存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

细胞周期蛋白依赖性激酶4在胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胶质瘤中的表达及临床意义。方法对基因型-组织表达(GTEx)、癌症基因组图谱(TCGA)和中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中的资料进行挖掘和分析,提取胶质瘤中CDK4的RNA转录组数据。比较胶质瘤组织和正常脑组织中CDK4 mRNA表达水平,分析CDK4表达水平与胶质瘤分级的关系。根据TCGA和CGGA数据库中CDK4表达水平中位数,将患者分为CDK4高表达组与CDK4低表达组,比较两组患者的生存情况。采用Cox回归模型分析胶质瘤患者预后的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析CDK4对胶质瘤患者预后的预测价值,构建列线图,并进行验证。根据TCGA数据库中CDK4表达水平中位数,将患者分为CDK4高表达组与CDK4低表达组,对两组患者进行差异基因分析,对差异基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果胶质瘤组织中CDK4 mRNA表达水平明显高于正常脑组织(P﹤0.01)。CDK4表达水平与胶质瘤分级呈正相关。CDK4高表达组胶质瘤患者的总生存期短于CDK4低表达组。CDK4表达水平是胶质瘤患者预后的独立影响因素(P﹤0.01),对胶质瘤患者预后具有较好的预测效能。GO富集分析显示,差异基因与有丝分裂、离子通道、跨膜转运等有关,KEGG富集分析显示,差异基因主要富集于神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、环腺苷酸(cAMP)信号通路、细胞周期通路等。结论CDK4基因在胶质瘤的诊断和临床治疗中具有重要意义。

细胞周期蛋白及其依赖性激酶基因多态性与肝癌发生发展的相关性研究

细胞周期蛋白(Cyclin)及其依赖性激酶(CDK)在调节细胞周期进展中起重要作用,并与多种癌症发生发展相关。本研究探讨了细胞周期蛋白及激酶家族基因多态性与肝脏炎癌转化风险之间的关联性。方法:运用SnapShot技术对本中心173例肝癌和171例肝炎患者血清中CCNA2、CCNB1、CCND1、CCND3、CCNE1、CDK1、CDK2及CDK4基因的14个位点单核苷酸多态性进行基因分型,并分析其分型与肝炎进展、肝癌发生发展的相关性。结果:一般临床资料表明,与肝癌患者相比,肝炎患者的ALT、TB和DB水平更高,而肝癌患者较肝炎患者血清白蛋白水平升高及发病年龄更高,通过SNP(SingleNucleotidePolymorphism)分型发现CyclinA2(rs769238)和CyclinD3(rs3218108)基因型与肝脏炎癌转化及发生发展呈一定相关性。结论:细胞周期蛋白及其依赖性激酶多态性与患者肝炎肝癌进展呈一定相关性,CyclinA2(rs769238)、CyclinD3(rs3218108)基因型分别与肝癌发生及肝功能损害有关。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3对鸡前脂肪细胞分化的抑制作用

【目的】解析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(cyclin-dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)在鸡前脂肪细胞分化中的作用,为阐明脂肪沉积的分子机制奠定理论基础。【方法】构建荧光表达载体pECFPCDKN3,转染至鸡永生化前脂肪细胞系(immortalized chicken preadipocyte cell line,ICP1),观察CDKN3蛋白的亚细胞定位;采用油酸钠诱导ICP1分化,qRT-PCR检测分化过程中CDKN3 mRNA表达水平;将pCMVHA-CDKN3和pCMV-HA分别转染到ICP1中,转染24 h后进行诱导分化,通过油红O染色检测脂肪细胞分化情况,并利用qRT-PCR检测过表达CDKN3后脂肪分化相关基因的mRNA表达水平。【结果】转染了pECFP-CDKN3的细胞主要在细胞核中呈青色荧光信号,提示鸡CDKN3定位于细胞核;在诱导ICP1成脂分化的过程中,CDKN3 mRNA表达量逐渐升高;油红O染色结果显示:过表达CDKN3细胞内脂滴聚集减少,且脂肪分化相关基因C/EBPα、PPARγ、FABP4和FAS的表达水平均呈下降趋势,其中FAS显著下降(P<0.05),PPARγ极显著下降(P<0.01)。【结论】CDKN3是核蛋白,可抑制鸡前脂肪细胞分化。

细胞周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂治疗激素受体阳性、人表皮生长因子受体2阴性的晚期乳腺癌的研究进展

激素受体阳性(hormone receptor positive,HR+)、人表皮生长因子受体2阴性(human epidermal growth factor receptor 2 negative,HER2−)的乳腺癌是乳腺癌中最常见的分子亚型,预后情况常取决于患者对内分泌治疗的敏感性。HR+、HER2−晚期乳腺癌多已对内分泌治疗药物耐药,而此往往会致患者生存期缩短、生命质量下降等不良结局,故临床上亟需有新的治疗策略/药物。近年来,一些新型口服靶向药物细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4/6抑制剂陆续获准上市,它们因能为HR^(+)、HER2^(−)晚期乳腺癌患者提供显著的生存益处且安全性良好,成为该类患者的重要有效治疗选择之一。本文就CDK4/6抑制剂的作用机制、有效性、安全性和药物经济学研究进展作一概要介绍和对比分析。

细胞周期蛋白O调控细胞周期蛋白依赖性激酶13对宫颈癌进展的影响

目的:探讨细胞周期蛋白O(CCNO)通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶13(CDK13)进而影响宫颈癌细胞周期进展的分子机制。方法:通过生物信息学方法分析CCNO在不同癌症中的表达情况。利用免疫组化(IHC)检测CCNO在宫颈癌患者组织样本中的表达情况,利用蛋白质免疫印迹(WB)检测CCNO在宫颈癌细胞系中的表达情况。通过WB检测CCNO载体沉默效率,通过细胞克隆、胸腺嘧啶核苷类似物实验检测(EDU)和细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测肿瘤样本(NC)和肿瘤沉默CCNO样本(si-CCNO)的细胞增殖情况,通过细胞迁移实验和流式细胞分析实验检测2组细胞迁移情况和细胞周期的变化,最后通过免疫共沉淀(CO-IP)实验检测CCNO是否调控细胞周期蛋白依赖性激酶13(CDK13)的表达。结果:CCNO在宫颈癌患者的组织样本中高表达;与对照组比较,si-CCNO组中CCNO表达量降低(P<0.05);与NC组比较,si-CCNO组的细胞增殖降低(P<0.05),si-CCNO组的细胞迁移数目减少(P<0.05);与NC组比较,si-CCNO组停滞在G1期细胞明显增多(P<0.05);与NC组比较,si-CCNO组的CDK13表达显著降低。结论:沉默CCNO能够抑制宫颈癌细胞的增殖、细胞周期进展和转移能力,并且CCNO能够调控CDK13进而对宫颈癌进展产生影响。

脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

循环细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C mRNA对女性急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后心功能的预测价值

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C(CDKN1C)mRNA对女性急性心肌梗死(AMI)患者行经皮冠状动脉介入(PCI)术后心功能的预测价值。方法选取2018年1月至2020年1月遂宁市中心医院急诊PCI的AMI患者198例,术后1 d检测N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和CDKN1C mRNA水平,术后4个月通过超声心动图检测心功能,根据左心室射血分数(LVEF)分为三组:A组(LVEF≥50%)112例;B组(40%≤LVEF<50%)54例;C组(LVEF<40%)32例。通过ROC曲线分析不同性别患者CDKN1C mRNA与NT-proBNP水平对心功能的预测价值。结果A组CDKN1C mRNA水平高于B组和C组(F=6.831,P<0.05),A组NT-proBNP水平低于B组和C组(F=3.421,P<0.05)。A组女性患者CDKN1C mRNA水平高于B组和C组女性患者(F=6.717,P<0.05)。CDKN1C mRNA的AUC为0.805(95%CI=0.732~0.864),预测价值优于NT-proBNP(Z=2.676,P<0.05),女性CDKN1C mRNA的AUC为0.887(95%CI=0.804~0.923)预测价值优于男性患者(Z=3.004,P<0.05)。结论术后1 d循环CDKN1C mRNA水平有助于预测AMI患者PCI后心功能情况,尤其适用于女性,CDKN1C mRNA可以作为预测女性AMI患者PCI后心功能的一个新的标志物。

细胞周期蛋白依赖性激酶16(CDK16)与细胞增殖指标Ki67在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶16(CDK16)及细胞增殖指标Ki67在人食管鳞癌组织中的表达及其生物学意义,并探讨二者在食管鳞癌中表达的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测CDK16、Ki67蛋白在75例食管鳞癌/癌旁组织中的表达,使用数学统计分析软件分析这两种蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。结果 CDK16在食管鳞癌组织中的表达显著高于癌旁组织中的表达(P<0.05),CDK16的表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移及TNM临床分期密切相关(P<0.05),而与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤最大径及肿瘤的病理形态均无关(P>0.05)。另外,在食管鳞癌组织中,Ki67的表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移及TNM临床分期之间存在显著的相关性(P<0.05),且相关性分析显示,食管鳞癌中CDK16与Ki67二者的表达呈显著正相关(χ~2=24.36,P<0.001, Pearson列联系数=0.518)。结论 CDK16蛋白和Ki67蛋白在食管鳞癌中的表达明显升高,联合检测CDK16与Ki67的表达,可作为判断食管鳞癌恶性程度及评估患者预后水平的重要参考指标。

兔抗细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体的制备及鉴定

目的 制备兔抗重组细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抗体并进行鉴定。方法 合成并构建pET21a(+)-CDK6重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法检测蛋白表达;用镍氮川三乙酸(Ni-NTA)亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分析;纯化后的CDK6蛋白多部位、多次(隔周)免疫日本大耳白兔,分别于免疫的0、 2、 4、 6周取血,分离血清。采用间接ELISA检测效价,Western blot法、免疫荧光细胞化学染色和免疫组织化学染色法检测其特异性。结果 表达并获得高纯度的CDK6蛋白,制备了兔抗CDK6重组蛋白抗体,其效价达1∶30 000,能特异性识别宫颈癌细胞及宫颈癌组织中表达的CDK6蛋白。结论 成功制备了高效价、特异性强的兔抗CDK6抗体。

miR-567通过调控CDK8在NSCLC增殖、迁移和细胞周期中的作用及其临床相关性研究

目的探讨微小RNA(miR)-567通过调控周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)在非小细胞肺癌(NSCLC)增殖、迁移和细胞周期中的作用及其临床相关性研究。方法收集40例NSCLC患者的肿瘤组织和临近癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-567和CDK8的表达。将miR-NC mimic、miR-567 mimic、oe-NC和oe-CDK8转染至A549和H1975细胞中,使用qRT-PCR检测miR-567和CDK8的表达,CCK-8法检测细胞增殖水平,Transwell法检测细胞迁移水平,流式细胞术检测细胞周期变化。通过荧光素酶报告基因实验检测miR-567与CDK8的靶向性。结果在NSCLC患者的肿瘤组织中,miR-567表达降低,而CDK8表达升高,二者呈负相关(P<0.05)。在A549和H1975细胞中,miR-567 mimic组相较于miR-NC mimic组,miR-567表达升高,CDK8表达降低,细胞增殖和迁移水平降低,细胞G1期比例升高,S期比例降低;miR-567 mimic组在正常型CDK8中,荧光强度低于miR-NC mimic组;miR-567 mimic+oe-CDK8组相较于miR-567 mimic+oe-NC组,CDK8表达升高,细胞增殖和迁移水平升高,细胞G1期比例降低,S期比例升高。结论miR-567通过靶向抑制CDK8表达,控制肿瘤细胞在S期阻滞,从而抑制NSCLC的增殖和迁移能力。

人细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)基因克隆和原核表达

目的从人胃癌组织中克隆出人CDK2基因和原核表达CDK2蛋白。方法从胃癌组织中提取RNA,逆转录PCR扩增CDK2cDNA‘PCR产物进行TA克隆和DNA序列分析;阳性TA克隆CDK2片段亚克隆入PET28a+载体,IPTG诱导表达人CDK2。结果逆转录PCR扩增出约900bp的DNA片段,TA克隆和DNA序列分析显示重组片段是人CDK2基因序列,全长897bp;CDK2cDNA亚克隆入PET28a+载体NcoI和XhoI位点之间;IPTG诱导出约34kD的蛋白。结论从人胃癌组织中成功地扩增出人CDK2基因,并且在大肠杆菌中得到表达。

糖尿病治疗前沿:细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)将成为治疗糖尿病的新靶点

2型糖尿病（Diabetes Mellitus，T2DM）目前是全球性的威胁人民健康的公害之一，其并发症有心、脑、肾及眼底病变，尤其是糖尿病肾病，最终将走向慢性肾功能衰竭。不仅严重危害人类健康和降低生活质量，并对社会造成巨大的经济压力。对这类疾病的治疗已成为刻不容缓的世界问题。

细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4抑制剂的3D-QSAR研究

采用比较分子场分析法(comparative molecular field analysis,CoMFA)和比较分子相似性指数分析法(comparative similarity indices analysis,CoMSIA),系统研究了57个CDK4酶抑制剂的三维定量结构-活性关系.所建立CoMFA和CoMSIA模型的交叉验证系数q2值分别为0.656和0.811,非交叉验证相关系数r2分别为0.954和0.969,都具有较好的预测能力.CoMFA和CoMSIA模型的三维等值图直观地解释了化合物的构效关系,为进一步研究提供了重要依据.

维甲酸对人胃癌细胞HGC-27增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(P16、P21、P27)表达的影响

目的 观察维甲酸 (RA)作用人胃癌细胞系GHC - 2 7后 ,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白 (CKIs) (P16、P2 1、P2 7)表达的变化 ,探讨RA抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化的作用机制。方法 不同浓度RA作用HGC 2 7细胞后 ,MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,Westermblot、Northernblot分别检测CKIs(P16、P2 1、P2 7)蛋白、mRNA水平。结果 在一定浓度范围之内 ,RA能抑制HGC 2 7细胞增殖 ,细胞周期发生G1→S期阻滞 ,并上调P2 1、P2 7的蛋白、mRNA水平 ,但对P16的蛋白、mRNA水平没有影响。结论 RA能通过上调CKIs尤其是P2 1、P2 7的表达而抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化。

抗肿瘤细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的研究进展

细胞周期是细胞生命活动的基本特征。一个完整的细胞周期受多种蛋白酶的调控,调控失调会导致细胞过度增殖,从而引发肿瘤。以细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)为靶点的药物可以阻断细胞周期,控制细胞增殖,从而达到抗肿瘤的目的。现简单介绍细胞周期依赖性蛋白激酶、细胞周期蛋白、细胞周期调控机制及其与肿瘤的关系,对近年来不同结构类型的细胞周期蛋白激酶抑制剂进行综述,并初步分析其发展趋势。

细胞周期蛋白依赖性激酶2及相关蛋白研究进展

在所有真核细胞中,细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,CDK）调控着细胞周期各个环节的起始与进程,进而控制细胞的增生和凋亡。CDK2在20世纪90年代初鉴定并命名,是目前已发现的11个CDK成员中研究极为深入的细胞周期调控因子之一,在决定细胞周期进程中起着重要作用。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂与肿瘤相关性的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂相关基因的突变和表达失调可直接或间接影响细胞的周期、增殖以及凋亡等功能,与肿瘤的发生发展密切相关。p16能够抑制CDK4/CDK6介导的Rb蛋白产物的磷酸化,其CpG岛异常甲基化参与宫颈癌的发生发展;p21作为p53的下游调节因子,与肿瘤血管的生成、淋巴转移及预后相关;p27作用机制复杂,与乳腺癌预后关系密切,并可恢复耐药乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性;p57在细胞周期G1到S期的转变中至关重要,其表达程度与部分肿瘤的恶性程度相关,它还参与了肿瘤细胞的凋亡过程。了解这些基因的结构和作用机制,探究其在肿瘤发生、发展中所产生的作用,进而寻找有效治疗靶点,已成为肿瘤分子生物学关注的热点。

细胞周期蛋白依赖性激酶及其抑制剂构效关系研究进展

细胞周期是维持细胞正常生命活动的基本特征。一个完整的细胞周期受到多种蛋白酶的调控。研究表明,几乎所有肿瘤的发生都与细胞周期调控机制紊乱所导致的细胞生长分化受阻及凋亡异常有关。细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)是细胞周期调控的核心,CDK与相应的细胞周期蛋白结合形复合物,并通过细胞周期蛋白的周期性表达和降解,推动细胞周期各时相的有序进行。因此,以CDK为靶点的药物可以阻断细胞周期,控制细胞增长,从而达到抗肿瘤的目的。本文就CDK的结构和功能,及其抑制剂的化学结构类型及构效关系进行综述。

乙型和丙型肝炎病毒对细胞周期素及细胞周期素依赖性蛋白激酶的调节

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝细胞癌(HCC)发生发展之间的密切关系,早已被大量的临床医学和临床流行病学资料所证实[1].随着细胞周期(cell cycle)调节的分子生物学机制研究不断深入,特别是关于细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)的发现,使得细胞周期这一经典的概念又有了新的内容,大大促进了肿瘤形成的分子生物学研究的进展[2].