miR-134-3p靶向细胞周期蛋白D1抑制胃癌细胞增殖的作用及机制

目的:研究miR-134-3p靶向细胞周期蛋白D1(CCND1)抑制胃癌细胞增殖的作用及机制。方法:收集手术切除的胃癌组织及癌旁组织,培养正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823,检测miR-134-3p、CCND1的表达水平;BGC-823细胞分组并转染阴性对照(NC)模拟物或miR-134-3p模拟物、感染NC腺病毒或CCND1腺病毒,检测细胞增殖抑制率、细胞周期比例、miR-134-3p及CCND1表达水平;双荧光素酶报告基因验证miR-134-3p与CCND1的靶向结合;饲养BALB/c裸鼠,皮下注射感染NC腺病毒或miR-134-3p腺病毒的BGC-823,成瘤后测定移植瘤质量、体积及CCND1表达水平。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-134-3p表达水平明显降低、CCND1表达水平明显升高(P<0.05),且miR-134-3p与CCND1呈负相关;与GES-1细胞相比,BGC-823、MGC-803、SGC-7901细胞中miR-134-3p表达水平明显降低,CCND1表达水平明显升高(P<0.05),且BGC-823细胞中miR-134-3p、CCND1表达变化最显著。与miR-NC组相比,miR-134-3p组BGC-823细胞的增殖抑制率、G2/M期细胞占比明显升高,G_(0)/G_(1)期及S期细胞占比、CCND1表达水平、CCND1报告基因的荧光活力明显降低(P<0.05);与miR-134-3p+Ad-NC组相比,miR-134-3p+Ad-CCND1组BGC-823细胞的增殖抑制率、G2/M期细胞占比明显降低,G_(0)/G_(1)期及S期细胞占比、CCND1表达水平明显升高(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-134-3p组裸鼠移植瘤质量明显减轻,体积明显缩小,移植瘤中CCND1表达水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-134-3p通过靶向抑制CCND1途径抑制胃癌细胞增殖及细胞周期。

淫羊藿素通过调控黏着斑激酶及下游细胞外信号调节激酶/细胞周期蛋白D1和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

目的探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5μmol/L不同浓度的ICA给药干预72小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7肝癌细胞生存的影响;将Huh7肝癌细胞给与ICA高(10μmol/L)、中(5μmol/L)、低(2.5μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7肝癌细胞给与ICA IC 50值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析。另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析。结果ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在G1期发生阻滞(P<0.05)。另外,研究发现ICA可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1以及p-Akt、p-mTOR、p-S6的表达水平。结论ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长。

雄激素受体、细胞周期蛋白D1在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及与患者超声征象的关系

目的 探讨雄激素受体(AR)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及与患者超声征象的关系。方法 收集105例非特殊型浸润性乳腺癌患者的非特殊型浸润性乳腺癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色法检测AR、cyclin D1表达情况。比较非特殊型浸润性乳腺癌组织和癌旁正常组织中AR、cyclin D1表达情况,比较不同组织学分级、AR表达情况、cyclin D1表达情况非特殊型浸润性乳腺癌患者的超声征象。采用Pearson相关分析法分析AR、cyclin D表达情况与非特殊型浸润性乳腺癌患者超声征象的相关性。结果 非特殊型浸润性乳腺癌组织中AR、cyclin D1阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同组织学分级非特殊型浸润性乳腺癌患者的肿瘤直径、边缘毛刺征、后方回声、周边高回声晕征、腋窝淋巴结转移情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同AR、cyclin D1表达情况非特殊型浸润性乳腺癌患者的肿瘤直径、病灶内微钙化情况、病灶内血流情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。AR、cyclin D1表达与非特殊型浸润性乳腺癌患者的肿瘤直径、病灶内微钙化及病灶内血流均呈正相关(P﹤0.01)。结论非特殊型浸润性乳腺癌组织中AR、cyclin D1阳性表达率均较高,且其表达与患者的超声征象有关。

细胞周期蛋白D1在乳腺癌、结直肠癌及食管癌中的研究进展

细胞周期蛋白D1(CCND1)在细胞周期调节作用获得公认,CCND1的异常表达与癌症的发展、预后的关联受到越来越多的重视。笔者选取了临床上常见的乳腺癌、结直肠癌、食管癌,探讨了CCND1引起癌症发生、进展的内在机制;并对CCND1与乳腺癌、结直肠癌、食管癌预后的关联开展了相关综述,旨在加深对CCND1认识的同时,为广大学者在肿瘤分子标记物领域的研究提供指导。

周围型非小细胞肺癌患者细胞周期蛋白D1、CD147与预后的关系研究

目的 分析周围型非小细胞肺癌患者细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、CD147与预后的关系。方法 2017年3月至2020年3月我院收治的周围型非小细胞肺癌患者128例(观察组),以患者癌旁正常组织(距肿瘤切缘至少0.5 cm处且经HE染色检查无癌细胞浸润)为癌旁组,选取同期收治非肺部恶性疾病患者71例病理组织作为良性组。随访12个月,收集患者一般资料,了解预后情况。对比不同组织中CyclinD1、CD147表达水平,分析不同临床特征患者CyclinD1、CD147表达情况及影响周围型非小细胞肺癌者预后因素。结果 观察组中CyclinD1、CD147阳性表达高于癌旁组与良性组(P<0.05);不同TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移患者CyclinD1表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径患者CD147表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);预后良好与预后不良患者肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及CyclinD1、CD147水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、分化程度、淋巴结转移、CyclinD1、CD147是患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论 CyclinD1、CD147在周围型非小细胞肺癌患者中表达明显上调,且两者均为患者预后不良的影响因素。

Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制

目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。

细胞周期蛋白D1在环加氧酶-2诱导的大鼠神经细胞死亡中的作用

目的探讨环加氧酶-2诱导的大鼠神经细胞死亡的分子发病机制。方法原代培养大鼠胎鼠皮质神经细胞,给予缺氧再加氧处理;实验随机分为对照组、缺氧再加氧组及选择性抑制剂+缺氧再加氧组;用噻唑蓝比色法测定神经细胞生存率,用Western印迹法检测蛋白质的表达。结果环加氧酶-2及细胞周期蛋白D1(Cy-clinD1)在缺氧再加氧后神经细胞表达呈平行性、一致性增高;COX-2选择性抑制剂NS398能明显降低CyclinD1的表达;而CyclinD1选择性抑制剂flavopiridol对COX-2的表达则没有影响;flavopiridol还能明显改善缺氧再加氧后神经细胞的生存率(P<0.001)。结论COX-2诱导的缺氧性神经细胞死亡的分子发病机制可能是通过CyclinD1表达的增加使成熟神经细胞重新进入细胞周期而实现的。

非小细胞肺癌中细胞周期蛋白D1与E的作用及相互关系

目的 :研究细胞周期蛋白D1与E在非小细胞肺癌 (NSCLC)发生、发展中的作用及相互关系。方法 :免疫组化方法检测 87例NSCLC肿瘤组织中细胞周期蛋白D1、E的表达及PCNA估计增殖指数 (PI) ,并将上述结果与临床病理及预后资料进行对比分析。结果 :87例NSCLC中细胞周期蛋白D1、E阳性率分别为 4 4 .8% (39/87)、4 8.3% (42 /87) ,细胞周期蛋白D1阳性组的PI值显著高于阴性组 (P〈0 .0 5 ) ,细胞周期蛋白E阳性组PI值与阴性组无显著差异 (P〉0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1阳性组肿瘤直径、淋巴结转移率和生存率均与阴性组有显著差异(P〈0 .0 1、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ,细胞周期蛋白E阳性组淋巴结转移率、临床分期和生存率均与阴性组有显著差异 (P〈0 .0 5、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ;细胞周期蛋白D1阳性组中细胞周期蛋白E的阳性率显著高于其阴性组 (P〈0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1与细胞周期蛋白E双阳性组的PI值、肿瘤直径、淋巴结转移率显著高于非双阳性组 (P值均〈0 .0 5 ) ,生存率显著低于非双阳性组 (P〈0 .0 1)。结论 :细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E均参与NSCLC的发生、发展 ,并影响其预后 ,但两者在其中所起作用不同 :细胞周期蛋白D1是调节NSCLC增殖的主要因素 ,细胞周期蛋白E主要与NSCLC进展有关 ;细胞周期蛋白D1可促?

壮骨止痛方对细胞周期蛋白cyclin D1的作用研究

目的:探讨壮骨止痛方抗骨质疏松作用机制。方法:雌性SD大鼠40只随机分为模型组、壮骨止痛方组、阳性对照组、假手术组,给药5 d后制备含药血清。获取新生SD乳鼠成骨细胞,培养至第3代,分别加入4组血清。培养6 d后,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,用免疫组化法检测各组细胞中cyclin D1蛋白表达;18 d后进行茜素红染色,观察各组钙化结节。结果:壮骨止痛方组ALP活性以及cyclin D1蛋白表达强于阳性对照组,表明成骨细胞增殖旺盛。结论:壮骨止痛方可提高体外培养成骨细胞cyclin D1表达,对骨质疏松症有治疗效果。

细胞周期素D1对HBV转录和复制的影响

目的 探究细胞周期素D1(cyclin D1,基因名CCND1)对HBV复制的影响及其机制。方法 利用GSE84044数据集,采用Spearman秩相关分析HBV相关肝纤维化患者肝组织基因表达水平与血清HBV DNA载量之间的相关性。在HBV细胞复制模型中瞬时表达cyclin D1及cyclin D1持续激活突变体(T286A)蛋白,使用时间分辨免疫荧光及实时荧光定量PCR实验分别检测细胞培养上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,Western blot检测细胞内HBV core蛋白,反转录-实时荧光定量PCR法检测细胞内HBV RNA,双荧光素酶报告基因实验检测cyclin D1对HBV基本核心启动子(BCP)活性的影响。利用GSE83148数据集,分析CCND1与HBV相关调控因子表达的相关性。正态分布的计量资料两组间比较采用独立样本t检验;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。结果 在GSE84044数据中,HBV相关肝纤维化患者的肝组织中有7个细胞周期调控基因与HBV DNA载量呈显著负相关(r值均<-0.3,P值均<0.05),其中包括CCND1基因(r=-0.474,P<0.001)。外源表达cyclin D1及cyclin D1 T286A突变体能降低HBV复制细胞模型培养上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,以及细胞内core蛋白和HBV RNA水平;外源表达cyclin D1显著抑制了HBV BCP的转录活性;且慢性乙型肝炎患者肝组织中CCND1表达水平与抑制HBV复制的APOBEC3G(r=0.575,P<0.001)、SMC5(r=0.341,P<0.001)和FOXM1(r=0.333,P<0.001)表达呈显著正相关,而与HBV进入受体NTCP(r=-0.511,P<0.001)和HBV复制正向调控转录因子HNF1α(r=-0.430,P<0.001)表达呈显著负相关。在HepG2细胞中过表达cyclin D1降低HNF1α及NTCP转录水平。结论 cyclin D1抑制HBV的转录和复制,可能与其下调HNF1α及NTCP表达有关。

鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因下调的作用：整胚原位杂交检测

背景:斑马鱼胚胎发育早期,细胞分裂增殖快速,低浓度的鱼藤素可以延缓斑马鱼胚胎发育。目的:观察鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达影响。方法:收集正常受精后发育至2-cell期(受精后约0.75 h)以及shield期(受精后6 h)斑马鱼胚胎于12孔板,分别用100,200,400 nmol/L鱼藤素在28.5℃的培养箱中避光处理至shield期及受精后24 h。同时用1%的二甲基亚砜溶液作为对照组,于相同条件下培养。后收集对照组及实验组胚胎,制备细胞周期蛋白D1 RNA探针进行整胚原位杂交,于正置荧光显微镜下拍照观察染色情况以检测鱼藤素对胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达影响。结果与结论:鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达有明显的负调控作用。Shield期对照组胚胎细胞周期蛋白D1在外包细胞中泛表达,随着给药浓度的增加,细胞周期蛋白D1的表达显著减少,400 nmol/L鱼藤素处理组几乎不表达。受精后24 h的胚胎中细胞周期蛋白D1在脑部、中枢神经系统、发育未成熟的眼部、体节、躯干、尾部等有表达,100 nmol/L鱼藤素处理组表达明显下调,在增殖性区域几乎不表达。200,400 nmol/L处理组胚胎发育明显延缓,细胞周期蛋白D1主要表达于背侧外胚层细胞。

NIK和IKKβ连接蛋白、C-myc和细胞周期蛋白D1在结肠癌组织中的表达及意义

目的检测结肠癌组织中NIK和IKKβ连接蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,并探讨其意义。方法收集广西医科大学第一附属医院结直肠外科2013年2月—2014年2月经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本151例,其中正常结肠黏膜16例、结肠腺瘤21例、结肠癌114例。采用SP免疫组化法分别检测正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织及结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率;分析结肠癌组织中NIBP、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率的相关性。结果正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织的NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率高于正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织(P<0.017);正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织中NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。不同组织学类型、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度越低、TNM分期越高、Duke's分期越高患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率越高(P<0.05)。NIBP、C-myc、cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率均呈正相关(P<0.05)。结论 NIBP可能通过激活核因子κB(NF-κB)信号转导通路上调C-myc和cyclin D1等的表达而影响结肠癌的治疗发生、发展、侵袭和转移,为临床发现结肠癌的治疗新靶点提供了参考依据。

细胞周期蛋白D1、CDK4在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 :研究乳腺癌组织周期蛋白D1、CDK4的蛋白表达定位、表达水平 ,及与P2 1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义。方法 :①应用免疫组织化学染色方法 ,检测 10 6例乳腺癌组织石蜡切片上的周期蛋白D1、CDK4的蛋白定位和蛋白表达 ,比较其与P2 1的蛋白表达 ,与临床病理学指标 ,如病理类型、组织学分型、组织学分级、淋巴结状态、雌激素受体状态、TNM分期等之间的关系 ;②对周期蛋白D1、CDK4、P2 1及临床病理指标如肿瘤的组织学分级、淋巴结状态、TNM分期、ER状态等 ,应用Kaplan Meier法Log rank检验进行单因素生存分析 ,应用Cox比例风险模型进行多因素生存分析。结果 :①周期蛋白D1表达定位于细胞核、CDK4的表达位于细胞质和细胞核 ,周期蛋白D1的阳性率为 30 2 % ,CDK4的阳性率为 5 3 8%。②周期蛋白D1及CDK4的表达与乳腺癌的病理诊断组织学分型、组织学分级、ER状态、临床TNM分期、淋巴结状态、P2 1蛋白表达表达水平无关 (P >0 0 5 )。周期蛋白D1的蛋白表达与CDK4的蛋白表达相关 (P <0 0 5 )。③单因素分析提示影响 140个月无瘤生存率及总生存率的因素有 :临床TNM分期、组织学分级、腋淋巴结状态、周期蛋白D1的蛋白表达 (P <0 0 5 )。在无腋淋巴结转移亚组周期蛋白D1蛋白表达单因素生存分析?

胃癌组织中端粒酶活性与细胞周期蛋白D_1表达关系的研究

目的 探索胃癌组织中端粒酶活性与细胞周期蛋白D1表达之间可能的关系。方法 利用TelomerasePCR ELISAKit测量端粒酶活性 ;利用RT PCRELISA检测细胞周期蛋白D1mRNA表达水平。共检测了 84例胃癌及其相关性的组织标本。结果 周期蛋白D1异常高表达在胃良性疾病、胃癌前期病变和胃癌组织中均可检出 ,而端粒酶活性仅在胃癌前期病变和胃癌组织中检出。胃癌前期病变和胃癌组织端粒酶活性与周期蛋白D1表达程度明显正相关 (r =0 .713,P <0 .0 5 )。结论 至少在胃癌组织中 ,细胞周期蛋白D1异常高表达可能是端粒酶激活的前提之一。

人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定表达蛋白。【结果】用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Westernblot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。

丹参对大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 观察大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达与神经细胞凋亡的关系以及丹参的影响。方法 采用线栓法大鼠大脑中动脉持续阻塞模型 ,应用免疫组织化学和TUNEL染色方法观察假手术组和缺血后不同时间阳性染色神经细胞的数量和分布情况及丹参的影响。结果 cyclinD1蛋白表达自缺血后 6h开始出现 ,缺血后 48h达高峰 ;丹参组各相应时间点cyclinD1蛋白表达明显减少 (P <0 .0 1)。凋亡细胞自缺血后 12h开始出现 ,缺血后 72h达高峰 ;丹参组各相应时间点凋亡细胞表达明显减少 (P <0 .0 1)。相邻切片可见cyclinD1蛋白表达和凋亡细胞染色区域基本相同。结论 脑缺血后cyclinD1的异常表达可能诱发了缺血神经细胞的凋亡 。

细胞周期蛋白D1的高表达与雌激素受体表达及乳腺癌患者良好预后相关

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclin D1)与雌激素受体(ER)在乳腺癌中的表达和临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测102例乳腺癌组织和60例正常乳腺组织标本中cyclin D1及ER蛋白表达,结合临床病理及术后5年随访资料,分析cyclin D1与ER相关性及与预后之间的关系。结果与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中cyclin D1和ER表达显著性增加,且cyclin D1表达与肿瘤组织学分级、TNM分期、ER蛋白表达相关。Spearman相关性分析显示,cyclin D1与ER表达水平呈正相关。Kaplan-Meier生存分析发现,cyclin D1高表达组乳腺癌患者生存期明显高于低表达组。Cox多因素分析表明cyclin D1、ER及TNM分期是影响患者预后的独立因素。结论 Cyclin D1在乳腺癌组织高表达,与ER表达正相关,且指示良好的预后。

上皮钙粘素、β-连环蛋白、细胞周期素D1在进行期寻常型银屑病皮损的表达

目的通过检测银屑病患者皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1的表达,探讨其在银屑病角质形成细胞高度增殖中的意义。方法用免疫组化方法检测正常组织及进行期银屑病皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1蛋白的表达。结果银屑病患者皮损增生的表皮细胞上皮钙粘素和β-连环蛋白在颗粒层和基底细胞层表达明显降低,与正常人相比有显著性差异(P<0.01)。而细胞周期素D1在银屑病患者皮损基底细胞层表达显著升高,并与β-连环蛋白的异常表达相关。结论上皮钙粘素和β-连环蛋白表达的下调可能与银屑病角质形成细胞高度增殖有关,Wnt信号转导系统异常可能参与银屑病的发病机制。

p16、细胞周期蛋白D1和pRb在头颈部鳞癌的表达及其意义

目的：探讨 p16、细胞周期蛋白 D1（ cyclinD1）和 pRb在头颈部鳞癌（ head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC）的表达及他们的相互关系和其意义。方法：应用免疫组织化学方法检测 32例原发 HNSCC患者癌组织中 p16、 cyclinD1和 pRb的蛋白表达。结果： p16、 cyclinD1、 pRb的总异常率为 90.6％（ 29/32），其中 p16和 pRb蛋白表达缺失分别为 62.5％（ 20/32）和 34.4％（ 11/32）， cyclinD1过表达为 34.4％（ 11/32）。 p16与 pRb呈负相关性（

异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制研究

目的:探索异丹叶大黄素(ISO)下调肿瘤细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制。方法:以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3、RT12和RT4细胞后用Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达水平;以RTPCR法检测细胞周期蛋白D1 mRNA的表达水平。稳定转染细胞周期蛋白D1启动子萤光素酶报告基因至UMUC3细胞并筛选后,检测ISO预处理后萤光素酶活性。ISO预处理UMUC3细胞后,提取核蛋白检测核转录因子表达水平的变化。分别稳定转染GFP和GFP-细胞周期蛋白D1表达构建载体,筛选克隆;ISO预处理后,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达水平,贴壁依赖性细胞生长实验法检测细胞生长能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化。分别稳定转染人源性细胞周期蛋白D1野生型和-163位点突变型萤光素酶报告基因质粒载体至UMUC3细胞并筛选,ISO预处理后检测细胞的萤光素酶活性。最后利用染色质免疫沉淀的方法,以抗Sp1抗体检测ISO对Sp1与细胞周期蛋白D1启动子结合力的影响。结果:ISO可从mRNA和蛋白水平显著抑制肿瘤细胞的细胞周期蛋白D1水平,并且是从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的转录。ISO可抑制、下调核转录因子Sp1的表达,并抑制Sp1与细胞周期蛋白D1启动子区域的结合力,该结合位点主要位于启动子-92到+27bp的5’-非翻译区。结论:ISO可通过下调Sp1核转录因子表达及其与细胞周期蛋白D1启动子的结合,从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的表达,从而诱导G0/G1细胞周期阻滞并抑制肿瘤细胞增殖。我们的研究将为临床中药单体ISO综合治疗肿瘤提供新的策略。