细胞周期蛋白K促进食管鳞癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨细胞周期蛋白K(CCNK)促进食管鳞状细胞癌(ESCC)发生发展的机制。方法:对中国ESCC高发区155例患者的转录组数据及GSE53625数据库进行CCNK基因差异表达分析;通过转染慢病毒分别在KYSE150、KYSE30及KYSE180细胞中构建CCNK基因稳定敲减(CCNK-SH)和阴性对照(NC)细胞株;利用集落形成实验和CCK-8法检测敲减CCNK基因对ESCC细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测敲减CCNK基因对ESCC细胞周期的影响;分析155例ESCC患者转录组数据,对CCNK差异表达基因进行信号通路富集;应用免疫荧光染色检测DNA损伤的指标γ-H2AX;分析155例ESCC患者转录组数据和RT-qPCR实验验证CCNK基因与DNA损伤修复相关基因表达的情况。结果:CCNK基因在ESCC组织中高表达(P<0.01);与NC组相比,CCNK-SH组细胞增殖和集落形成能力显著降低(P<0.01);敲减CCNK基因能够将ESCC细胞阻滞于G2/M期(P<0.01);免疫荧光染色结果显示,与NC组相比,CCNK-SH组γ-H2AX信号显著增强(P<0.01);CCNK基因表达与DNA损伤相关基因存在显著相关性。结论:CCNK可能通过DNA损伤修复机制参与细胞周期调控,从而影响ESCC细胞的增殖。

磷酸化的细胞周期相关蛋白在大鼠海马神经元发育和老化过程中的表达

目的:观察正常Wistar大鼠发育及老化过程中海马神经元磷酸化的细胞周期相关蛋白的表达,探讨这一过程中海马神经元的细胞周期的变化以及磷酸化细胞周期相关蛋白在其中的调控作用。方法:采用免疫荧光方法观察不同发育时期(1天、11天、1月、3月、15月)磷酸化周期素依赖激酶2(CDK2)、磷酸化细胞分裂周期激酶2(CDC2)、磷酸化视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白表达的规律,并应用Western blotting方法测定不同阶段大鼠海马内磷酸化CDK2、磷酸化CDC2、磷酸化Rb的含量。结果:在各年龄组中神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数量随着年龄增加而逐渐减少,提示神经元数量随年龄的增加而逐渐减少。磷酸化CDK2、磷酸化Rb阳性细胞的数量随着年龄增加而逐渐增多,老年组增加明显,与其它各组间有显著差异,磷酸化CDC2阳性细胞在各年龄组神经元中表达量均较低;蛋白定量亦提示老年组磷酸化CDK2、磷酸化Rb的含量较其它组明显增高。结论:海马神经元数量随年龄增加逐渐减少,而其中磷酸化CDK2和磷酸化Rb却随年龄的增长逐渐增多,提示老化过程中部分神经元再次进入细胞周期,说明磷酸化细胞周期相关蛋白可能参与了这一过程中海马神经元的凋亡。