树鼩细胞周期蛋白T1 cDNA的克隆和序列分析

树细胞不能感染HIV 1,但支持HIV 1进入靶细胞后的转录 ,可能是因为树细胞周期蛋白T1(tsCycT1)能结合HIV 1的Tat蛋白。通过设计引物 ,用RT PCR技术 ,获得全长为 2 175bptsCycT1基因的cD NA。其核苷酸序列与人的CycT1(hCycT1)基因的cDNA有 92 6 %的相似性 ;由此推导出的氨基酸序列有94 1%相似性。其中 ,hCycT1和tsCycT1氨基端的 1～ 2 72个氨基酸的相似性高达 98 8% ,氨基酸第 2 6 1位点为半胱氨酸。这些结果提示 ,tsCycT1会和HIV 1的Tat结合 ,形成高亲和的、锌依赖的复合物 ,支持HIV 1转录。

小檗碱对2型糖尿病大鼠肾组织细胞周期蛋白依赖激酶9和细胞周期蛋白T1表达的影响(英文)

目的观察2型糖尿病大鼠肾组织细胞周期蛋白依赖激酶9(Cdk9)和细胞周期蛋白(cyclin )T1蛋白的表达及小檗碱的影响。方法小剂量注射链佐星(链脲菌素)加高糖高脂饲料喂养16周建立2型糖尿病大鼠模型,随后16周每天分别给予小檗碱75,150及300 mg·kg-1、非诺贝特100 mg·kg-1和罗格列酮4 mg·kg-1。处死大鼠后用HE染色检查肾组织结构和免疫组化技术检测Cdk9和cyclin T1的表达。结果糖尿病模型大鼠肾小球体积增大,部分系膜细胞增生和系膜区扩张,肾小球及肾小管基底膜增厚,肾重/体重比值增加;150及300 mg·kg-1小檗碱和罗格列酮能部分改善糖尿病性肾组织病变和降低肾重/体重比值。150及300 mg·kg-1小檗碱和罗格列酮都能明显恢复糖尿病肾组织中降低了的Cdk9和cyclin T1表达至接近正常水平。结论小檗碱通过调控肾组织Cdk9和cyclin T1的表达能部分改善实验性糖尿病大鼠肾组织病变。

DNA依赖蛋白激酶催化亚基与细胞周期蛋白T2相互结合的鉴定

目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从HeLa细胞中获得DNAPKcs的相互结合蛋白,对部分结合蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,发现转录延伸因子PTEFb的亚基细胞周期蛋白(cyclin)T2是其中之一。其后,通过Western印迹检测,进一步证实DNAPKcs与cyclinT2相互结合作用。结论首次发现DNAPKcs与cyclinT2的相互结合,提示DNAPKcs参与基因转录调控或转录偶联修复反应的生物学功能。

斑节对虾细胞周期蛋白T基因的克隆和表达分析

真核生物的转录调控多发生在转录的延伸阶段,细胞周期蛋白T(cyclin T)是细胞转录的重要调控因子。文章利用RACE技术获得斑节对虾(Penaeus monodon)cyclin T(Pmcyclin T)c DNA全长,其全长为3 421 bp,其中开放阅读框(ORF)3 135 bp,编码1 044个氨基酸;生物信息学分析显示,该氨基酸序列含有一个周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区,并含有N-糖基化位点和磷酸化位点;经BLAST同源性分析显示,细胞周期蛋白T编码的蛋白与柑橘木虱(Diaphorina citri)、切叶蚁(Acromyrmex echinatior)等多种节肢动物有很高的同源性;利用qRTPCR技术对Pmcyclin T在不同组织及卵巢发育各时期的mRNA水平的表达谱进行了研究。结果表明,细胞周期蛋白T在斑节对虾的心、卵巢等7个组织中均有表达,其中卵巢中表达量显著高于其他组织(P<0.05);在卵巢发育各时期中,细胞周期蛋白T在Ⅲ期表达量最高。

CircACAP2靶向miR-29a-3p/CCNT2轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的:探讨CircACAP2靶向miR-29a-3p/细胞周期蛋白T2(CCNT2)轴对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法:将H9c2细胞分为Control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、Model组(建立H/R模型)、si-CircACAP2组(转染si-CircACAP2)、si-CircACAP2+inhibitor-NC组(si-CircACAP2和inhibitor-NC共转染)、si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组(si-CircACAP2和miR-29a-3p inhibitor共转染);实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测H9c2细胞中CircACAP2、miR-29a-3p的表达水平;四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测H9c2细胞自噬;乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测H9c2细胞上清中LDH、MDA、SOD水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白(Beclin-1、P62)及CCNT2的表达;双荧光素酶报告检测CircACAP2对miR-29a-3p的靶向关系和miR-29a-3p对CCNT2的靶向关系。结果:与Control组比较,Model组H9c2细胞中CircACAP2表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);与Model组比较,si-CircACAP2组H9c2细胞中CircACAP2表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达降低,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达升高(P<0.05);与si-CircACAP2组比较,si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组H9c2细胞中CircACAP2表达差异无统计学意义(P>0.05),凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);CircACAP2靶向调控miR-29a-3p的表达,miR-29a-3p靶向负调控CCNT2的表达。结论:敲低CircACAP2可能通过靶向miR-29a-3p来下调CCNT2表达,进而抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡、自噬能力及氧化应激,促进细胞增殖,发挥保护作用。

JDVTat反式激活LTR与HIV-1Tat采用类似的细胞因子

为分析 JDV Tat 在反式激活 JDV 及 HIV-1 LTR 过程中是否采用与 HIV-1 Tat 类似的细胞因子,本文构建了包含完整激活域的 jTat70 和 hTat47,同时构建了 cyclin T1 和 CDK9 真核表达及反义转译质粒。过量表达 hTat47和 jTat70 对 hTat 反式激活 HIV-1 LTR,jTat 反式激活 JDV 和 HIV-1 LTR 均有明显的抑制作用推测 jTat 和 hTat 的反式激活作用可能涉及类似的细胞因子。通过 cyclin T1 和 CDK9 的反义转译质粒对 jTat 反式激活的抑制作用证实这两种细胞因子参与了 jTat 对 JDV 和 HIV-1 LTR 的反式激活。

cyclin T1与β-catenin在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨cyclin T1与β-catenin在肾透明细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测40例肾透明细胞癌和瘤旁正常组织中cyclin T1和β-catenin的表达。分别以χ2检验和非条件Logistic回归分析寻找与cyclin T1表达相关的因素。结果40例肾透明细胞癌中,37例(92.5%)cyclin T1表达阳性,其中14例(35%)为强阳性,肿瘤组织cyclin T1表达的阳性率显著高于正常肾组织(χ2=9.038,P=0.003);36例(90%)肿瘤胞质β-catenin呈阳性表达,其中18例(45%)呈强阳性表达。单因素χ2检验显示cyclin T1表达分别与肿瘤的分级、β-catenin的胞质表达相关(P分别为0.039、0.014),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期无关(P>0.05);Logistic多因素回归分析显示cyclin T1表达只与β-catenin的胞质表达有关(P=0.018)。结论肾透明细胞癌中cyclin T1表达增强,与肿瘤细胞的分化和β-catenin的胞质表达相关,可能是β-catenin下游目标基因产物之一。

小檗碱对2型糖尿病大鼠视网膜正性转录延伸因子b表达的影响(英文)

目的观察2型糖尿病大鼠视网膜正性转录延伸因子b(P-TEFb)蛋白的表达及小檗碱对其的影响。方法链脲佐菌素(35mg·kg^(-1),ip)诱导糖尿病大鼠模型,2 wk后予高糖高脂饲料喂养共14 wk。wk 17起,大鼠共分为7组,每组10只:A组(不予链脲佐菌素且用标准饲料喂养,不予药物治疗),B组(不予药物治疗),C、D、E组(分别予小檗碱75、150、300 mg·kg^(-1)·d^(-1)),F组(予非诺贝特100 mg·kg^(-1)·d^(-1))和G组(予罗格列酮4mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药16 wk。处死大鼠,采用HE染色检查视网膜结构变化,免疫组化检测P-TEFb的表达,P-TEFb由细胞周期蛋白依赖激酶9(CDK9)和细胞周期蛋白T1 (cyclin T1)组成。结果正常对照组大鼠的视网膜厚度大于其他各组,经中、高剂量小檗碱(150、300 mg·kg^(-1))和罗格列酮治疗能增加糖尿病视网膜的厚度,但视网膜的结构在各组间无差别。中、高剂量小檗碱和罗格列酮都能明显促进糖尿病大鼠视网膜中CDK9和cyclin T1蛋白表达(P<0.01),但低剂量小檗碱(75mg·kg^(-1))和非诺贝特对糖尿病视网膜中CDK9和cyclin T1的表达没有影响(P>0.05)。结论小檗碱调控视网膜P-TEFb(CDK9和cyclin T1)蛋白的表达可能是其改善糖尿病视网膜病的机制之一。