细胞周期蛋白E1基因在卵巢癌诊治中的作用

肿瘤细胞中基因拷贝数变异可影响细胞稳态,导致细胞恶变。细胞周期蛋白E1基因(CCNE1)编码细胞周期蛋白E1(Cyclin E1),CCNE1扩增或过表达改变Cyclin E1的表达,并影响其他基因的表达,参与多种恶性肿瘤的发生、发展。CCNE1扩增或过表达与卵巢癌的发生、耐药、靶向治疗及预后密切相关。该文综述CCNE1表达在卵巢癌诊治中的作用,以期有助于探寻新的卵巢癌治疗方法。

细胞周期蛋白E1基因表达上调与胃癌发生的关系

目的在基因和蛋白水平检测胃癌组织中细胞周期蛋白E1(CCNE1)的表达,研究其与临床病理参数的相关性,探讨其与胃癌发生发展之间的关系。方法通过Oncomine(肿瘤微阵列数据库)分析CCNE1在胃癌中的表达。采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术检测34例配对样本中CCNE1的mRNA的表达水平。采用组织芯片/组织微阵列技术结合免疫组化方法检测CCNE1在34例配对样本中的蛋白表达情况。结果胃癌原发灶CCNE1 mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.001),在胃癌组织中CCNE1 mRNA表达水平在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期均呈现显著上调(P=0.042,P=0.016)。在胃癌原发组织中CCNE1蛋白阳性表达率[41.2%(14/34)]显著高于癌旁正常组织[0(0/34)]及胃炎组织[0(0/34)],P<0.01。CCNE1蛋白表达水平在不同分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移肿瘤的表达不同,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CCNE1表达上调可能与胃癌的发生、发展密切相关,提示CCNE1的检测可能为胃癌的诊断和预后提供参考。

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

背景与目的:肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(cyclinE1)的过表达与预后密切相关。为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cyclinE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用。方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclinE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.88±0.04)及未转染组(0.90±0.03)(P<0.05)。经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.15±4.00)%(P<0.05)。生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:肾癌cyclinE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据。

细胞周期蛋白E1基因rs1406(G/T)位点多态性与肝细胞癌高发家系遗传易感性的相关性

目的探讨细胞周期蛋白E1(CCNE1)基因rs1406(G/T)位点多态性与肝细胞癌高发家系遗传易感性的关系。方法选择2003年1月至2011年10月广西扶绥县壮族肝细胞癌高发地区20个肝细胞癌家系,包括肝细胞癌患者20例(A组)及其直系亲属59例(B组);另选10个生活在同一地区的正常家系(共40例)作为对照(C组)。各家系均符合Hardy-Weinberg遗传平衡,具有人群代表性。利用质谱方法检测CCNE1基因rs1406(G/T)位点基因型分布频率;采用PLINK软件分析各家系人群基因型分布频率差异。结果CCNE1基因rs1406(G/T)位点存在GG、TT、GT 3种基因型。A组GG基因型3例,TT基因型3例,GT基因型14例;B组GG基因型14例,TT基因型14例,GT基因型31例;C组GG基因型23例,TT基因型2例,GT基因型15例。A组与B组人群CCNE1 rs1406(G/T)位点上G、T分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。A+B组与C组人群rs1406(G/T)等位基因G、T分布频率比较差异有统计学意义(比值比=3.639,95%可信区间:1.533~8.637,P<0.05)。结论CCNE1基因rs1406(T)为广西扶绥县壮族人群肝细胞癌发生的风险基因型。

稳定整合靶向细胞周期蛋白E1基因RNA干涉载体的肝癌细胞系的建立

目的探讨经载体介导的RNA干涉法建立周期蛋白E1表达稳定抑制细胞系的可行性。方法将源自pSSC-9质粒的neo基因亚克隆至干涉载体pSilencer 1.0-U6以构建稳定干涉载体pSineo,再将其与合成的靶向周期蛋白E1基因特定的RNA干涉模板片段连接,重组载体经脂质体LipofectamineTM2000介导法转染肝癌细胞株BEL-7402;转染细胞经G418筛选,常规抽提G418抗性克隆细胞的基因组DNA并行PCR法鉴定外源导入载体的稳定整合情况。结果酶切及测序鉴定结果均表明,重组载体pSineo-cyc E1符合预期设计;PCR鉴定结果显示,稳定筛选出的6个克隆均整合有靶向周期蛋白E1基因的干涉载体。结论本研究建立了6个稳定整合有靶向细胞周期蛋白E1基因RNA干涉载体的肝癌细胞系,为肿瘤的癌基因靶向干涉治疗作了有益探索。

层粘连蛋白γ1基因沉默对膀胱癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨层粘连蛋白γ1(LAMC1)在膀胱癌细胞中的表达情况,以及沉默LAMC1基因表达对膀胱癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法选取河北省邯郸市中心医院2019年1月至2021年12月收治的48例膀胱癌患者的癌及癌旁组织。采用RT-qPCR法检测UMUC3、T24、5637及J82细胞中LAMC1的m RNA表达水平。将LAMC1-si RNA质粒转染至5637细胞中,设置LAMC1沉默组和阴性对照组,RT-qPCR和Western blot验证转染效率;采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测LAMC1基因沉默对膀胱癌细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin A、cyclin D1、p16和p21的表达水平。结果5637细胞中LAMC1 m RNA表达水平较UMUC3、T24、J82细胞高(P<0.05)。癌旁组织与膀胱癌组织中LAMC1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LAMC1沉默组中LAMC1 m RNA和蛋白表达水平低于阴性对照组(P<0.01)。LAMC1沉默组中细胞增殖活力和克隆形成能力低于阴性对照组(P<0.01)。LAMC1沉默组中细胞中S期细胞所占百分比低于阴性对照组(P<0.01),G1期细胞所占百分比高于阴性对照组(P<0.01)。LAMC1沉默组中的cyclin D1和cyclin A蛋白的表达水平低于阴性对照组(P<0.01),而p16和p21蛋白的表达水平高于阴性对照组(P<0.01)。结论沉默LAMC1基因表达能够抑制细胞周期相关蛋白的表达从而抑制膀胱癌5637细胞增殖能力,提示其可能是膀胱癌潜在的治疗靶点。

细胞周期蛋白E和肿瘤转移抑制基因nm23-H1与鼻咽癌

目的探讨细胞周期蛋白E(cyclin E)和肿瘤转移抑制基因nm23-H1在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测42例鼻咽癌和28例正常鼻黏膜上皮的病理组织切片标本中cyclin E和nm23-H1蛋白的表达。结果cyclin E蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率为59.5%(25/42),显著高于对照组中的17.9%(5/28);nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率为42.8%(18/42),显著低于对照组中的100%(28/28);cyclin E蛋白在低分化组和有淋巴结转移组中的阳性表达率分别为74.2%和77.8%,明显高于高、中分化组和无淋巴结转移组中的18.1%和26.7%;nm23-H1蛋白在低分化组和有淋巴结转移组中阳性表达率分别为25.8%和25.9%,明显低于高、中分化组和无淋巴结转移组中的90.9%和73.3%;cyclin E和nm23-H1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关。结论cyclin E过表达和nm23-H1表达下调在鼻咽癌的发生、发展和转移中起重要作用。

细胞周期素E和第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因在大肠癌中的表达与预后的关系

肿瘤的浸润和转移是一个多因素、多步骤的极为复杂的过程，它是肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质之间的一系列复杂的多步骤相互作用的结果，涉及众多的基因产物及分子事件。研究肿瘤细胞恶性潜能的生物学标志以预测肿瘤转移趋势，已成为目前肿瘤防治研究的一个重点。大肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，对人类危害严重。目前已认识到大肠癌的发生发展与多个癌基因的激活和肿瘤抑制基因的失活有关。

斑节对虾细胞周期蛋白E基因的克隆与表达分析

为了解细胞周期蛋白E(cyclin E)基因在斑节对虾(Penaeus monodon)发育过程中的作用,构建和测序了斑节对虾全组织cDNA文库,获得了斑节对虾细胞周期蛋白(Pmcyclin)E的部分表达序列。通过RACE技术克隆得到1条全长1 706 bp的cDNA序列。Pmcyclin E开放阅读框(ORF)为1 263 bp,编码420个氨基酸。生物信息学分析表明,该氨基酸序列含有周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区并含有N-糖基化位点及磷酸化位点。经BLAST同源性分析表明,该基因编码蛋白与红火蚁(Solenopsis invicta)、切叶蜂(Megachile rotundata)等多种节肢动物细胞周期蛋白E有很高的同源性。组织分布分析表明,该基因在斑节对虾精巢、卵巢、肠、脑、肝胰腺、胃和心脏组织中均有表达,其中卵巢中表达量较高,而心脏、胃及肝胰腺中表达量相对较低。分别对蜕皮抑制激素(MIH)注射和眼柄切除的对虾进行表达分析,发现眼柄切除后,Pmcyclin E大量表达,而注射MIH后细胞Pmcyclin E的表达量相对降低。结果表明,细胞cyclin E基因在斑节对虾卵巢发育过程中起重要作用,且眼柄切除对细胞cyclin E的表达具有影响,该结果为进一步探究斑节对虾卵巢的发育机理提供了理论依据。

Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制

目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。

细胞周期蛋白E2基因mRNA在胃癌组织中的表达

目的了解细胞周期蛋白E2(Cyclin E2)基因mRNA在胃癌组织中的表达情况及Cyclin E2与临床肿瘤病理的关系,探讨Cyclin E2在胃癌发生、发展、侵袭与转移中的作用。方法收集40例手术切除并经病理检查证实的胃癌组织标本,用于RNA提取。按Lauren方案分为肠型胃癌11例,弥漫型胃癌29例;按有无胃周围淋巴结转移分为转移组28例,非转移组12例。临床分期采用UICC的TNM方案,Ⅰ、Ⅱ期13例,Ⅲ、Ⅳ期27例。用RT-PCR法检测胃癌组织Cyclin E2基因mRNA表达。结果肿瘤组织表达Cyclin E2 mRNA均明显高于正常对照组织(P<0.05)。在肿瘤组织中可见Cyclin E2 mRNA在有淋巴结转移的肿瘤组织表达明显高于非淋巴结转移的肿瘤组织(P<0.01),TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期者Cyclin E2 mRNA表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(P<0.05)。肿瘤组织中Cyclin E2 mRNA表达与性别及Lauren分型无关(P>0.05)。结论Cyclin E2基因可能促使胃癌转移,其表达水平可能有助于临床分期。

细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系

从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1～ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)

肾透明细胞癌与Cyclin D1基因多态性及相关细胞周期蛋白表达的关联研究

目的:探讨肾透明细胞癌中Cyclin D1基因DNA序列的多态性及其相关细胞周期调控蛋白的表达水平。方法:抽提55例肾透明细胞癌标本和24例正常肾组织标本中的基因组DNA,PCR扩增Cy-clin D1的4号外显子的基因组DNA片段,并行限制性片段长度多态性分析,统计Cyclin D1第242号密码子多态性的分布比例。Western Blot法检测Cyclin D1基因多态性对Cyclin D1、Cdk6和pRb的表达水平以及对pRb磷酸化水平的影响。结果:55例癌组织中,12例(21.8%)的基因型显示为GG;24例(43.6%)的基因型显示为AG;19例(34.5%)的基因型显示为AA。基因型为AA和AG的肾癌组织,其Cyclin D1表达水平和pRb磷酸化水平显著高于基因型为GG的肾癌组织(P<0.01)。GG型肾癌组织中Cyclin D1的表达水平和pRb磷酸化水平与正常组织相比差异无统计学意义;而AA和AG型肾癌组织中Cyclin D1的表达水平分别达到正常组织的(4.87±2.38)倍和(3.43±1.74)倍。多数AA和AG型肾癌的分级显著高于GG型肾癌的分级(P<0.05),但肾癌分期的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在肾透明细胞癌中,Cyclin D1基因第242号密码子具有多态性,且Cyclin D1的等位基因多态性在很大程度上影响了pRb的磷酸化水平,与肾癌病理分级和预后关系密切。

BCSC-1基因异位表达致鼻咽癌细胞CNE-2L2黏附性增强及细胞周期阻滞

目的探讨BCSC-1基因异位表达导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性行为减弱的机制。方法采用碘化丙啶染色DNA,流式细胞法检测细胞周期;Hoechest33258染色分析细胞分裂情况;细胞聚集实验检测细胞的黏附性;Western印迹分别检测E-钙黏蛋白、α-catenin和p53的表达。结果细胞周期分析显示异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞、野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞分别有55.1%、43.4%和39.4%处于G0/G1期,分别有25.2%、28.7%和30.9%处于S期,分别有19.7%、27.9%和29.7%处于G2/M期。野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞有较多细胞处于有丝分裂相,异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞几乎见不到有丝分裂相。异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞的黏附性和E-钙黏蛋白、α-catenin及p53的表达水平均高于野生型CNE-2L2细胞和转染空载体的CNE-2L2细胞。结论异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞的黏附性增强可能与E-钙黏蛋白和α-catenin表达增强相关;异位表达BCSC-1的CNE-2L2细胞阻滞于G1期可能与p53表达增加相关。这些变化可能在细胞恶性行为减弱中发挥作用。

细胞周期蛋白Cyclin D_1和Cyclin E在子宫颈鳞癌的表达及意义

目的:探讨CyclinD1和CyclinE在正常宫颈上皮、CIN和子宫颈鳞癌中表达状况。方法:收集子宫颈活检及手术标本118例,其中正常鳞状上皮14例,子宫颈上皮内瘤样变(CIN)25例,子宫颈鳞癌79例。采用SP免疫组织化学方法,检测CyclinD1和CyclinE蛋白的表达情况。结果:CyclinD1和CyclinE在正常宫颈上皮、CIN和子宫颈鳞癌的中表达水平存在显著性差异(P<0.05),在不同分化程度的宫颈癌间无显著性差异(P>0.05)。结论:在宫颈癌发生过程中伴有CyclinD1和CyclinE表达水平的增高,检测其含量改变有助于宫颈鳞癌诊断。

乳腺癌中细胞周期素D1基因扩增和过表达及其与c-erbB-2的关系

目的 探讨细胞周期素D1基因和表达的改变在乳腺癌中的作用及其与c erbB 2表达的关系。方法 采用原位分子杂交和免疫组织化学技术检测 5 9例乳腺癌组织细胞周期素D1基因扩增、mRNA及其蛋白和c erbB 2的表达。结果 2 7例 (4 5 8% )细胞周期素D1蛋白过表达 ,其过表达与腋淋巴结转移相关 (P <0 0 5 )。细胞周期素D1DNA扩增、mRNA高表达和蛋白过表达三者基本一致 ,与c erbB 2过表达无相关。结论 细胞周期素D1蛋白过表达在乳腺癌频发 ,其基因扩增和转录增加是其重要机制之一。细胞周期素D1和c erbB 2在乳腺癌中各自发挥独立作用 。

人细胞周期蛋白D1/CDK4基因的真核表达及生物活性鉴定

通过生物工程获得人重组细胞周期蛋白 (cyclinD1 )及细胞周期蛋白激酶CDK4蛋白 ,作为抗癌药物筛选的分子靶点 .从人HL 6 0细胞中获得细胞周期蛋白D1 CDK4基因的cDNA ,先克隆至pGEMT Easy载体上 ,再经重组构建供体质粒pFastBac D1和pFastBac CDK4 .重组供体质粒转化感受态DH1 0Bac细胞 ,挑取确证为白色克隆的菌落振荡培养 ,分离制备高纯度杆粒DNA .以重组病毒适量感染昆虫细胞Tn 5B1 4 ,利用Bac to Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞Tn 5B1 4 (Hi5 )中表达相应的重组蛋白 .应用昆虫杆状病毒表达系统 (Bac to Bac)在昆虫细胞Tn 5B1 4中分别高效表达了人细胞周期蛋白D1和CDK4蛋白 .SDS PAGE分析表明 ,表达量占细胞可溶性蛋白质的 2 0 %左右 ,表达产物经Ni2 + NTA亲和层析纯化后纯度达 85 %以上 .研究表明 ,昆虫细胞表达的细胞周期蛋白D1和CDK4蛋白能促进Rb蛋白的磷酸化 ,具有生物活性 .成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4真核杆状病毒表达载体 ,并且在昆虫细胞中正确表达了具有生物活性的细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白 .

非小细胞肺癌中细胞周期蛋白D1与E的作用及相互关系

目的 :研究细胞周期蛋白D1与E在非小细胞肺癌 (NSCLC)发生、发展中的作用及相互关系。方法 :免疫组化方法检测 87例NSCLC肿瘤组织中细胞周期蛋白D1、E的表达及PCNA估计增殖指数 (PI) ,并将上述结果与临床病理及预后资料进行对比分析。结果 :87例NSCLC中细胞周期蛋白D1、E阳性率分别为 4 4 .8% (39/87)、4 8.3% (42 /87) ,细胞周期蛋白D1阳性组的PI值显著高于阴性组 (P〈0 .0 5 ) ,细胞周期蛋白E阳性组PI值与阴性组无显著差异 (P〉0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1阳性组肿瘤直径、淋巴结转移率和生存率均与阴性组有显著差异(P〈0 .0 1、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ,细胞周期蛋白E阳性组淋巴结转移率、临床分期和生存率均与阴性组有显著差异 (P〈0 .0 5、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ;细胞周期蛋白D1阳性组中细胞周期蛋白E的阳性率显著高于其阴性组 (P〈0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1与细胞周期蛋白E双阳性组的PI值、肿瘤直径、淋巴结转移率显著高于非双阳性组 (P值均〈0 .0 5 ) ,生存率显著低于非双阳性组 (P〈0 .0 1)。结论 :细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E均参与NSCLC的发生、发展 ,并影响其预后 ,但两者在其中所起作用不同 :细胞周期蛋白D1是调节NSCLC增殖的主要因素 ,细胞周期蛋白E主要与NSCLC进展有关 ;细胞周期蛋白D1可促?

结直肠腺癌术后组织中细胞周期素A1、E与磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的关系

目的检测结直肠腺癌术后组织中细胞周期素(Cyclin)A1、Cyclin E和磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)的表达,分析三者在不同临床病理特征中的意义及相关性。方法 102例结直肠腺癌术后组织为观察组,距肿瘤边缘>5 cm的非肿瘤性结肠黏膜组织23例为对照组。应用免疫组化SP法检测两组中Cyclin A1、Cyclin E和PTEN的表达。结果观察组中Cyclin A1和Cyclin E的表达明显高于对照组,PTEN表达明显低于对照组(P<0.01)。观察组中Cyclin A1、Cyclin E和PTEN阳性率均与肿瘤最大径和增殖指数相关,Cyclin A1、Cyclin E表达与肿瘤浸润深度和脉管累犯相关。相关性分析显示观察组中Cyclin A1和Cyclin E表达呈正相关。结论结直肠腺癌组织中Cyclin A1、Cyclin E和PTEN异常表达对肿瘤形成和进展均有一定促进作用。Cyclin A1和Cyclin E具有正向协同作用。

hPOT1基因过表达对HeLa细胞细胞周期和凋亡的影响

目的观察人POT1(protectionoftelomeres1)基因过表达对HeLa细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法利用本课题组构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;通过RT-PCR和EMSA法(电泳迁移率改变分析)检测外源基因的表达效果,流式细胞术分析细胞周期,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞48h后,mRNA和蛋白质分析表明,外源性hPOT1基因能在HeLa细胞中有效表达,HeLa细胞阻滞于细胞周期S期,而对凋亡无明显影响。结论hPOT1基因可能参与了高等真核细胞细胞周期调控过程,但与细胞凋亡无密切关系。