RNA干扰INK4位点反义非编码RNA抑制人肺癌细胞系生长的分子机制

目的探讨INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)下调对CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇的调控及对人肺癌细胞生长的影响。方法通过RNA干扰下调人肺鳞状细胞癌细胞系H520中ANRIL的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰前后细胞中ANRIL mRNA的表达变化,绘制细胞生长曲线;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测RNA干扰前后细胞中细胞同期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达变化。结果 RNA干扰可显著下调ANRIL mRNA的表达(P<0.05),ANRIL下调能抑制人肺鳞状细胞癌细胞系H520的生长(P<0.05),引起CDKN2B、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 RNA干扰AN-RIL能抑制人肺鳞状细胞癌细胞的生长,ANRIL可能通过调控CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇起作用。

肺癌的发生与P16蛋白表达的关系

P16抑癌基因是一种肿瘤抑制因子，其所编码的蛋白是周期素依赖激酶抑制蛋白的一种，在细胞周期进程中起负调控作用。P16蛋白缺失或异常可导致周期依赖激酶4（CDK4）活性上升，引起细胞增殖失控，导致Rb蛋白磷酸化，促进细胞从G1期向S期转变和细胞增殖。

p16INK4a/p19Arf与年龄相关性胰岛β细胞功能

2型糖尿病是一种与年龄密切相关的疾病,随着年龄增加,胰岛β细胞增殖能力和分泌能力下降,糖尿病患病率明显增加,但其机制尚不清楚.最近研究发现,细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制剂p16INK4a是引起胰岛β细胞年龄相关性老化的重要调控因子.研究表明,通过p16INK4a介导的胰岛老化机制可能有如下两个:p38MAPK(mitogen-activated proteinkinase)途径和PDGFR(platelet-derived growth factor receptor)途径,两者均引起p16ink4a及p19ARF表达增加,而损害胰岛细胞增殖.本文综述年龄相关性胰岛β细胞功能下降的潜在机制,从而为改善胰岛β细胞功能提供新的分子靶点.

细胞学p16^(INK4a)检测在宫颈癌初筛与早期诊断中的意义

目的探讨细胞学p16^(INK4a)检测在宫颈癌初筛与早期诊断中的意义。方法于2019年2月至2019年12月招募湖北十堰地区1927例女性作为研究对象。所有受检者均签署知情同意书,并接受宫颈HR-HPV检测、TCT、p16^(INK4a)检查。筛查时任意一项目结果阳性即需接受阴道镜下宫颈管搔刮加四象限定点加随机活检(POI)方案活检。所有细胞学样本均由两位阅片医师判读。结果完成筛查人群共计1927例,任一筛查项目为阳性者比率为13.91%(268/1927),其中p16^(INK4a)、TCT、HR-HPV阳性率分别为7.06%(136/1927)、4.77%(92/1927)和8.46%(163/1927)。首筛阳性人群中回叫应答率为83.21%(223/268),病理诊断结果176例为非宫颈上皮内瘤变(CIN),27例为CIN1期病变,11例为CIN2期病变以及9例CIN3期病变。对p16^(INK4a)结果判读的阴性一致率、阳性一致率和整体一致性均明显高于TCT(P<0.01)。而诊断效能方面,p16^(INK4a)与HR-HPV的灵敏度均明显大于TCT(P<0.05),但二者间无明显差异(P>0.05),而p16^(INK4a)与TCT的特异度明显大于HR-HPV(P<0.05),但二者间无明显差异(P>0.05)。结论p16^(INK4a)染色作为新一代宫颈细胞检查技术,染色简捷快速、成本较低,其结果易判读,可重复,客观性强,具有较高敏感度与特异度,有望成为大范围人群普查筛选的技术。

可切除性胰腺癌P19ARF、P16INK4a表达的临床意义

目的 :了解P16INK4a(P16 )和P19ARF(P19)两种抑癌基因在可切除的人胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 :胰腺癌切除标本 30例 ,用单克隆抗体免疫组化法同时测定P16和P19蛋白的表达 ,单变量和多变量分析P16、P19和主要临床病理指标对胰腺癌生存的影响。结果 :胰腺癌的P16、P19表达率分别为13.3%和 5 0 % ;P16与P19表达无相关性。P16的表达率与胰腺癌的临床病理分期和分级呈负相关 ;有大血管浸润的胰腺癌P19阳性率 (2 0 % )低于无血管浸润者 (72 .2 % ,P =0 .0 1)。P19在局部淋巴结阳性的胰腺癌表达率低于淋巴结阴性者 ,但无统计学意义。单变量分析显示 :肿瘤 >4cm、分期、大血管侵犯、3个以上的淋巴结转移及P16失表达是生存的不利因素 ;多变量分析则发现只有后四者才是独立的生存不利因素。结论 :P16的下调是胰腺癌发生发展的一个重要原因 ,是预后的独立的危险因素和胰腺癌生物学行为高度恶性的重要分子基础 ;P19下调与胰腺癌的大血管浸润和淋巴结转移有关 ,P19异常可能是胰腺癌播散的一种标示。

p19^(ARF)和p16^(INK4a)在人胰腺癌、结直肠癌中表达的比较研究

目的 :比较 p16 INK4a和 p19ARF2种抑癌基因在可切除的人胰腺癌和结直肠癌组织中的表达形式 ,从而对其在这两种肿瘤的发生、发展中的意义及两种肿瘤生物学行为差异的本质有一个初步认识。方法 :胰腺癌和结直肠癌切除标本各 30例的石蜡标本 ,用单克隆抗体免疫组化ABC法同时测定肿瘤组织的 p16、p19和 p2 1蛋白的表达。结果 :胰腺癌的 p16表达率 13.3%(4 / 30 )明显低于结直肠癌的 4 0 % (12 / 30 ,P <0 .0 2 ) ;而 p19在两者的表达率差异不明显。p16与 p19表达无相关性。p16的表达率与胰腺癌的临床病理分期和分级呈负相关 ;有大血管浸润的胰腺癌p19阳性率 (2 0 % )低于无血管浸润者 (72 .2 % ,P =0 .0 1)。P19在局部淋巴结阳性的胰腺癌表达率低于淋巴结阴性者 ,但无显著差异。而p16和 p19与结直肠癌的病理分期、分级、血管浸润和淋巴结转移均无明显相关。结论 :p16的下调是胰腺癌发生发展的一个重要原因 ,可能也是胰腺癌生物学行为明显不同于结直肠癌的主要原因 ;我们还首次发现 ,p19下调与胰腺癌的大血管浸润和淋巴结转移有关 ,p19异常可能是胰腺癌播散的 1种标示。未发现这 2种抑癌基因与结直肠癌发生发展的明显关系。

曲古抑菌素A对卵巢癌细胞分化、增殖的影响及其机制

目的观察曲古抑菌素A(TSA)对卵巢癌细胞分化、增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法培养卵巢癌上皮细胞系HO8910,将细胞分为A、B、C、D组,分别加入0、100、200、400 nmol/L TSA。分别于培养24、48、72 h观察A、C组细胞形态变化;于培养24 h后采用Western blotting法检测四组细胞中的Y染色体上的性别决定区盒2(SOX-2)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)和叉头样转录因子A2(FOXA-2)。分别采用MTT法及Ed U染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测不同周期细胞。采用Western blotting法检测各组细胞中的Cyclin D1和p21Cip1蛋白。结果 A组细胞多为类圆形或椭圆形,外表规整,成簇生长。C组细胞发生形态转变,细胞密度有所下降。与A组相比,B、C、D组细胞中SOX-2、OCT-4表达下调,FOXA-2表达升高(P均<0.05)。与A组相比,B、C、D组细胞增殖率降低,G_0/G_1期细胞比例增高,S期细胞比例减小,Cyclin D1蛋白表达下调,p21Cip1蛋白表达上调(P均<0.05)。结论 TSA可诱导卵巢癌HO8910细胞分化,抑制细胞增殖,其机制可能与调节细胞分化相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。

子宫颈腺样基底细胞癌与腺样囊性癌的临床病理特点比较

目的探讨并比较宫颈腺样基底细胞癌和腺样囊性癌的临床和病理组织学特点,提高临床及病理医师对该类病变的诊断及鉴别诊断水平。方法对2009年3月至2019年4月解放军总医院第一医学中心病理科诊治的9例宫颈腺样基底细胞癌和3例腺样囊性癌病例进行回顾性研究,详细复习临床资料,复阅全部病理切片,观察EnVision法免疫组织化学结果,分析其临床病理学特征,电话随诊其预后并查阅相关文献。结果二者均以绝经后妇女多见(发病年龄43~74岁)。腺样基底细胞癌患者临床常无症状,多以体检时宫颈涂片异常就诊,阴道镜检查时常无肿块。而腺样囊性癌患者多以阴道异常出血就诊,阴道镜检查时常有肿块。组织学上两种病变的共同特点为肿瘤呈巢状生长,由基底样肿瘤细胞构成,细胞巢周围常有栅栏状结构。两种病变可以共存,也可与鳞状细胞癌或鳞状上皮内病变混合存在。不同点为腺样基底细胞癌多位于宫颈鳞柱交界区及上皮下,巢团中央伴鳞状分化,或呈双层腺样排列,细胞形态温和,核分裂象偶见,间质反应不明显;而腺样囊性癌细胞巢内肿瘤细胞多呈筛状排列,筛孔内见均质红染及蓝染分泌物,细胞异型性明显,核分裂象易见,有显著的间质反应,其中1例癌巢周围为肉瘤区域。二者人乳头状瘤病毒(HPV)检测多呈阳性,9例腺样基底细胞癌中3例行HPV检测,5例行p16检测,均呈阳性表达;3例腺样囊性癌中2例行HPV检测,3例行p16检测,均呈阳性表达。电话随访截至2019年6月,随访时间2~37个月,9例腺样基底细胞癌中7例未出现复发转移,1例出现肺部毛玻璃样结节,1例术后32个月出现阴道残端复发。腺样囊性癌1例术后8个月出现肺部转移,并于术后2年死亡;另1例随诊6个月无复发、转移;1例失访。结论宫颈腺样囊性癌和腺样基底细胞癌均是来源于宫颈储备细胞的肿瘤,与高危型HPV感染有关。因二者的临床处理方式和预后不同,应对二者进行仔细的组织学评估及免疫组织化学分析,作出准确的病理诊断。

广州地区EB病毒相关胃癌的临床病理特征及相关分子表达

目的 观察鼻咽癌高发区广州地区EB病毒相关胃癌的构成比、临床病理特征、EB病毒的潜伏类型,并初步探讨DNMT1、p16和cyclin D1在发病过程中的作用.方法 对676例胃癌采用组织芯片和EBER1原位杂交的方法筛选EB病毒相关胃癌,并用免疫组织化学EnVision法检测EB病毒潜伏期膜蛋白（LMP）和DNMT1、p16和cyclin D1的表达.结果 在676例胃癌中,45例EB病毒阳性（6.7%）,EB病毒相关胃癌以男性为主,主要发生在胃的中上2/3,以弥漫型多见（P＜0.05）.EBNA1和LMP2A的阳性例数分别为42例（93.3%）和24例（53.3%）,EBNA2、LMP1和ZEBRA均未见表达.DNMT1、p16和cyclin D1在45例EB病毒相关胃癌的阳性例数分别为35例（77.8%）、10例（22.2%）和29例（64.4%）,在40例EB病毒阴性胃癌的阳性例数分别为20例（50.0%）、25例（62.5%）和12例（30.0%）,3个分子在两组胃癌的表达率差异均具有统计学意义（P＜0.05）.p16与肿瘤的浸润深度有关（P＜0.05）.LMP2A与DNMT1、DNMT1与p16、p16与cyclin D1存在相关关系（P＜0.05）.结论 广州地区EB病毒相关胃癌占胃癌构成比的6.7%（45/676）,EB病毒的潜伏类型部分为Ⅰ型,部分介于Ⅰ型和Ⅱ型之间.LMP2A、DNMT1、p16和cyclin D1的相互作用在EB病毒相关胃癌发生过程中起着重要的作用.