高迁移率族蛋白B1对树突状细胞表型、吞噬功能及ERK/JNK/P38 MAPK信号通路的影响

目的探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)对硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导的树突状细胞(DCs)表型、吞噬功能及细胞外信号调节激酶(ERK)/氨基末端蛋白激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶P38抗体(P38 MAPK)信号通路的影响。方法分别以30、300、600μmol·L^(-1)IS干预人原代DC细胞24 h,分为Control组、IS-30组、IS-300组、IS-600组,通过流式细胞分析鉴定细胞表型并检测细胞吞噬功能;细胞经600μmol·L^(-1)IS干预24 h后加入1 mg·L^(-1)anti-HMGB1或经1 mg·L^(-1)HMGB1单独处理后分为Control组、IS组、HMGB1组、IS^(+)anti-HMGB1组,通过流式细胞分析鉴定细胞表型并检测细胞吞噬功能;Western blot和免疫荧光染色检测ERK/JNK/P38 MAPK信号通路相关蛋白表达。结果随IS浓度增加,CD83^(+)和CD86^(+)细胞数逐渐增加(P<0.01),DCs吞噬能力逐渐下降(P<0.01);与IS组相比,IS^(+)anti-HMGB1组的CD83^(+)和CD86^(+)细胞数明显减少(P<0.01),细胞吞噬能力增加(P<0.01)。此外,与Control组比较,IS或HMGB1组p-ERK/ERK、p-P38/P38、p-JNK/JNK的蛋白表达升高(均P<0.01);与IS组相比,IS^(+)anti-HMGB1组p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK的蛋白表达降低(均P<0.01)。结论拮抗HMGB1可抑制IS诱导的DCs表型及成熟并抑制ERK/JNK/P38 MAPK信号通路激活。

血清高迁移率族蛋白B1与可溶性髓系细胞触发受体1联合检测对脓毒症并发急性肾损伤的诊断价值

目的探讨血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、可溶性髓系细胞触发受体1(soluble myeloid cell trigger receptor-1,sTREM-1)联合检测对脓毒症并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的诊断价值。方法回顾性选择徐州市中心医院2020年1月1日至2022年1月31日收治的156例脓毒症患者,另选取同期68例体检健康者为对照组。对比两组受试者血清HMGB1、sTREM-1水平,多因素Logistic回归分析脓毒症并发AKI的影响因素,受试者工作特征曲线分析血清HMGB1、sTREM-1水平对脓毒症并发AKI的诊断价值。结果脓毒症组患者血清HMGB1[172530(133870,204010)ng/L比83720(63480,99870)ng/L]、sTREM-1[(49.56±8.03)ng/L比(24.96±5.24)ng/L]水平明显高于对照组(P<0.05);多因素Logistic分析显示,血肌酐(OR=1.079,95%CI:1.037~1.122)、HMGB1(OR=1.933,95%CI:1.376~2.714)、sTREM-1(OR=1.201,95%CI:1.101~1.309)为脓毒症并发AKI的独立危险因素(P<0.05);受试者工作特征曲线显示,HMGB1联合sTREM-1[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.928,95%CI:0.876~0.963]诊断脓毒症并发AKI的敏感度、特异度、准确度高于HMGB1(AUC=0.790,95%CI:0.718~0.851)、sTREM-1(AUC=0.778,95%CI:0.705~0.840)诊断。结论脓毒症患者血清HMGB1、sTREM-1水平明显增高,是脓毒症并发AKI的独立危险因素。

hnRNPA2B1通过抑制转铁蛋白受体增强胰腺癌细胞对铁死亡的抵抗

目的:探讨异质核核糖核蛋白A2B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1,hnRNPA2B1)对胰腺癌细胞铁死亡的影响及其潜在机制。方法:将3种胰腺癌PaTu8988、MIA-paca2、PANC1细胞用不同浓度Erastin处理3 d,CCK8法检测细胞活性,计算3种细胞Erastin半数抑制浓度(IC_(50))并比较其对Erastin的抵抗力;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法分别检测3种胰腺癌细胞中hnRNPA2B1 mRNA和蛋白的相对表达。通过GEPIA平台分析hnRNPA2B1在胰腺癌组织和正常组织中的差异性表达,通过GEO数据库下载临床数据集分析差异性表达hnRNPA2B1患者的预后。在PaTu8988细胞中干扰hnRNPA2B1表达,分别转染sh-Control、sh-hnRNPA2B1质粒;在PANC1细胞中过表达hnRNPA2B1,分别转染Vector、Flag-hnRNPA2B1质粒;分别采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测转染效率,通过Transwell实验检测hnRNPA2B1对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响,通过CCK8法检测hnRNPA2B1对胰腺癌细胞增殖的影响;对sh-Control组和sh-hnRNPA2B1组、Vector组和Flag-hnRNPA2B1组,分别予以对照(0μmol/L Erastin)、Erastin(IC_(50)浓度)处理,通过流式细胞术检测脂质过氧化物含量,比色法检测丙二醛和组织铁含量,此外sh-hnRNPA2B1组和Flag-hnRNPA2B1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin-1,坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂ZVAD-FMK,台酚蓝染色法检测细胞活性;qRT-PCR和蛋白免疫印迹法分别检测胰腺癌细胞转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)、铁蛋白重链、谷胱甘肽过氧化物酶4、溶质载体家族7成员11等mRNA和蛋白相对表达水平。结果:3种胰腺癌细胞对Erastin抗性由高到低依次是PaTu8988、MIA-paca2、PANC1细胞,其Erastin IC_(50)依次为18.020、15.760、2.947μmol/L;hnRNPA2B1表达量由高到低的趋势与Erastin IC_(50)趋势相同,于PaTu8988细胞中最高,MIA-paca2细胞中次之,PANC1细胞中最低(P均<0.05);胰腺癌组织中hnRNPA2B1表达水平明显高于正常组织,高表达hnRNPA2B1患者预后较差(P均<0.05)。下调hnRNPA2B1表达后,PaTu8988细胞迁移、侵袭和增殖能力明显降低,上调则与之相反(P均<0.05)。经Erastin处理后sh-hnRNPA2B1组和Flag-hnRNPA2B1组降低的细胞活性仅可被Ferrostatin-1挽救(P<0.05);与sh-Control组相比,sh-hnRNPA2B1组脂质过氧化物、丙二醛和组织铁含量明显增高(P均<0.05);与Vector组相比,Flag-hnRNPA2B1组脂质过氧化物、丙二醛和组织铁含量明显降低(P均<0.05)。hnRNPA2B1可抑制TFRC表达,干扰hnRNPA2B1则与之相反(P均<0.05)。结论:hnRNPA2B1通过抑制TFRC表达阻止铁蓄积,从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。

山奈酚靶向B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1抑制肾透明细胞癌细胞生物行为

目的 探讨山奈酚(Kaempferol)靶向B淋巴细胞瘤2相关蛋白(BCL2)A1抑制肾透明细胞癌(ccRCC)细胞的作用机制。方法 将ccRCC细胞(ACHN和769-P)分成Vector组(转染空载质粒)或Control组(正常培养)、Kaempferol组(Kaempferol处理细胞)和Kaempferol+BCL2A1组(转染BCL2A1并用Kaempferol处理)。生物信息学预测Kaempferol靶点并分析其与临床不良表型之间关系。噻唑蓝(MTT)检测不同浓度Kaempferol处理细胞的活力。CCK-8试剂盒和克隆形成检测细胞增殖能力。Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测Kaempferol体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki67。Western印迹检测BCL2A1及上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白表达。结果 生物信息学数据库和软件分析显示,Kaempferol靶向BCL2A1,BCL2A1在ccRCC组织中表达上调且与临床不良表型有关。Kaempferol浓度和时间依赖性明显抑制ccRCC细胞BCL2A1蛋白表达(P<0.05)。以120或150μmol/L浓度分别作用ACHN、769-P细胞后,细胞活力明显下降(P<0.05)。以相应浓度Kaempferol作用细胞后,ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。Kaempferol组移植瘤体积、重量、Ki67相对表达量和BCL2A1蛋白表达明显小于Control组(P<0.05)。与Vector组相比,BCL2A1组中BCL2A1蛋白表达明显增加(P<0.05)。与Control组相比,Kaempferol组中BCL2A1蛋白表达、增殖细胞、克隆细胞、迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与Kaempferol组相比,Kaempferol+BCL2A1组上述指标明显增多(P<0.05)。细胞经Kaempferol干预后,E-cadherin蛋白表达明显增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显减少,而BCL2A1可明显逆转Kaempferol对EMT相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论 Kaempferol可抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过靶向调节BCL2A1蛋白表达,影响EMT相关蛋白表达实现的。

多发伤患者血清高迁移率族蛋白B1及可溶性髓样细胞触发受体-1水平变化及预后意义

目的·检测多发伤患者不同时间点的血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)及可溶性髓样细胞触发受体-1(soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1,sTREM-1)水平,并分析其与病情严重程度、并发症及预后的相关性。方法·选取2020年12月至2022年12月在苏州市第九人民医院急诊科收治的多发伤患者92例,根据患者入院时的损伤严重程度评分将患者分为轻伤组(n=24)、重伤组(n=58)、严重伤组(n=10);依据入院后是否合并多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)将患者分为MODS组(n=20)和非MODS组(n=72);根据创伤发生后28 d内结局将患者分为死亡组(n=13)和存活组(n=79)。检测患者入院后静脉血炎症因子指标。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测创伤发生后24 h、72 h及7 d的血清HMGB1、sTREM-1水平。分析不同分组间血清HMGB1、sTREM-1水平的差异,并采用多因素Logistic回归分析多发伤患者不良结局的影响因素。运用受试者工作特征(receiver operating characteristics,ROC)曲线评估HMGB1、sTREM-1对不良结局的预测价值。结果·重伤和严重伤组各时间点HMGB1、sTREM-1水平明显高于轻伤组(均P<0.05),严重伤组创伤发生后72 h和7 d的HMGB1水平及24 h和72 h的sTREM-1水平明显高于重伤组(均P<0.05)。各时间点HMGB1与sTREM-1水平呈正相关性(r=0.645,r=0.942,r=0.722;均P<0.05)。MODS组创伤发生后72 h和7 d的HMGB1水平及24 h和72 h的sTREM-1水平明显高于非MODS组(均P<0.05);死亡组创伤发生后72 h和7 d的HMGB1水平及24 h、72 h的sTREM-1水平明显高于存活组(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,创伤发生后7 d的HMGB1水平及入院时间、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)水平是多发伤患者不良结局的独立影响因素(均P<0.05)。ROC曲线显示,创伤发生后7 d的HMGB1水平预测不良预后的曲线下面积为0.890,敏感度为83.5%,特异度为92.3%。结论·多发伤患者创伤发生后不同时间点HMGB1及sTREM-1水平与MODS及生存结局相关,且创伤发生后7 d的HMGB1水平是多发伤患者不良结局的独立影响因素。

组蛋白H2A去泛素化酶BAP1对恶性胶质瘤细胞发生发展的作用及临床应用价值研究

目的探索乳腺癌/卵巢癌易感基因1相关蛋白1(breast/ovarian cancer susceptibility gene 1 associated protein 1,BAP1)对人源恶性胶质瘤发生、发展的作用与BAP1作为恶性胶质瘤临床诊断标志物的可行性。方法基于基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)的子数据集GSE4290,GSE90598,分析BAP1在正常组织及胶质瘤组织中的差异性表达情况;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析BAP1对恶性胶质瘤的早期诊断价值;选取自主收集的非配对28例恶性胶质瘤患者的原发灶组织、5例颅脑外伤患者内减压术切除的非瘤脑组织,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测BAP1的表达水平;利用靶向BAP1的特异性小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)瞬时转染U251细胞系,进一步检测其干涉效率;基于流式细胞仪分析BAP1下调的U251细胞系,其细胞周期、凋亡的变化情况。结果生物信息学结果显示,BAP1在恶性胶质瘤组织中的表达水平均低于正常脑组织(GSE4290:1209±18.49 vs 1476±53.90;GSE90598:5.19±0.10 vs 5.65±0.21),差异具有统计学意义(t=5.115,2.267,均P<0.05)。ROC曲线显示,BAP1可高效区分恶性胶质瘤组织与正常脑组织(GSE4290:AUC=0.78;GSE90598:AUC=0.75,均P<0.05)。临床标本结果显示,BAP1在恶性胶质瘤原发灶组织中的表达水平显著低于非瘤脑组织(0.27±0.04 vs 1.06±0.07),差异具有统计学意义(t=10.22,P<0.001)。在U251细胞系中下调BAP1的表达,其细胞周期中S期细胞比例明显增多,由17.59%分别增至27.21%(siBAP1-1)和25.79%(siBAP1-2),差异具有统计学意义(t=6.576,6.642,均P<0.01),而细胞凋亡水平则有所下降,由10.17%分别降至2.70%(siBAP-1)和3.00%(siBAP-2),差异具有统计学意义(t=10.31,9.428,均P<0.01)。结论组蛋白H2A去泛素化酶BAP1能够通过抑制恶性胶质瘤细胞周期快速进展并促进其凋亡,进而发挥肿瘤抑癌基因的功能,可作为潜在的恶性胶质瘤临床诊断标志物。

基于label-free定量蛋白质组学方法筛选沉默CHAF1B基因后心肌细胞差异表达蛋白及调控网络分析

目的分析沉默染色质装配因子1亚基B(chromatin assembly factor 1 subunit B,CHAF1B)基因后心肌细胞中差异表达蛋白,预测CHAF1B基因调控网络,为寻找促进心肌细胞修复的潜在治疗靶点提供参考。方法采用转染和蛋白质印迹法筛选沉默CHAF1B基因的有效小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)。应用有效siRNA沉默人源心肌AC16细胞CHAF1B基因后,采用细胞活力检测方法检测细胞活力;提取总蛋白质进行定量、还原、烷基化和胰蛋白酶裂解成肽段,利用高效液相串联质谱法鉴定肽段;搜索UniProt蛋白库筛选差异表达的蛋白质进行基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集和蛋白质互作网络(protein-protein interaction networks,PPI)分析。结果siRNA有效沉默CHAF1B基因后,心肌细胞存活明显受到抑制;label-free定量蛋白质组学方法鉴定结果显示,共有69个差异表达蛋白质,其中50个表达显著上调(差异倍数≥2,P<0.05),19个表达显著下调(差异倍数≤0.5,P<0.05)。GO分析显示,差异表达蛋白质主要参与大分子复合亚基体、细胞组分生物合成和组装等生物学过程,分布在细胞质和囊泡等区域,发挥蛋白质结合等分子功能。KEGG通路富集和PPI分析显示,差异表达蛋白质参与的信号通路包括蛋白酶体、氨酰tRNA生物合成、胞吞、嘧啶代谢和氨基酸生物合成等10条信号途径;表达显著上调的蛋白质如蛋白酶体亚单位A2和B7、26 S蛋白酶体调节亚单位6B和10B参与蛋白酶体途径,丝氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺和赖氨酸tRNA合成酶介导氨酰tRNA生物合成;表达显著下调的蛋白质包括骨架相关蛋白2/3复合体亚单位3和热休克70蛋白1样参与胞吞作用,核糖核苷-二磷酸还原酶大亚基介导嘧啶代谢等通路。实时荧光定量聚合酶链式反应结果证实,转染CHAF1B siRNA后心肌细胞中合成骨架相关蛋白2/3复合体亚单位3的基因ARPC3和氨酰tRNA生物合成关键基因QARS1的mRNA水平均显著降低。结论CHAF1B为心肌细胞存活的关键蛋白质,参与调控心肌细胞的胞吞和氨基酸生物合成等多种生物学过程,参考其调控网络可帮助寻找促进心肌细胞修复的干预环节。

抗沉默功能蛋白1B在幽门螺杆菌感染的人胃癌细胞中的表达及其对AGS细胞株增殖和转移能力的影响

目的检测组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(anti-silencing functional protein 1B,ASF1B)在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌患者预后之间的关系,探讨ASF1B对人胃癌细胞株AGS增殖、转移能力的影响以及可能的分子机制,分析ASF1B与幽门螺杆菌感染之间的关系。方法分析癌症基因组图谱数据库中泛瘤种的肿瘤组织和癌旁正常组织中ASF1B的表达情况,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ASF1B在所收集的59例配对的胃癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达水平。分析Kaplan-Meier plotter数据库中胃癌患者ASF1B的表达水平与其预后之间的关系,后通过免疫组织化学检测胃癌组织芯片中ASF1B的表达水平并分析其与胃癌患者临床预后及临床病理参数之间的关系。通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲低胃癌细胞系AGS中的ASF1B表达,分组为siNC组(阴性对照转染细胞)、siASF1B#1组、siASF1B#2组及siASF1B#3组,后采用CCK-8、平板单克隆实验、Transwell小室迁移实验检测各组细胞的增殖、转移能力。分析基因表达综合数据库的数据集GSE27411中幽门螺杆菌阳性和阴性的胃癌组织中ASF1B的表达水平,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法检测ASF1B在幽门螺杆菌感染前后的胃癌细胞系AGS中的表达水平。结果相关数据库及我们的胃癌队列中的胃癌组织ASF1B的mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁正常组织,且胃癌组织中高表达的ASF1B与胃癌患者不良预后相关。此外,与siNC组相比,敲低ASF1B组(siASF1B#1组、siASF1B#2组及siASF1B#3组)的细胞增殖和转移能力均减弱。最后,幽门螺杆菌阳性的胃癌组织及幽门螺杆菌感染后的人胃癌细胞AGS中的ASF1B表达水平均上调。结论ASF1B在幽门螺杆菌感染诱发的胃癌发生发展过程中可能起到重要的促进作用,且高表达的ASF1B与胃癌患者更早发生转移及较差的预后相关,可作为预测胃癌患者复发及预后的分子标志物。此外,敲低ASF1B可显著抑制AGS细胞的增殖和转移能力。

淫羊藿素通过调控黏着斑激酶及下游细胞外信号调节激酶/细胞周期蛋白D1和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

目的探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5μmol/L不同浓度的ICA给药干预72小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7肝癌细胞生存的影响;将Huh7肝癌细胞给与ICA高(10μmol/L)、中(5μmol/L)、低(2.5μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7肝癌细胞给与ICA IC 50值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析。另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析。结果ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在G1期发生阻滞(P<0.05)。另外,研究发现ICA可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1以及p-Akt、p-mTOR、p-S6的表达水平。结论ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长。

血清红细胞分布宽度 载脂蛋白B/载脂蛋白A1比值对急性胰腺炎患者疾病严重程度相关性及预测评估价值

目的探讨红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)、载脂蛋白B/载脂蛋白A1比值(apolipoprotein B/A1,Apo B/A1)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者疾病严重程度相关性及预后的预测价值。方法选取2019年1月—2022年1月东乡区人民医院收治的60例急性胰腺炎患者为研究对象,根据AP患者病情的严重程度分为轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)20例、中度重症疾病胰腺炎(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)20例、重型急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)20例,并选取同期健康体检者22名为对照组,分析4组基本资料和生化指标,采用二元Logistic回归分析AP患者疾病严重程度的影响因素,以受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析RDW、Apo B/A1和联合对AP的预测价值。结果MAP组、MSAP组、SAP组、对照组的RDW、Apo B/A1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AP与RDW、Apo B/A1指标呈正相关(r=0.656、0.518,P<0.05)。AP患者与对照组的RDW、Apo B/A1比值采用二元Logistic回顾分析,并绘制ROC曲线。结果显示,RDW、Apo B/A1比值、联合曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.992(95%CI 0.942~1.000)、0.895(95%CI 0.807~0.952)、0.997(95%CI 0.949~1.000),且联合检测与RDW、Apo B/A1比值单独检测比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RDW、Apo B/A1联合检测能较好地预测AP患者疾病严重程度,具有较高的预测价值,可为临床医生制定有效的治疗方案提供参考。

自噬相关基因微管相关蛋白1A/1B轻链3B在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关基因微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提供的临床和RNA-seq数据,以预测MAP1LC3B水平与结肠癌的关系。再利用免疫组织化学染色(IHC)、Western印迹等技术对人群样本(结肠癌组织40例,癌旁组织20例)中MAP1LC3B表达情况进行检测,验证其表达情况与临床病理参数包括肝转移与否、淋巴结转移与否及组织分化等的关系。结果:MAP1LC3B在结肠癌组织中的表达阳性率为72.5%,明显高于癌旁组织组,差异具有统计学意义(P=0.001);在MAP1LC3B阳性组中,21例(72.41%)合并肝转移(P=0.001),且患者的TNM分期多为Ⅴ期患者,占79.31%,与MAP1LC3B阴性组比较差异具有统计学意义(P=0.001),但MAP1LC3B的表达与结肠癌组织的分化程度(P=0.056)和淋巴结转移情况比较,差异无统计学意义(P=0.265)。与TCGA数据库等分析结果有所差异,但Kaplan-Meier生存分析表明,MAP1LC3B高表达与预后不良显著相关,差异有统计学意义(P<0.01),且MAP1LC3B表达水平与CD8+T细胞的功能最为密切。结论:自噬相关基因MAP1LC3B在结肠癌组织中异常表达,并参与介导了肿瘤的恶性生物学行为,影响患者预后。

血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1、胶质纤维酸性蛋白检测在新生儿缺血缺氧性脑病病情严重程度中的诊断价值

目的:探讨血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法:选择80例HIE患儿作为观察组,另选择90例健康新生儿作为对照组,收集所有患儿一般资料,并检测两组患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平,分析HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP与病情严重程度的相关性及预后不良的影响因素。结果:对照组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平低于观察组(均P<0.05)。重度组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平高于中度组、轻度组和对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病严重程度与HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平呈正相关(均P<0.001)。随访预后良好患儿59例,预后不良21例,经多因素Logistic回归分析显示,产程异常、病情重度、S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP为影响HIE患儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HIE患儿病情严重程度和预后与血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平有关,监测其水平变化有利于临床早期完善干预方案改善预后。

FHL2通过NF-κB信号通路调节THP-1巨噬细胞泡沫化

目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激细胞,ELISA检测细胞IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达;油红O染色检测细胞泡沫化程度;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 转染过表达FHL2质粒的细胞中FHL2表达量升高(P<0.01),而转染si-FHL2的细胞表达量降低(P<0.05);敲低FHL2能够下调炎性细胞因子的分泌(P<0.01);FHL2下调能够缓解THP-1巨噬细胞泡沫化;同时,FHL2下调抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05),而在过表达FHL2组中结果呈相反趋势。结论 下调FHL2的表达可通过抑制NF-κB信号通路活化,降低炎性细胞因子的分泌,缓解巨噬细胞的泡沫化。

血乳酸、高迁移率族蛋白B 1对新生儿肺炎预后不良的预测价值

目的:分析血乳酸、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对新生儿肺炎(NP)预后不良的预测价值。方法:选取2021年3月至2023年3月该院收治的120例NP患儿为研究对象,纳入观察组,另选取同期于本院出生的120名健康新生儿为对照组,检测两组血乳酸、HMGB1水平。治疗后评估NP患儿的预后,比较不同预后NP患儿血乳酸、HMGB1水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血乳酸、HMGB1单项及联合检测对NP患儿预后不良的预测价值。结果:观察组血乳酸、HMGB1水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);预后不良NP患儿血乳酸、HMGB1水平均高于预后良好NP患儿,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血乳酸、HMGB1单项及联合检测预测NP患儿预后不良的曲线下面积分别为0.791、0.717、0.825,且联合检测高于二者单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血乳酸、HMGB1联合检测对NP患儿预后不良的预测价值高于二者单项检测。

细胞周期蛋白D1在乳腺癌、结直肠癌及食管癌中的研究进展

细胞周期蛋白D1(CCND1)在细胞周期调节作用获得公认,CCND1的异常表达与癌症的发展、预后的关联受到越来越多的重视。笔者选取了临床上常见的乳腺癌、结直肠癌、食管癌,探讨了CCND1引起癌症发生、进展的内在机制;并对CCND1与乳腺癌、结直肠癌、食管癌预后的关联开展了相关综述,旨在加深对CCND1认识的同时,为广大学者在肿瘤分子标记物领域的研究提供指导。

细胞周期素D1对HBV转录和复制的影响

目的 探究细胞周期素D1(cyclin D1,基因名CCND1)对HBV复制的影响及其机制。方法 利用GSE84044数据集,采用Spearman秩相关分析HBV相关肝纤维化患者肝组织基因表达水平与血清HBV DNA载量之间的相关性。在HBV细胞复制模型中瞬时表达cyclin D1及cyclin D1持续激活突变体(T286A)蛋白,使用时间分辨免疫荧光及实时荧光定量PCR实验分别检测细胞培养上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,Western blot检测细胞内HBV core蛋白,反转录-实时荧光定量PCR法检测细胞内HBV RNA,双荧光素酶报告基因实验检测cyclin D1对HBV基本核心启动子(BCP)活性的影响。利用GSE83148数据集,分析CCND1与HBV相关调控因子表达的相关性。正态分布的计量资料两组间比较采用独立样本t检验;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。结果 在GSE84044数据中,HBV相关肝纤维化患者的肝组织中有7个细胞周期调控基因与HBV DNA载量呈显著负相关(r值均<-0.3,P值均<0.05),其中包括CCND1基因(r=-0.474,P<0.001)。外源表达cyclin D1及cyclin D1 T286A突变体能降低HBV复制细胞模型培养上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,以及细胞内core蛋白和HBV RNA水平;外源表达cyclin D1显著抑制了HBV BCP的转录活性;且慢性乙型肝炎患者肝组织中CCND1表达水平与抑制HBV复制的APOBEC3G(r=0.575,P<0.001)、SMC5(r=0.341,P<0.001)和FOXM1(r=0.333,P<0.001)表达呈显著正相关,而与HBV进入受体NTCP(r=-0.511,P<0.001)和HBV复制正向调控转录因子HNF1α(r=-0.430,P<0.001)表达呈显著负相关。在HepG2细胞中过表达cyclin D1降低HNF1α及NTCP转录水平。结论 cyclin D1抑制HBV的转录和复制,可能与其下调HNF1α及NTCP表达有关。

Survivin对食管癌细胞Tak1、NF-κB表达调控以及细胞周期和凋亡的影响

目的探讨存活蛋白(Survivin)对食管癌细胞转化生长因子β激活激酶1(Tak1)、核因子κB(NF-κB)表达调控以及细胞周期和凋亡的影响。方法常规体外培养人食管癌细胞Eca109,随机分为空白对照组、Survivin-siRNA组、Survivin-siRNA空载体组、Survivin过表达组、Survivin过表达空载体组、YM155组,Survivin-siRNA组与Survivin-siRNA空载体组分别转染Survivin siRNA载体、Survivin siRNA空载体,Survivin过表达组与Survivin过表达空载体组分别转染Survivin过表达载体、Survivin过表达空载体,转染6 h,更换新鲜培养基继续培养24 h,收集细胞。空白对照组不予转染,YM155组加入Survivin抑制剂YM155,于各转染组同期收集细胞。采用Western blotting法检测Survivin、磷酸化Tak1(p-Tak1)、NF-κB p65表达,采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果与空白对照组比较,Survivin过表达组Survivin相对表达量显著升高,而Survivin-siRNA组和YM155组Survivin相对表达量显著降低(P均<0.05)。与空白对照组比较,各转染组及YM155组p-Tak1、NF-κB相对表达量无显著变化(P均>0.05)。与空白对照组比较,YM155组G_(2)期细胞所占比例显著升高(P<0.05),S期细胞所占比例显著降低(P<0.05),G_(1)期细胞所占比例无显著变化(P>0.05);与空白对照组比较,各转染组G_(1)、G_(2)、S期细胞所占比例均无显著变化(P均>0.05)。与空白对照组比较,Survivin-siRNA组早期凋亡率和总凋亡率显著升高(P均<0.05),晚期凋亡率无显著变化(P>0.05);与空白对照组比较,其他转染组和YM155组早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率均无显著变化(P均>0.05)。结论Survivin能够参与食管癌细胞周期分布和凋亡调控,但其作用途径并非通过调控Tak1、NF-κB表达实现。

循环细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C mRNA对女性急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后心功能的预测价值

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C(CDKN1C)mRNA对女性急性心肌梗死(AMI)患者行经皮冠状动脉介入(PCI)术后心功能的预测价值。方法选取2018年1月至2020年1月遂宁市中心医院急诊PCI的AMI患者198例,术后1 d检测N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和CDKN1C mRNA水平,术后4个月通过超声心动图检测心功能,根据左心室射血分数(LVEF)分为三组:A组(LVEF≥50%)112例;B组(40%≤LVEF<50%)54例;C组(LVEF<40%)32例。通过ROC曲线分析不同性别患者CDKN1C mRNA与NT-proBNP水平对心功能的预测价值。结果A组CDKN1C mRNA水平高于B组和C组(F=6.831,P<0.05),A组NT-proBNP水平低于B组和C组(F=3.421,P<0.05)。A组女性患者CDKN1C mRNA水平高于B组和C组女性患者(F=6.717,P<0.05)。CDKN1C mRNA的AUC为0.805(95%CI=0.732~0.864),预测价值优于NT-proBNP(Z=2.676,P<0.05),女性CDKN1C mRNA的AUC为0.887(95%CI=0.804~0.923)预测价值优于男性患者(Z=3.004,P<0.05)。结论术后1 d循环CDKN1C mRNA水平有助于预测AMI患者PCI后心功能情况,尤其适用于女性,CDKN1C mRNA可以作为预测女性AMI患者PCI后心功能的一个新的标志物。

层粘连蛋白γ1基因沉默对膀胱癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨层粘连蛋白γ1(LAMC1)在膀胱癌细胞中的表达情况,以及沉默LAMC1基因表达对膀胱癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法选取河北省邯郸市中心医院2019年1月至2021年12月收治的48例膀胱癌患者的癌及癌旁组织。采用RT-qPCR法检测UMUC3、T24、5637及J82细胞中LAMC1的m RNA表达水平。将LAMC1-si RNA质粒转染至5637细胞中,设置LAMC1沉默组和阴性对照组,RT-qPCR和Western blot验证转染效率;采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测LAMC1基因沉默对膀胱癌细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin A、cyclin D1、p16和p21的表达水平。结果5637细胞中LAMC1 m RNA表达水平较UMUC3、T24、J82细胞高(P<0.05)。癌旁组织与膀胱癌组织中LAMC1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LAMC1沉默组中LAMC1 m RNA和蛋白表达水平低于阴性对照组(P<0.01)。LAMC1沉默组中细胞增殖活力和克隆形成能力低于阴性对照组(P<0.01)。LAMC1沉默组中细胞中S期细胞所占百分比低于阴性对照组(P<0.01),G1期细胞所占百分比高于阴性对照组(P<0.01)。LAMC1沉默组中的cyclin D1和cyclin A蛋白的表达水平低于阴性对照组(P<0.01),而p16和p21蛋白的表达水平高于阴性对照组(P<0.01)。结论沉默LAMC1基因表达能够抑制细胞周期相关蛋白的表达从而抑制膀胱癌5637细胞增殖能力,提示其可能是膀胱癌潜在的治疗靶点。

绵羊骨形态发生蛋白受体-1B基因研究进展

绵羊繁殖性能在绵羊产业中有着重要意义,除通过一些技术手段(如同期发情、人工授精、超数排卵等)之外,在目前已知的关于能够提高绵羊繁殖力的16个基因共20个突变体当中,以骨形态发生蛋白受体-1B(bone morphogenetic protein receptor type-1B,BMPR-1B)基因对绵羊繁殖力的影响最大。BMPR-1B基因是世界上第一个被发现的多羔主效基因,其编码区的A746G突变导致蛋白质序列中第249位的谷氨酰胺被置换为精氨酸(Q249R),最终能够引起绵羊排卵数和产羔数增加。作者介绍了绵羊多羔主效基因BMPR-1B及其突变体FecB(A746G)的发现与结构,简述了该基因分子方面的作用机理,对BMP/Smad信号通路的调控以及与绵羊繁殖之间的联系,并简单分析了FecB突变后对绵羊卵巢、卵泡等组织细胞功能,激素调节和相关基因表达的影响。进一步加深对BMPR-1B基因的了解,为研究人员探明该基因诱使绵羊等动物提高产羔数的调控机制,相关配体、调控因子和上下游信号蛋白的影响以及加快哺乳动物高效育种繁殖、扩大种群规模和多胎品系的建立,增加养殖人员的经济收入等提供一些参考和帮助。