存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

循环细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C mRNA对女性急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后心功能的预测价值

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C(CDKN1C)mRNA对女性急性心肌梗死(AMI)患者行经皮冠状动脉介入(PCI)术后心功能的预测价值。方法选取2018年1月至2020年1月遂宁市中心医院急诊PCI的AMI患者198例,术后1 d检测N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和CDKN1C mRNA水平,术后4个月通过超声心动图检测心功能,根据左心室射血分数(LVEF)分为三组:A组(LVEF≥50%)112例;B组(40%≤LVEF<50%)54例;C组(LVEF<40%)32例。通过ROC曲线分析不同性别患者CDKN1C mRNA与NT-proBNP水平对心功能的预测价值。结果A组CDKN1C mRNA水平高于B组和C组(F=6.831,P<0.05),A组NT-proBNP水平低于B组和C组(F=3.421,P<0.05)。A组女性患者CDKN1C mRNA水平高于B组和C组女性患者(F=6.717,P<0.05)。CDKN1C mRNA的AUC为0.805(95%CI=0.732~0.864),预测价值优于NT-proBNP(Z=2.676,P<0.05),女性CDKN1C mRNA的AUC为0.887(95%CI=0.804~0.923)预测价值优于男性患者(Z=3.004,P<0.05)。结论术后1 d循环CDKN1C mRNA水平有助于预测AMI患者PCI后心功能情况,尤其适用于女性,CDKN1C mRNA可以作为预测女性AMI患者PCI后心功能的一个新的标志物。

基于生物信息学研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A基因与宫颈癌的关系及调控机制

目的采用生物信息学方法分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)基因与宫颈癌的关系,并探讨其对宫颈癌潜在的调控机制。方法从GEO数据库中下载数据集GSE7803、GSE64217和GSE63514,并使用GEO2R软件筛选宫颈癌组织和正常组织之间的差异性表达基因,得到CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,并利用GEPIA数据库验证CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达水平。通过DAVID在线工具针对差异性表达基因进行通路富集分析;利用STRING数据库和Cytoscape软件筛选与CDKN2A基因编码蛋白相互作用密切的蛋白。利用UALCAN在线工具分析CDKN2A基因表达与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系,以及宫颈癌组织中CDKN2A基因启动子甲基化水平。利用TIMER数据库分析CDKN2A基因表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的相关性。利用ENCORI和mirDIP软件分析与CDKN2A基因有结合靶点的miRNA。结果共获得347个差异性表达基因,其中CDKN2A基因为上调基因;GEPIA数据库验证结果提示CDKN2A基因在宫颈鳞状细胞癌组织组织中呈高表达水平(P<0.05)。CDKN2A基因参与了细胞周期、p53信号通路及膀胱癌信号通路;共有22个蛋白与CDKN2A基因编码蛋白相互作用密切。淋巴结转移阳性宫颈癌患者中的CDKN2A基因表达水平高于淋巴结转移阴性者,CDKN2A基因高表达的宫颈癌患者的生存期短于低表达者(均P<0.05)。宫颈癌组织中CDKN2A基因启动子的甲基化水平较正常宫颈组织升高(P<0.05)。CDKN2A基因表达水平与巨噬细胞浸润水平呈负相关,与中性粒细胞、树突状细胞浸润水平呈正相关(均P<0.05)。共有9个miRNA可能与CDKN2A基因有结合靶点。结论CDKN2A基因与宫颈癌发生、发展密切相关,或可作为宫颈癌诊断及预后评估的潜在新分子标志物,并可为研究宫颈癌的免疫治疗提供新线索;该基因可能通过启动子区域甲基化或上游miRNA靶向调控在宫颈癌的发生、发展中发挥作用。

细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2B基因多态性与维吾尔族2型糖尿病的关系研究

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2B(CDKN2A/2B)基因多态性与维吾尔族2型糖尿病(T2DM)的关系。方法选取2012年3月—2013年9月在新疆医科大学第一附属医院住院的维吾尔族T2DM患者1 000例作为T2DM组,及同期在本院体检的无糖尿病、无血缘关系的维吾尔族人群1 010例作为对照组。受试者均进行体格检查及生化指标测定;采用Sequenom Mass ARRAYSNP技术检测CDKN2A/2B基因2个T2DM易感位点;采用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析;采用SNPStats在线软件进行遗传模型分析,并对基因型、单体型与BMI的交互作用进行分析。结果由于少量样本基因位点未检测成功,故最终位点rs10811661成功分型1 940例(其中对照组967例、T2DM组973例),位点rs564398成功分型1 962例(其中对照组和T2DM组均为981例)。两组位点rs10811661的基因型和等位基因分布间差异均有统计学意义(P<0.05);而位点rs564398的基因型和等位基因分布间差异无统计学意义(P>0.05)。在调整年龄、性别、BMI后,两组位点rs10811661的共显性、显性、超显性及加性遗传模型间差异均有统计学意义(P<0.05),其中加性遗传模型赤池信息准则(AIC)和施瓦兹贝叶斯信息准则(BIC)最小,分别为2 602.4、2 630.3;而隐性遗传模型间差异无统计学意义(P>0.05)。两组位点rs564398的各遗传模型间差异均无统计学意义(P>0.05)。与位点rs10811661表现为T/T基因型的体质量正常者比较,表现为T/T、T/C基因型的肥胖者发生T2DM的OR值分别为2.53〔95%CI(1.80,3.55)〕、2.17〔95%CI(1.50,3.13)〕,P<0.05。与位点rs564398表现为A/A基因型的体质量正常者比较,表现为A/A基因型的超重者和表现为A/A、A/G、G/G基因型的肥胖者发生T2DM的OR值为1.44〔95%CI(1.03,2.02)〕、2.79〔95%CI(1.99,3.91)〕、2.69〔95%CI(1.86,3.88)〕、4.81〔95%CI(2.49,9.29)〕,P<0.05。位点rs10811661表现为T/T基因型中的肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为2.53〔95%CI(1.80,3.55)〕,P<0.05;表现为T/C基因型中的超重、肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为1.56〔95%CI(1.01,2.40)〕、3.21〔95%CI(2.09,4.92)〕,P<0.05。位点rs564398表现为A/A基因型中的超重、肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值分别为1.44〔95%CI(1.03,2.02)〕、2.79〔95%CI(1.99,3.91)〕,P<0.05;表现为A/G基因型中的肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为2.09〔95%CI(1.38,3.15)〕;表现为G/G基因型中的肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值为5.31〔95%CI(1.68,16.73)〕,P<0.05。肥胖者中位点rs10811661表现为C/C基因型者较T/T基因型者发生T2DM的OR值为0.48〔95%CI(0.27,0.88)〕,P<0.05。选取两位点均成功分型的1 933例样本进行连锁不平衡分析及单体型构建,在调整年龄、性别和BMI后,位点rs10811661和rs564398间无强连锁不平衡(D'=0.268 2);CA单体型者较频率最高的TA单体型者发生T2DM的OR值为0.78〔95%CI(0.65,0.94)〕,P<0.05。与体质量正常的TA单体型者比较,肥胖的TA、CA、CG、TG单体型者发生T2DM的OR值分别为2.94〔95%CI(1.92,4.50)〕、2.14〔95%CI(1.41,3.25)〕、3.05〔95%CI(1.48,6.28)〕、3.02〔95%CI(1.98,4.60)〕,P<0.05。TA、CA、CG、TG单体型者中肥胖者较体质量正常者发生T2DM的OR值分别为2.94〔95%CI(1.92,4.50)〕、2.39〔95%CI(1.59,3.59)〕、3.70〔95%CI(1.11,12.31)〕、2.59〔95%CI(1.72,3.90)〕,P<0.05。肥胖者中CA单体型者较TA单体型者发生T2DM的OR值为0.73〔95%CI(0.55,0.97)〕,P<0.05。结论 CDKN2A/2B基因位点rs10811661多态性与维吾尔族T2DM的发病风险可能有关,这种关联可能与BMI有交互作用。位点rs10811661携带T/T基因型者较携带C/C基因型者发生T2DM的风险增加,T为风险等位基因。rs564398多态性与维吾尔族T2DM发病风险无关。位点rs10811661与rs564398之间的CG单体型合并肥胖者发生T2DM的风险最高。

细胞质内高表达的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)抑制人支气管上皮细胞凋亡

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)抑制人支气管上皮细胞凋亡的机制。方法 (1)表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)的质粒P^(EGFP-N1-p21)转染人支气管上皮细胞系16HBE,研究P^(21)蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与质粒转染后细胞凋亡表现之间的相互关系。实验分组包括空白对照、空质粒及P^(EGFP-N1-p21)质粒组,应用Westen-blot方法检测质粒转染24 h后P^(21)蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化相对值,流式细胞仪方法检测质粒转染24 h、48 h后的细胞凋亡率。(2)转化生长因子-β_1(TGF-β_1)刺激人支气管上皮细胞系16HBE,研究TGF-β_1刺激后P^(21)蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与支气管上皮细胞凋亡之间的相互关系。实验分组包括TGF-β_10 ng/mL、TGF-β_13 ng/mL及TGF-β_110 ng/mL组,应用Westen-blot方法检测TGF-β_1刺激24 h后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化,流式细胞仪方法检测TGF-β_1刺激12 h、24 h后的细胞凋亡率。结果质粒P^(EGFP-N1-p21)转染人支气管上皮细胞系16HBE 24 h后,P^(EGFP-N1-p21)质粒组的P^(21)蛋白在细胞质内表达水平高于空质粒组、空白对照组,并高于同组细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05);空质粒组、空白对照组的细胞质内P^(21)蛋白表达水平低于细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05)。P^(EGFP-N1-p21)质粒转染24 h、48 h后,P^(EGFP-N1-p21)质粒组凋亡率低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。P^(EGFP-N1-p21)质粒转染24 h后的16HBE细胞凋亡率高于转染48 h后,而空质粒组和空白对照组表现相反结果。P^(EGFP-N1-p21)质粒转染后,P^(21)蛋白在细胞质内表达与转染后的细胞凋亡呈负相关。TGF-β_1(0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞24 h后,TGF-β_13 ng/mL及10 ng/mL组的细胞核、细胞质内P^(21)蛋白表达均高于TGF-β_10 ng/mL组,差异均具有统计学意义(P<0.05),TGF-β_13 ng/mL及10 ng/mL组的细胞质中P^(21)蛋白表达均高于细胞核内P^(21)蛋白(P均<0.05),10 ng/mL组胞质P^(21)蛋白表达量低于3 ng/mL组(P<0.05)。TGF-β_1(0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12h、24 h后,同一作用时间下,随着TGF-β_1刺激浓度增加,细胞凋亡率增加,TGF-β_1(3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12 h、24 h后,同一作用浓度下,随着刺激时间延长,细胞凋亡率增加(P均<0.05)。TGF-β_1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,细胞质内P^(21)蛋白增加与刺激后的细胞凋亡呈负相关。结论 P^(EGFP-N1-p21)质粒转染人支气管上皮细胞后,P^(21)蛋白表达于细胞质,抑制人支气管上皮细胞凋亡。TGF-β_1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,刺激细胞质内P^(21)蛋白表达增加,随着细胞质内P^(21)蛋白表达下降,细胞凋亡增加。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)可通过在细胞质内高表达这一机制抑制人支气管上皮细胞凋亡。

血浆细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子、环腺苷酸反应元件结合蛋白水平与糖尿病视网膜病变关系研究

目的检测糖尿病视网膜病变(DR)病人血浆中细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子(P15INK4b)、环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)水平,探讨P15INK4b、CREB与DR发生发展的关系。方法选取2017年6月至2019年6月仙桃市第一人民医院收治糖尿病(观察组)198例作为研究对象,其中,非DR(非DR组)95例,DR(DR组)103例;根据病变阶段将DR病人分为非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)Ⅰ期组(24例)、NPDRⅡ期组(29例)、NPDRⅢ期组(26例)和增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)组(24例);同期健康体检者(对照组)200例作为对照。采集清晨外周血提取血浆、血清,蛋白质免疫印迹(Western blotting)法检测血浆P15INK4b、CREB水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;采用Pearson法分析DR病人血浆P15INK4b、CREB水平与血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平相关性;采用多因素logistic回归分析影响DR发生的因素。结果观察组血浆P15INK4b、CREB水平较对照组明显升高[(3.26±1.04)比(1.71±0.55),(0.84±0.26)比(0.53±0.16),P<0.05],血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平较对照组明显升高(P<0.05);DR组血浆P15INK4b、CREB水平较非DR组明显升高[(4.23±1.39)比(2.21±0.72),(1.01±0.33)比(0.65±0.21),P<0.05],血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平较非DR组明显升高(P<0.05);随着病变阶段升级,DR病人血浆P15INK4b、CREB水平、血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平逐渐升高(P<0.05);DR病人血浆P15INK4b、CREB水平与血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平均明显正相关(P<0.05);血浆P15INK4b、CREB、血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平均为影响DR发生的危险因素(P<0.05)。结论糖尿病病人血浆P15INK4b、CREB水平均明显升高,随DR的发生发展均异常表达,与血清TNF-α、TGF-β1、VEGF水平均关系密切,可能通过与TNF-α、TGF-β1、VEGF相互调控影响疾病发生发展,均为影响DR发生的危险因素,可作为DR发生和严重程度的标志物。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-453细胞分为CDKN2B-AS1阴性对照(si-NC组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA(si-CDKN2B-AS1组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p阴性对照(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用RT-qPCR法对CDKN2B-AS1及微小RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及MTT实验;采用Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS1对miR-339-5p的靶向调控。结果 在乳腺癌组织中CDKN2B-AS1表达水平上调[(2.23±0.08)比(1.00±0.06)](P<0.05)。抑制CDKN2B-AS1可增加G0期细胞比例[(43.29±3.76)%比(30.25±3.01)%]、P21表达水平升高,S期细胞比例[(21.91±3.10)%比(34.19±3.32)%]、细胞存活率[(53.02±5.38)%比(100.00±7.12)%]、迁移、侵袭数以及Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。CDKN2B-AS1靶向调控miR-339-5p,抑制miR-339-5p逆转抑制CDKN2B-AS1对MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 抑制CDKN2B-AS可抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控miR-339-5p表达。

miR-let7c对小鼠精原细胞株GC-1spg细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A表达的调控作用

目的观察微小RNA let7c(miR-let7c)对小鼠精原细胞株GC-1spg中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)表达的调控作用。方法构建过表达miR-let7c慢病毒、沉默表达miR-let7c慢病毒及空载体对照慢病毒,并用其感染GC-1spg细胞,分别为miR-let7c上调组、miR-let7c下调组和对照组。转染后72 h收集三组细胞,用荧光定量PCR法检测CDKN1A mRNA,用Western blotting法检测CDKN1A蛋白。结果 miR-let7c上调组、miRlet7c下调组、对照组CDKN1A mRNA相对表达量分别为0.005 6±0.000 9、0.039 1±0.006 7、0.021 9±0.001 8,CDKN1A蛋白相对表达量分别为0.034 8±0.002 6、0.833 5±0.053 2、0.257 4±0.070 9。与对照组比较,miR-let7c上调组CDKN1A mRNA和蛋白相对表达量低于miR-let7c下调组及对照组(P均<0.01),miR-let7c下调组CDKN1A mRNA和蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.01)。结论 miR-let7c可负向调控小鼠精原细胞株GC-1spg中CDKN1A mRNA和蛋白表达。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A基因表达与胰腺癌临床病理特征的关系

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)基因表达与胰腺癌(PC)临床病理特征的关系。方法选择2016年1月至2018年6月朝阳市第二医院保存的88例PC组织标本和30例正常胰腺组织标本,采用定量反转录聚合酶链反应法检测PC组织和正常胰腺组织中CDKN2A mRNA表达,分析CDKN2A基因表达与PC临床病理特征及患者2 a总生存率和疾病无进展生存率的关系。结果PC组织和正常胰腺组织中CDKN2A mRNA相对表达量分别为1.43±0.56、2.03±0.87,PC组织中CDKN2A mRNA相对表达量显著低于正常胰腺组织(P<0.05)。以正常胰腺组织中CDKN2A mRNA相对表达量均值2.03为界值,PC组织中CDKN2A基因高表达者36例,低表达者52例。CDKN2A基因高表达与低表达患者的性别、年龄、肿瘤部位比较差异无统计学意义(P>0.05),CDKN2A基因高表达与低表达患者的肿瘤直径、组织分化程度和肿瘤临床分期比较差异有统计学意义(P<0.05)。CDKN2A mRNA高表达和低表达患者2 a总生存率分别为66.67%(24/36)、34.62%(18/52),2 a疾病无进展生存率分别为58.33%(21/36)、23.08%(12/52);CDKN2A mRNA低表达患者2 a总生存率和2 a疾病无进展生存率显著低于高表达患者(P<0.05)。结论PC组织中CDKN2A基因表达下调,且CDKN2A基因表达与肿瘤大小、组织分化程度、肿瘤临床分期及患者生存状况有关。

急性冠脉综合征患者血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184水平与介入治疗后冠状动脉再狭窄发生的相关性研究

目的分析急性冠脉综合征(ACS)患者血清长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B基因反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)、微小RNA-184(miR-184)水平与经皮冠状动脉介入(PCI)治疗后冠状动脉再狭窄(RS)发生的相关性。方法选取2020年2月至2023年3月在该院行PCI治疗的288例ACS患者,根据术后6个月复查造影结果分为RS发生组96例和RS未发生组192例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184相对表达水平;采用Pearson相关性分析血清lncRNA CDKN2B-AS1与miR-184相关性;影响ACS患者PCI后RS发生的因素采用多因素Logistic回归分析;以受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184对ACS患者PCI后RS发生的评估价值。结果与RS未发生组相比,RS发生组血清lncRNA CDKN2B-AS1水平显著升高,miR-184水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);两组超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素18(IL-18)、总胆红素(TBIL)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)比较,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,ACS患者血清lncRNA CDKN2B-AS1与miR-184水平呈显著负相关(r=-0.427,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA CDKN2B-AS1、hs-CRP、IL-18、cTnI是影响ACS患者PCI后RS发生的危险因素,miR-184、TBIL是影响ACS患者PCI后RS发生的保护因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184及二者联合对ACS患者PCI后RS发生评估的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.844、0.929,二者联合对ACS患者PCI后RS发生评估的AUC显著高于血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184单独评估(Z_(二者联合-lncRNA CDKN2B-AS1)=4.490、Z_(二者联合-miR-184)=3.429,均P<0.05)。结论ACS患者血清lncRNA CDKN2B-AS1水平显著升高,miR-184水平显著降低,与ACS患者PCI后RS发生具有相关性,均是影响ACS患者PCI后RS发生的因素,且二者联合对ACS患者PCI后RS发生的评估效能更佳。

Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在PDGF诱导肝星状细胞胶原合成中的作用

目的观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对PDGF诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)colla-genα1(Ⅰ)合成的影响。方法 CaMKⅡαsiRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,real-time PCR法检测HSC collagenα1(Ⅰ)及TIMP-1 mRNA的表达,Western blot法检测collagenα1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1表达的变化,ELISA法检测HSC collagenα1(Ⅰ)分泌的变化。结果 CaMKⅡαsiRNA可显著抑制PDGF诱导下HSC collagenα1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1的转录、蛋白表达以及collagenα1(Ⅰ)的分泌,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CaMKⅡα信号参与了PDGF诱导下HSC collagenα1(Ⅰ)的产生与分泌,同时通过抑制MMP-2、促进TIMP-1的表达而阻止胶原的降解,是肝纤维化发展过程中PDGF信号的重要调控分子和肝纤维化的潜在治疗靶点。

微小RNA-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期

目的探讨卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)相关疱疹病毒(KSHV)编码的微小RNAs(miR),如miR-K1-5p,对KS细胞周期的调控作用及其机制。方法该研究进行于2020年1—12月,人脐静脉内皮细胞购自美国ScienCell。生物信息学软件预测miR-K1-5p的靶基因。双萤光素酶试验验证miR-K1-5p的靶基因[细胞周期素依赖性激酶抑制剂4(CDKN4)]。将miR-K1-5p模拟物转染后,行蛋白质印迹法(Western blotting)和q-PCR检测,分析G1/S期相关基因CDKN4、细胞周期蛋白A/细胞周期素依赖性激酶2(Cyclin A/CDK2)、细胞周期蛋白D2/细胞周期素依赖性激酶4(Cyclin D2/CDK4)的表达。碘化丙啶(PI)染色检测miR-K1-5p对内皮细胞(HUVECs)周期的影响。结果miR-K1-5p靶向CDKN4(miR-K1-5p mimics+CDKN4-WT组、mimics NC+CDKN4-WT组、miR-K1-5p mimics+CDKN4-MUT组、mimics NC+CDKN4-MUT组萤光素酶活性分别为0.42±0.05、0.81±0.04、0.82±0.03、0.80±0.05),负性调控CDKN4的表达(P<0.001),正性调控Cyclin A/CDK2和CyclinD2/CDK4的表达(P<0.05)。此外,miR-K1-5p可以加速细胞周期进程,促进G1/S期转换[S+G2期/G1+S+G2期:mimics组(23.37±0.29)%比mimics NC组(15.00±0.75)%,G1期:mimics组(76.63±0.28)%比mimics NC组(85.00±0.76)%,S期:mimics组(15.34±0.36)%比mimics NC(8.45±0.20)%,G2期:mimics组(8.02±0.17)%比mimics NC组(6.55±0.80)%]。结论miR-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期。

蛋白磷酸酶2A调控细胞周期发挥抗肿瘤作用的研究进展

蛋白磷酸酶2A(PP2A)是真核细胞内广泛表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶家族的主要成员,参与细胞周期、增殖分化及凋亡等过程中信号通路的去磷酸化调控。研究表明,PP2A不同亚基表达调控与人群肿瘤风险存在关联性;PP2A与细胞周期相关激酶相互作用,二者调控平衡的研究有助于致癌机制的探讨和靶向PP2A抗肿瘤作用的探索。本文对PP2A调控细胞周期的研究进行综述,着重阐述PP2A-B亚基经由细胞周期因子依赖性激酶1(CDK1)调控细胞周期发挥抑癌作用的机制,为肿瘤的化学预防和靶向干预提供理论依据。

细胞周期蛋白E及相关因子表达与肾癌发生、侵袭及转移的相关性研究

目的探讨肾癌细胞周期蛋白E(cyclinE)、周期依赖性激酶2(CDK2)和周期依赖性激酶抑制因子P27的表达状况及其意义。方法应用免疫组化SP法及RT-PCR检测37例肾癌组织、13例癌周正常肾组织中cyclinE、CDK2和P27蛋白及mRNA表达。并将上述指标与临床病理特征进行统计学分析。结果肾癌组织中cyclinE、CDK2阳性表达率分别为51.4%、43.2%,明显高于癌旁正常肾组织(P<0.05),并且随肿瘤分级及分期的升高、肿瘤转移而升高;两者mRNA含量变化同蛋白表达水平相符;相反,P27在肾癌和癌旁正常肾组织中表达量分别为48.6%、69.2%,二者差异显著(P<0.05),P27表达随肿瘤分级及分期升高、肿瘤的远位转移出现降低趋势。结论cyclinE、CDK2、P27参与了肿瘤形成及侵袭过程,是反映肾癌生物学特征有价值的标志物。

kshv-mir-k12-1-5p靶向调控CDKN1A影响卡波西肉瘤的细胞周期

目的研究kshv-mirT12VTp通过靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1 A(CDKN1A)影响卡波西肉瘤(KS)的细胞周期&方法生物信息学软件预测kshwmu-kl2NVp是否有CDKNlA的结合位点;双荧光素酶实验检测kshv-mir-k12-1-5p是否靶向结合CDKNlA;将kshv-mir-k12-1 Vp模拟物(mimic//抑制物(inhibitor)分别转染到卡波西肉瘤细胞株(SLK)中,Western blot和qRTTCR方法检测kshv-mir-k12-1-5p对CDKNlA的调控作用;PI法检测kshe-mU-k12-1-5p对KS细胞周期的影响&结果MiOee靶基因预测软件分析显示:kshwmiRkl2VTp与CDKNlA的3,非翻译区(3PTR)有结合位点;荧光素酶活性结果分析证实kshe-mi e-k12-1-5p的作用合位点(P<0.01);Western blot和qRTTCR结果显示:在蛋白水平和mRNA水平上,kshwmiRkl2NTp可显著降低CDKNlA的表达水平(P<0.01);PI实验结果显示:与其余各组比较,k/wmio kl2NTp mimics组PI值(51.43土0.75%)最高(P<0.01),能加速KS细胞周期进程;与其余各组比较,kshwmiRkl2N-5p inhibitor组PI值(3274±1.28)%最低#P<0.01),能减慢KS细胞周期进程&结论CDKNlA是kWiwmiRkl2NTp的靶基因,kshe-mi e-k12-1-5p通过靶CDKN1A的表达影响卡波西肉瘤的细胞周期.

高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈病变组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6和E2F转录因子1蛋白表达的关系

目的 分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈病变组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)和E2F转录因子1(E2F-1)蛋白表达的关系。方法 选取2018年1月—2020年12月杭州市第一人民医院收治的慢性宫颈炎患者134例,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ/Ⅱ级患者131例,CINⅢ级患者129例,宫颈癌患者118例,分别记为A组、B组、C组、D组,4组均取病灶组织,采用免疫组化二步法检测CDK6、E2F-1蛋白表达,比较4组高危型HPV感染率、病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达情况及阳性率;比较D组不同临床病理特征患者癌组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率;分析各组高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达的关系。结果 4组高危型HPV感染率,病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。D组中Ⅲ+Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移的患者病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率,高危型HPV感染率均高于Ⅰ+Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的患者(均P<0.05)。在4组中,高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达均呈正相关(r=0.612、0.703、0.747、0.846,均P<0.05;r=0.549、0.697、0.721、0.835,均P<0.05)。结论 宫颈病变高危型HPV感染率,病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率高,Ⅲ+Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移的患者病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率高,高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达均呈正相关。

溃疡性结肠炎细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B反义RNA 1基因多态性和单倍型分析

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)基因多态性及其单倍型与溃疡性结肠炎(UC)发病风险的关系。方法选择2012年1月至2021年1月温州医科大学附属第二医院(育英儿童医院)消化内科确诊的534例UC患者,以及同期性别、年龄相匹配的560名健康对照者。采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术检测静脉血CDKN2B-AS1(rs1063192、rs10757274、rs10757278、rs1333048、rs2383207)的基因型。采用非条件logistic回归分析UC患者与健康对照者CDKN2B-AS1基因多态性的分布差异,以及对UC临床病理特征的影响。应用Haploview 4.2软件进行连锁不平衡和单倍型分析。采用卡方检验进行统计学比较。结果UC患者rs1063192的变异基因型AG+GG和变异等位基因G的频率均高于健康对照者[32.4%(173/534)比24.8%(139/560)、18.1%(193/1068)比13.7%(153/1120)],差异均有统计学意义[OR=1.45、1.40,95%置信区间(95%CI)1.12~1.89、1.11~1.77,P=0.006、0.004,校正P=0.030、0.020]。UC患者rs10757274的变异等位基因G的频率低于健康对照者[34.7%(371/1068)比39.5%(442/1120)],差异有统计学意义(OR=0.82,95%CI 0.69~0.98,P=0.025),但经Bonferroni法校正后,差异无统计学意义(校正P>0.05)。蒙特利尔分型为广泛结肠炎的患者rs1063192的纯合子变异基因型GG的频率高于直肠炎+左半结肠炎患者[6.6%(14/211)比1.9%(6/323)],差异有统计学意义(OR=3.92,95%CI 1.47~10.42,P=0.006,校正P=0.030)。CDKN2B-AS1基因的rs10757274、rs2383207、rs10757278和rs1333048彼此存在连锁不平衡关系。UC患者单倍型GGGC的频率低于健康对照者[33.3%(355.5/1068)比37.8%(423.4/1120)],而单倍型AGGC的频率高于健康对照者[6.7%(71.7/1068)比3.6%(40.3/1120)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.81、11.16,P=0.028、<0.001)。结论CDKN2B-AS1基因的rs1063192变异可能增加UC发病风险,其纯合子变异基因型GG携带者发生广泛结肠炎的风险可能增高。由rs10757274、rs2383207、rs10757278、rs1333048构成的单倍型中,携带单倍型GGGC可能降低UC发病风险,而携带单倍型AGGC可能增加UC发病风险。rs10757274变异与UC发病风险的相关性仍需扩大样本量进一步验证。

CDK6及E2F-1参与细胞周期调控pRb通路的研究进展

目前肿瘤的本质被认为是一种细胞周期病,细胞周期的调控是一种受多条件限制、由多因素参与的复杂并且精细的过程,其经典途径包括pRb途径及p53途径,其中任何一个环节出现异常,均可能导致肿瘤的发生。细胞周蛋白依赖性激酶6(CDK6)、核转录调节因子E2F-1均参与细胞周期调控的RB通路,在G1期向S期转换过程中起到非常关键的作用。现有研究已证实,在人体的很多肿瘤中CDK6、E2F-1表达均呈现异常,其与肿瘤的发生发展有密切联系。因此,进一步了解二者在细胞周期调控中的作用及其在不同类别肿瘤中的表达异常对了解肿瘤的发生发展有重大意义。

细胞周期调控基因及Bcl-2、c-Jun基因在人肝细胞脂肪变性过程中的表达变化

目的观察细胞周期调控基因及Bcl-2、c-Jun基因在人肝细胞L02脂肪变性过程中的表达变化。方法以油酸和软脂酸(2∶1)混合液处理L02细胞0、5、10、20 h,建立人肝细胞脂肪变性模型。用油红O染色检测L02细胞内脂质含量;用荧光定量PCR技术检测L02细胞脂肪变性过程中CDK2、CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、c-Jun mRNA表达。结果随造模时间延长,L02细胞内橘红色脂滴聚集越来越多,至造模20 h,肝细胞染成橘红色。L02细胞内CDK2 mRNA相对表达量逐渐升高,造模5 h达最高(P均<0.05),随后逐渐下降;CDK4 mRNA相对表达量逐渐升高,造模10 h达最高(P均>0.05),随后逐渐下降,造模20 h最低(P均>0.05);不同时间点Cyclin D1 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P均>0.05);Bcl-2 mRNA相对表达量随造模时间延长而升高,造模10 h达最高(P<0.05),随后降低;造模5、10、20 h的c-Jun mRNA相对表达量均较造模0 h高(P均<0.05),但无变化规律。结论人肝细胞L02脂肪变性过程中癌症相关基因CDK2、CDK4、Bcl-2、c-Jun表达先升高后降低,Cyclin D1表达变化不明显。

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

[目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。[方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型+si-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1组、模型+miR-NC组、模型+miR-98-5p模拟物组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。[结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P<0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。[结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。