调控蛋白CDK1对口腔鳞癌预后的评价

目的:研究细胞周期调控蛋白1(cyclin-dependent kinases 1,CDK1)的表达对口腔鳞癌患者预后预测的意义。方法:用SP免疫组织化学法测定77例口腔鳞癌患者CDK1蛋白的表达,并结合患者的术后复发、转移及5年生存率情况进行相关分析。结果:CDK1蛋白阳性表达与口腔鳞癌患者术后复发及淋巴转移关系密切,并有统计学意义(P<0.05);同时患者CDK1蛋白阳性组的5年生存率显著低于阴性组,两组之间有统计学意义(P<0.05),阳性组患者预后更差。结论:CDK1蛋白的表达有希望成为预测口腔鳞癌患者预后的指标之一。

乳腺癌组织细胞周期依赖性蛋白激酶1的表达与微血管生成的关系

目的探讨细胞周期依赖性蛋白激酶1(PFTK1)在人乳腺癌组织中的表达,及其与乳腺癌临床病理特征的关系和对血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)表达的影响。方法随机选取乳腺癌组织及相应的癌旁组织各113例,采用免疫组织化学SP法检测PFTK1在其中的表达以及VEGF、MVD在乳腺癌组织中的表达,对所得数据进行统计学分析。结果PFTK1在乳腺癌组织中呈强弱不等的表达,总阳性率为55.8%(63/113),高于癌旁组织的33.6%(38/113),两组总阳性率比较差异存在统计学意义(P=0.001)。PFTK1阳性组的VEGF阳性表达率为71.4%(45/63),明显高于PFTK1阴性组的VEGF阳性表达率26.0%(13/50),两组阳性表达率比较差异存在统计学意义(P=0.000)。PFTK1阳性组及阴性组的MVD计数分别为(53.04±8.05)、(44.95±8.72),两组比较差异存在统计学意义(P=0.000)。根据腋窝淋巴结转移情况、TNM分期及Ki-67表达的分组中,PFTK1阳性表达率的差异存在统计学意义(P<0.05),而根据年龄、肿块大小、ER、PR及Her-2表达的分组中,PFTK1阳性表达率的差异不存在统计学意义(P>0.05)。结论 PFTK1可能促进乳腺癌微血管生成,而且可能与肿瘤细胞增殖、转移有关。

miR-130b对宫颈癌细胞修复TNF-α诱导性基因组双链DNA断裂作用的影响及机制

目的观察miR-130b对宫颈癌细胞修复基因组双链DNA断裂作用的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌细胞Siha分成6组,分别转染细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A(CDKN1A)基因过表达质粒pc DNA3. 1-CDKN1A(CDKN1A组)、pc DNA3. 1空载质粒(pc DNA3. 1组)、miR-130b mimics (miR-130b组)、miR-130b阴性对照核酸(NC组),共转染pc DNA3. 1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b组)、pc DNA3. 1和miR-130b mimics (pc DNA3. 1+miR-130b组)。TNF-α刺激细胞,用彗星试验测定基因组DNA尾距,流式细胞术测定磷酸化组蛋白2A变异体(γ-H2AX)蛋白; Real-time PCR、Western blotting法检测CDKN1A mRNA及其蛋白。分别将pc DNA3. 1/EGFP、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-wtUTR(野生型)、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-mutUTR(突变型)与miR-130b mimics或NC共转染Siha细胞,测定报告基因荧光相对活性;以TNF-α和DNA损伤增强剂AZD2461刺激各组细胞,用流式细胞术测定细胞凋亡水平。结果与pc DNA3. 1组比较,CDKN1A组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平降低(P均<0. 05);与NC组比较,miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率升高,CDKN1A mRNA、蛋白表达水平下降(P均<0. 05);与pc DNA3. 1+miR-130b组比较,CDKN1A+miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率下降(P均<0. 05);与共转染NC细胞相比,共转染miR-130b mimics使野生型细胞荧光相对活性降低(P <0. 05),而未改变突变型细胞荧光相对活性。结论 miR-130b通过直接靶定CDKN1A mRNA抑制其表达干扰宫颈癌细胞修复双链DNA断裂位点,从而促进细胞凋亡。

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1,P^(21Waf1/Cip1)表达的影响

目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1rnRNA的表达。结果:AngⅡ对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24 h达到峰值,且在0.001-0.1μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的Cyclin D1蛋白及mRNA的表达,促进P21Waf1/Cip1蛋白及mRNA表达。结论:甲基莲心碱可通过下调Cyclin D1及上调P21Waf1/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。

抑癌蛋白p27在乳腺浸润性导管癌细胞质中的表达及临床意义

目的:探讨p27蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法:免疫组化检测251例乳腺浸润性导管癌中p27蛋白的表达。结果:细胞质p27蛋白表达与乳腺浸润性导管癌组织学类型和雌激素受体表达相关,细胞质高表达p27蛋白的患者预后较好。结论:乳腺浸润性导管癌细胞质p27的表达是患者的预后因素,临床检测其表达水平将对乳腺癌恶性程度、复发转移的可能性以及患者预后的评估均具有重要的参考价值。

转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化

目的观察转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化。方法将人卵巢癌干细胞(具有CD133+、CD117+特征的人卵巢癌细胞株HO8910)分为重组质粒组、空质粒组和空白对照组,重组质粒组转染真核细胞表达载体pc DNA3.1-ELF5+EGFP,空质粒组转染空载质粒pc DNA3.1-EGFP,空白对照组不做转染;分别于培养24、48、72、96 h后采用CCK-8法观察细胞增殖能力,于培养48 h后采用流式细胞仪观察细胞周期分布情况、测算细胞凋亡率,于培养48 h后采用Western blotting法检测各组细胞中的p21、Caspase-3蛋白。将重组质粒组、空质粒组和空白对照组细胞分别接种于雌性裸鼠右腋窝皮下制作卵巢癌移植瘤,每组接种5只;待移植瘤形成后取肿瘤组织,测量肿瘤最大直径及质量,测算细胞凋亡率,检测细胞中的p21、Caspase-3蛋白。结果重组质粒组培养24、48、72、96 h后细胞增殖能力较空质粒组和空白对照组明显下降(P均<0.05)。重组质粒组中阻滞于G0/G1期的细胞比例、细胞凋亡率及细胞中p21、Caspase-3蛋白相对表达量均高于空质粒组和空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组移植瘤最大直径和肿瘤质量小于空质粒组、空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组移植瘤组织中细胞凋亡率及p21、Caspase-3蛋白相对表达量高于空质粒组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖受抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡增多、成瘤能力减弱,机制可能与p21、Caspase-3蛋白表达上调有关。

芪术抗癌方通过PCK1/Akt/p21信号轴调控肿瘤代谢重编程抑制肝细胞癌增殖的作用机制

目的:研究芪术抗癌方对二乙基亚硝胺(DEN)联合四氯化碳(CCl4)诱导肝癌模型小鼠肝脏及人肝癌Huh7细胞中糖异生酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)的调控作用,探讨其调节肝癌细胞代谢重编程并抑制细胞增殖的作用机制。方法:使用DEN联合CCl4腹腔注射构建肝癌小鼠模型,设置正常组、模型组、芪术抗癌方组,每天予以芪术抗癌方(3.51 g·kg^(-1))或等体积生理盐水灌胃,干预8周后收集血清及肝脏样本。检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)和甲胎蛋白(AFP)评估各组小鼠肝功能变化;苏木素-伊红(HE)染色及天狼星红染色观察肝组织病理改变。细胞实验将Huh7细胞分为空白组、芪术抗癌方低、中、高剂量组和(或)PCK1抑制剂(盐酸SKF-34288)组、索拉非尼组,给予对应含药血清和药物处理。采用细胞增殖活性检测(CCK-8)法、集落形成实验、Edu荧光标记检测、细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量检测、细胞周期流式检测评估各组Huh7细胞增殖能力、能量代谢变化情况及对Huh7细胞周期的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)用于检测PCK1、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的蛋白表达水平。结果:与模型组比较,芪术抗癌方组小鼠肝癌组织中细胞异型、坏死、胶原纤维沉积等病理改变有所减轻,肝脏肿瘤数量显著减少(P<0.01),血清ALT、AST、γ-GT和AFP水平显著降低(P<0.01)。细胞水平上,与空白组比较,芪术抗癌方含药血清低、中、高剂量组和索拉非尼组均可显著降低Huh7细胞存活率(P<0.01),显著减少Edu标记的阳性细胞数(P<0.01),显著抑制其克隆增殖能力(P<0.01);芪术抗癌方组还可降低细胞内ATP含量(P<0.05),增加细胞周期G0/G1期分布比例(P<0.05),且呈剂量依赖性。与模型组和空白组比较,芪术抗癌方组小鼠肝癌组织及Huh7细胞的PCK1、p21蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01),p-Akt蛋白水平显著增加(P<0.01)。与空白组比较,盐酸SKF-34288组Huh7细胞ATP含量、细胞存活率明显升高(P<0.05),但Edu阳性细胞率、G0/G1期分布比例变化差异无统计学意义;与盐酸SKF-34288组比较,芪术抗癌方联合盐酸SKF-34288组可明显降低Huh7细胞的ATP含量、细胞存活率及Edu阳性细胞率(P<0.05),增加G0/G1期分布比例(P<0.05)。结论:芪术抗癌方可能通过激活PCK1诱导肝癌细胞代谢重编程促进Akt/p21介导的抑癌作用,从而发挥抗肝癌增殖的作用机制。

miR-496靶向调控CDK1促进肺癌A549细胞凋亡

为探讨miR-496对肺癌A549细胞的增殖和凋亡调控作用及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测miR-496在肺癌和癌旁组织中的表达,记A549细胞转染miR-496 mimics及对照miR-NC;通过CCK8检测miR-496对肺癌A549细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测miR-496对A549细胞凋亡的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-496的靶基因;采用Western blotting检测miR-496对靶基因CDK1蛋白表达的影响。荧光定量PCR结果显示,肺癌组中的miR-496的相对表达量较癌旁组比较表达显著下调(p<0.01)。CCK8结果显示,miR-496 mimics组细胞在培养24 h和48 h后细胞增值率(A450值)较miR-NC对照组显著降低。流式细胞术检测结果显示,miR-496 mimics组细胞凋亡率较miR-NC对照组显著增加。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-496 mimics与CDK13’UTR WT载体共转染组荧光强度明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组。Western blotting检测结果显示,miR-496 mimics组细胞的CDK1蛋白表达量与miR-NC对照组比较显著降低(p<0.01),miR-496 mimics+CDK1组细胞CDK1蛋白表达量与miR-496mimics组比较显著升高(p<0.01)。miR-496能够通过抑制靶基因CDK1的表达,抑制肺癌细胞A549的增殖,促进肺癌A549细胞凋亡。本研究结果有助于了解miR-496和CDK1在肺癌中的作用,为肺癌的治疗提供理论依据和实验基础。

新辅助化疗联合贝伐珠单抗治疗三阴性乳腺癌的效果及对癌组织PFTK1表达的影响

目的探讨新辅助化疗联合抗血管内皮生长因子(VEGF)靶向治疗药物贝伐珠单抗治疗三阴性乳腺癌的效果及对癌组织细胞周期依赖性蛋白激酶1(PETK1)表达的影响。方法前瞻性研究。抽取2015年9月至2022年9月临汾市中心医院收治的三阴性乳腺癌患者80例,按照就诊顺序分为治疗组和对照组,每组40例。对照组采用多柔比星+环磷酰胺新辅助化疗方案治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用贝伐珠单抗注射液。比较两组患者的治疗效果,比较两组治疗前后血清VEGF水平及病理组织标本中PETK1的表达情况,比较两组患者治疗期间不良反应发生情况。结果治疗组治疗总有效率(57.50%,23/40)高于对照组(30.00%,12/40),P<0.05。治疗后,两组血清VEGF-165、VEGF-121、VEGF-145水平均低于治疗前(P均<0.05),且治疗组血清VEGF-165、VEGF-121、VEGF-145水平低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组病理组织标本PFTK1阳性表达率比较差异未见统计学意义(P>0.05);治疗后,治疗组复查中PFTK1阳性表达率(32.5%,13/40)低于对照组(57.5%,23/40),P<0.05。两组不良反应发生率比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论新辅助化疗联合抗VEGF靶向治疗药物贝伐珠单抗治疗三阴性乳腺癌的疗效较好,其作用机制可能通过抑制PFTK1的表达来降低血管新生因子,发挥抗肿瘤作用。

CDK1 siRNA干扰在Taxol诱导细胞凋亡中的作用

目的研究转染细胞周期依赖性蛋白激酶1（cyclin．dependent kinase1，CDK1）siRNA、以及转染后进行凋亡刺激对细胞周期和凋亡的影响，探讨CDK1在细胞凋亡中的确切作用，揭示细胞周期与细胞凋亡协调的分子机制。方法以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象，脂质体转染CDK1siRNA，转染后48h加紫杉醇（Tax01）（20μg／m1）刺激凋亡，Western印迹检测CDK1和抗凋亡蛋白BCL2表达，AnnexinV／PI法检测细胞的凋亡，流式细胞仪分析DNA含量检测细胞周期。结果转染CDK1 siRNA后，CDK1蛋白的表达下降，细胞周期G2／M期比例增加，细胞凋亡率与对照相比没有明显升高。只加Taxol刺激12h后细胞凋亡率增加并伴有S期和G2／M期比例增加。转染CDKlsiRNA后再用Taxol刺激，其细胞凋亡率没有明显改变，G2／M期阻滞效应也没有叠加。BCL2蛋白只在加Taxol刺激组表达下降，与CDK1表达减少没有相关性。结论siRNA沉默导致的CDK1表达降低只导致细胞周期G2／M期阻滞，没有引起细胞凋亡；CDK1的表达降低对紫杉醇所诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡效应没有明显影响。