫组织化学技术检测 5 9例乳腺癌组织细胞周期素D1基因扩增、mRNA及其蛋白和c erbB 2的表达。结果 2 7例 (4 5 8% )细胞周期素D1蛋白过表达 ,其过表达与腋淋巴结转移相关 (P <0 0 5 )。细胞周期素D1DNA扩增、mRNA高表达和蛋白过表达三者基本一致 ,与c erbB 2过表达无相关。结论 细胞周期素D1蛋白过表达在乳腺癌频发 ,其基因扩增和转录增加是其重要机制之一。细胞周期素D1和c erbB 2在乳腺癌中各自发挥独立作用 。

细胞周期蛋白D1在环加氧酶-2诱导的大鼠神经细胞死亡中的作用

目的探讨环加氧酶-2诱导的大鼠神经细胞死亡的分子发病机制。方法原代培养大鼠胎鼠皮质神经细胞,给予缺氧再加氧处理;实验随机分为对照组、缺氧再加氧组及选择性抑制剂+缺氧再加氧组;用噻唑蓝比色法测定神经细胞生存率,用Western印迹法检测蛋白质的表达。结果环加氧酶-2及细胞周期蛋白D1(Cy-clinD1)在缺氧再加氧后神经细胞表达呈平行性、一致性增高;COX-2选择性抑制剂NS398能明显降低CyclinD1的表达;而CyclinD1选择性抑制剂flavopiridol对COX-2的表达则没有影响;flavopiridol还能明显改善缺氧再加氧后神经细胞的生存率(P<0.001)。结论COX-2诱导的缺氧性神经细胞死亡的分子发病机制可能是通过CyclinD1表达的增加使成熟神经细胞重新进入细胞周期而实现的。

miRNA-206靶向细胞周期蛋白D2调控神经胶质瘤细胞增殖

目的探讨miRNA-206在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法采用荧光定量PCR方法检测神经胶质瘤组织和细胞系中miRNA-206的表达情况;通过四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)增殖实验检测miRNA-206对神经胶质瘤细胞T98G增殖的影响;生物信息学方法预测miRNA-206可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的细胞周期蛋白D2(CCND2)是miRNA-206的靶基因;蛋白质印迹方法检测miRNA-206对CCND2表达的影响。结果 miRNA-206在神经胶质瘤组织中的表达显著降低(P<0.01),且神经胶质瘤恶性度越高,miRNA-206的表达越低(P<0.01);同时,神经胶质瘤细胞系中miRNA-206的表达亦显著降低(P<0.01);转染miRNA-206 mimics上调神经胶质瘤细胞T98G中miRNA-206表达后可显著抑制神经胶质瘤细胞T98G的增殖能力(P<0.01),而转染anti-miRNA-206可增加神经胶质瘤细胞T98G的增殖能力(P<0.01)。通过Target Scan软件进行生物信息学预测显示CCND2为miRNA-206的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。蛋白质印迹结果显示转染miRNA-206可显著抑制神经胶质瘤细胞T98G中CCND2的表达。结论 miRNA-206可通过调节CCND2的表达,进而抑制神经胶质瘤细胞T98G的增殖能力,神经胶质瘤组织中miRNA-206的低表达与神经胶质瘤的发生发展密切相关。

p27^(kip1)与细胞周期素D1在子宫内膜癌中的表达

[目的]研究p27kip1和细胞周期素D1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义。[方法]采用免疫组化LSAB法检测42例子宫内膜癌中p27kip1、细胞周期素D1的表达。[结果]42例子宫内膜癌中20例p27kip1表达阳性,占47.6%,p27kip1与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、肌层浸润深度有关(P<0.05);17例子宫内膜癌细胞周期素D1表达阳性,占40.4%,细胞周期素D1与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);p27kip1、细胞周期素D1协同表达15例,均为晚期或低分化癌。[结论]p27kip1、细胞周期素D1作为细胞周期调节因子参与子宫内膜癌的发生、发展,其协同作用促进子宫内膜癌的发展,且预后不良。

小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达

目的检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位。结果 GV-CCs的CCND2mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P<0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P<0.01)。免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV-CCs减弱。结论卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程。

上皮型钙黏素、细胞周期素D1和β-连环蛋白表达与胃癌的关系

目的探讨上皮型钙黏素E(E-cad)、细胞周期素D1(Cyclin D1)和β-连环蛋白(β-cat)与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测E-cad、Cyclin D1和β-cat在50例胃癌组织标本、10例正常胃黏膜标本及20例胃癌前病变组织标本中的表达。结果胃癌前病变的E-cad、Cyclin D1和β-cat异常表达率分别为50%、60%、60%,分别与胃癌E-cad(84.0%)、Cyclin D1(72.0%)、β-cat(78.0%)的异常表达率相比差异有统计学意义(P<0.05)。低分化胃癌的E-cad、Cyclin D1和β-cat异常表达率分别为80%、90%、73.4%,分别比高分化胃癌E-cad(50%)、Cyclin D1(55%)、β-cat(40%)的异常表达更明显(P<0.05)。胃癌浸润到浆膜外及伴淋巴结转移时E-cad的异常表达率较高(P<0.01)。肿瘤直径≥5.0cm的胃癌组E-cad的异常表达率较高(P<0.05)。90%的胃癌及60%的胃癌前病变E-cad系统中至少有一项表达异常,二者差异有统计学意义(P<0.05),且至少有一项为表达异常患者的淋巴结转移率明显高于无蛋白异常表达者(P<0.05)。结论E-cad和β-cat的异常表达与胃癌的分化和转移密切相关,β-cat异常表达影响Cyclin D1的激活而引起细胞增殖和分化失控。E-cad、Cyclin D1和β-cat在由胃不典型增生转化为胃癌的过程中起作用。联合检测E-cad、β-cat和Cyclin D1可提高检测结果的参考价值。E-cad、β-cat和Cyclin D1可作为反映胃癌生物学行为的指标。

重复加热对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期蛋白D1的影响

目的探讨多次热疗后残存下来的HepG2细胞增殖速度的变化及与此相关的可能原因。方法HepG2细胞43℃加热,每次80分钟,每天两次,共10个循环后,分析细胞倍增时间,检测细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果热处理后的HepG2细胞增殖加快,细胞周期中S期和G2期的比率增高,细胞周期素D1的表达增强。结论热处理后的HepG2细胞增殖加快与其完成DNA复制而进入分裂的细胞比率高、细胞周期素D1的表达增强有关。