细胞周期蛋白质依赖激酶抑制蛋白在内耳的生物学作用

CDK抑制蛋白是能特异抑制细胞周期蛋白依赖激酶 (CDK)活性的一类家族蛋白 ,它们可以粘附于CDK 细胞周期蛋白复合物并使之失活 ,导致细胞周期停止 ,从而调控细胞的增殖过程。本文对CDK抑制蛋白在内耳的生物学作用做一综述。

CXC趋化因子受体4通过S期激酶相关蛋白2调控乳腺癌细胞周期的机制

目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调控的关联性;蛋白质印迹法检测CXCR4干扰及过表达后对信号蛋白及Skp2下游相关基因表达的影响;通过碘化丙啶(PI)染色法检测CXCR4、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞周期的影响。结果:干扰CXCR4后,Skp2表达下调;过表达CXCR4后,Skp2表达上调。CXCR4可通过对信号蛋白的调控影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达。干扰CXCR4后,G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞比例相应减少,CXCR4与LY294002及U0126联合作用对细胞周期的阻断更加明显。结论:CXCR4能够通过对信号蛋白PI3K/Akt及ERK的调控,影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达,阻断CXCR4/Akt/Skp2或CXCR4/ERK/Skp2信号通路后可有效诱导细胞周期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。

p53Arg72Pro多态性与细胞周期调控蛋白在HPV相关子宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨p53Arg型和p53Pro型蛋白功能失活与细胞周期调控异常在HPV相关子宫颈鳞癌发生机制中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测p53、CyclinD1、Cdk4、Rb磷酸化及Ki-67蛋白表达(PI)。结果在HPV阳性p53蛋白阴性的子宫颈鳞癌组中CyclinD1、Cdk4蛋白表达、Rb蛋白磷酸化率及PI值均明显高于子宫颈对照组(χ2=16.878,P<0.01;χ2=21.120,P<0.01;χ2=40.36,P<0.01;t=30.53,P<0.01)。CyclinD1与Cdk4蛋白表达、Rb磷酸化率均呈正相关(P<0.01),Rb高磷酸化组中的PI值高于低磷酸化组(P<0.05)。p53Pro型子宫颈鳞癌组中CyclinD1蛋白表达和PI值均高于p53Arg型组和p53Pro/Arg型组(P<0.05)。结论 HPV阳性的子宫颈鳞癌组中部分p53蛋白表达阴性,提示该部分p53蛋白被E6蛋白降解。在p53阴性的子宫颈鳞癌组织中PI值增高与CyclinD1-Cdk4-Rb磷酸化途径有关。p53Pro型组比p53Arg型组蛋白可能具有较强的细胞周期阻滞功能。

软肝冲剂对肝硬化大鼠p^(21)及细胞周期调控的影响

目的:研究软肝冲剂对CCl_4肝硬化大鼠p^(21)mRNA表达及细胞周期各时相DNA含量的影响,从mRNA、DNA水平探讨软肝冲剂阻止肝硬化的作用机理。方法:采用RT-PCR及流式细胞计数仪分别检测CCl_4肝硬化大鼠P^(21)mRNA表达、DNA含量。结果:软肝冲剂能降低CCl_4肝硬化大鼠p^(21)mRNA表达,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),大剂量组的疗效与小剂量组比较无明显差异(P>0.05)。正常肝组织p^(21)mRNA呈相当低水平表达,其表达相对值为(0.17±0.06)U。定量DNA图像分析发现模型组中处于G1期的细胞数要明显多于其他各组(P<0.01),软肝冲剂大剂量组中处于G1期的细胞数要明显少于软肝冲剂小剂量组(P<0.01)。结论:软肝冲剂能调节p^(21)基因表达,调节细胞周期,促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成。

LM23调控细胞周期蛋白CDKs在大鼠精子发生过程中具有重要作用

目的借助本研究室建立的活体LM23基因沉默大鼠动物模型,制备LM23蛋白的合成肽多克隆抗体和生物信息学等方法,研究LM23蛋白的功能。方法利用互联网公共信息数据库PROSITE,Protfun server,PSORT server和BLAST等生物分析工具软件对LM23进行生物信息学分析。

双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠细胞周期的双重调控作用及其机制

目的:探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠骨髓和肿瘤细胞周期双重调控的作用机制。方法:本研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组。除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型。治疗组用40g/(kg.d)双黄升白颗粒治疗6d后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数(proliferationindex,PI);蛋白印迹法和免疫组织化学法检测骨髓及肿瘤组织中细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase4,CDK4)、细胞周期蛋白依赖激酶6(cyclin-dependent ki-nase6,CDK6)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。结果:模型组骨髓及肿瘤的G0/G1期细胞比例均低于空白组(P<0.05),PI和CDK4、CDK6、cyclin D1表达高于空白组(P<0.05)。治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyclinD1表达均高于模型组及空白组;肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于模型组及空白组,PI及CDK4、CDK6、cyc-lin D1表达均低于模型组及空白组。结论:双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的细胞周期具有双重调控作用,其机制可能与双重调节cyclin D1、CDK4和CDK6表达有关。

三丁基过氧化氢诱导WI-38细胞衰老的细胞周期调控机制

目的 :探讨三丁基过氧化氢 (t-BHP)诱导WI - 38细胞衰老的细胞周期调控机制。方法 :从 30代开始 ,隔代用t-BHP作用WI- 38细胞 4次 ,每次 1h,诱导细胞衰老 ,从细胞超微结构、细胞周期分析和β -半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞的特点 ,同时用Westernblotting方法检测细胞周期调控蛋白CDK4、CDK2、cyclinD1、cyclinE、p2 1和p16的表达程度。结果 :10 0 μmol/Lt-BHP作用 4次后 ,WI- 38细胞出现衰老的特征 ,细胞增殖分裂停止 ,细胞体积增大、胞体变平、次级溶酶体增多 ,同时G1期细胞比例增加 ,β -半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加 ,提示t-BHP能有效地诱导细胞衰老。t-BHP作用后CDK4、CDK2、cyclinE表达下降 ,cyclinD1、p2 1和p16表达增加。结论 :t-BHP有诱导细胞衰老的作用 ,其机制可能与通过调节细胞周期调控分子的表达有关。

辛基酚对MDA-MB-231乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响

目的:观察辛基酚(OP)对细胞周期及周期蛋白表达的影响,探讨OP抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的可能分子机制.方法:以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察OP对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、细胞周期、CDK2,CDK4,cyclinD1和cyclinD3表达的影响.结果:4,8μmol/LOP作用MDA-MB-231乳腺癌细胞48h时,其抑制率为(17.1±4.1)%,(40.3±8.7)%,cyclinD1表达量荧光值为55.1±10.2,41.4±11.2,比对照组(89.9±11.2)明显降低(P<0.05).8μmol/LOP作用MDA-MB-231乳腺癌细胞24h和72h,G0/G1期细胞为(67.0±17.6)%和(44.4±11.9)%,G0/G1期细胞比对照组[24h,(46.6±12.8)%;72h,(15.3±3.1)%]明显增高(P<0.05).OP导致MDA-MB-231乳腺癌细胞中CDK2,CDK4,cyclinD1和cyc-linD3mRNA的表达降低,且cyclinD1蛋白的表达也降低.结论:OP能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖,其机制可能与OP能降低乳腺癌细胞中CDK2,CDK4,cyclinD1和cyclinDmRNA及其蛋白的表达有关.

喉癌及癌前病变中细胞周期调控基因甲基化的研究

目的探讨细胞周期调控基因p14,p15及p16在喉癌发生发展中的作用。方法选取20例喉癌癌前病变(包括喉角化8例、白斑4例和成人复发性喉乳头状瘤8例)、30例喉鳞状细胞癌(声门型)及10例癌旁组织。采用甲基特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测p14,p15及p16基因启动子区过甲基化。结果p14,p15及p16基因启动子过甲基化发生率在癌前病变中分别为10%(2/20)、15%(3/20)、20%(4/20);在喉癌中分别为30.0%(9/30)、40.0%(12/30)、36.7%(11/30);在癌旁组织中未检测到过甲基化事件。结论细胞周期调控基因p14,p15及p16启动子区过甲基化发生于喉癌早期病变中,可作为喉癌前病变及早期喉癌筛查的指标之一。

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达对神经细丝磷酸化的影响(英文)

背景:阿尔茨海默病的主要神经病理学特征之一是由过度磷酸化的细胞骨架蛋白(如,神经细丝)组成的神经原纤维缠结,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5可催化蛋白的磷酸化,但神经细丝是否可被细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5磷酸化及其在阿尔茨海默病发病中的作用却知之甚少。目的:在细胞水平观察细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5过度表达对神经细丝磷酸化的影响。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。材料:实验于2001-02/10在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系实验室完成。观察对象为培养的鼠成神经瘤细胞株(N2a)细胞。方法:培养N2a细胞,分为2组,一组为转染组,一组为未转染组。转染组用脂质体转染技术将细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5基因转入N2a细胞株中,并建立稳定表达细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5的N2a/cdk-5细胞株,免疫沉淀法及酶活性测定检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5活性,免疫荧光和免疫印迹技术检测它的表达和神经细丝的磷酸化状态。主要观察指标:两组细胞内神经细丝磷酸化的程度。结果:在N2a细胞株转染组中,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5表达增加,并使抗体SMI31显色增强,SMI32显色减弱,提示神经细丝被过度磷酸化。与此同时,细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5酶活性较未转染组提高3.5倍。结论:提示细胞水平的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度表达会导致细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-5过度激活和神经细丝过度磷酸化,而过度磷酸化的神经细丝可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。

不同临床病理特征非小细胞肺癌中miR-1269的表达及其对细胞周期的靶向调控作用

目的研究不同临床病理特征非小细胞肺癌(NSCLC)中miR-1269的表达及其对细胞周期的靶向调控作用。方法收集2015年3月至2018年12月商丘市第一人民医院手术切除的NSCLC病灶和对应的癌旁病灶58例,检测miR-1269及细胞周期蛋白的表达量;培养肺癌A549细胞株,转染miR-1269的模拟物和抑制物后检测细胞周期蛋白的表达量。结果NSCLC病灶中miR-1269的表达量明显高于癌旁病灶(P<0.05)且低未分化、有淋巴结转移、有脉管浸润、有胸膜侵犯的NSCLC病灶中miR-1269的表达量明显高于高中分化、无淋巴结转移、无脉管浸润、无胸膜侵犯的NSCLC病灶(P<0.05);NSCLC病灶中Cy-clinD1、CDK4、CDK6的表达量明显高于癌旁病灶且与miR-1269呈正相关,p21Cip1、p27Kip1的表达量明显低于癌旁病灶且与miR-1269呈负相关(P<0.05)。miR1269模拟物组A549细胞中CyclinD1、CDK4、CDK6的表达量明显高于空白对照组、NC模拟物组,p21Cip1、p27Kip1的表达量明显低于空白对照组、NC模拟物组(P<0.05);miR-1269抑制物组A549细胞中CyclinD1、CDK4、CDK6的表达量明显低于空白对照组、NC抑制物组,p21Cip1、p27Kip1的表达量明显高于空白对照组、NC抑制物组(P<0.05)。结论miR-1269的高表达与NSCLC病理特征的变化有关且miR-1269能够靶向调节细胞周期蛋白的表达。

细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂诱导HL-60细胞凋亡及分子机制研究

目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（ CDK ）抑制剂SNS-032诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的效应及可能的机制。方法：以CDK抑制剂SNS-032作用于HL-60细胞株，实验细胞分为对照组、SNS-032组、白细胞介素（ IL）-6组和SNS-032＋IL-6组。 MTT法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡， microRNA芯片技术分析细胞microRNA的表达谱差异，蛋白质印迹法检测JAK／STAT3相关信号通路蛋白的表达。结果：SNS-032可降低细胞存活率，诱导HL-60细胞凋亡，对照组、100 nmol／L 和200 nmol／L 的 SNS-032干预组细胞凋亡率分别为（5.9±1.7）％、（12.1±3.1）％和（59.4±3.6）％。 microRNA 芯片分析结果显示， SNS-032显著下调HL-60细胞miR-30a、miR-183、miR-20b、miR-26b、miR-20a、miR-589、miR-107、miR-181 a、miR-106 a、miR-17和miR-378 c的表达水平，显著上调miR-320 a的表达水平。蛋白质印迹法显示 SNS-032可抑制 STAT3的磷酸化和 JAK2、MCL-1、C-MYC蛋白的表达。作为JAK／STAT3通路的激活剂， IL-6联合SNS-032不能逆转后者对HL-60细胞的杀伤作用（ P＞0.05），也不能逆转SNS-032对JAK2蛋白表达和磷酸化STAT3的抑制作用。结论：SNS-032能显著诱导人急性髓系白血病HL-60细胞发生凋亡，其机制可能与抑制JAK2和STAT3磷酸化、抑制MCL-1和C-MYC及与之相关的miR-17-92基因簇表达水平有关。

细胞周期素D1、S期激酶相关蛋白2与p27^(kip1)在结直肠癌中的表达及相关性研究

细胞周期调控机制是由复杂的网络调控系统组成,其调控紊乱是肿瘤发生发展的重要分子事件。参与细胞周期调控的主要因子有：

上颌窦鳞状细胞癌细胞周期调控因子表达及意义

目的 检测上颌窦鳞癌、上颌窦内翻性乳头状瘤及上颌窦炎性黏膜中细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白E(cyclinE)、P2 1WAF1/CIP1和P2 7KIP1的表达情况 ,分析其表达与上颌窦鳞癌病理分化程度的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测 5 0例上颌窦鳞癌、2 0例上颌窦内翻性乳头状瘤、10例上颌窦炎性黏膜中cyclinD1、cyclinE、P2 1WAF1/CIP1和P2 7KIP1的表达情况。结果 ①在上颌窦鳞癌、上颌窦内翻性乳头状瘤及上颌窦炎性黏膜中 ,cyclinD1阳性表达率分别为 10 0 %、2 5 0 %、4 8 0 %(P <0 0 5 ) ;cyclinE阳性表达率分别为 2 0 0 %、35 0 %、5 8 0 % (P <0 0 5 ) ;P2 1WAF1/CIP1阳性表达率分别为 80 0 %、6 5 0 %、4 0 0 % (P <0 0 5 ) ;P2 7KIP1阳性表达率分别为 70 0 %、75 0 %、4 0 0 % (P <0 0 5 ) ;②cyclinD1、cyclinE、P2 1WAF1/CIP1和P2 7KIP1阳性表达率与上颌窦鳞癌的性别、T分型差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;③P2 1WAF1/CIP1在高、中和低分化的上颌窦鳞癌中阳性表达分别为 11/15、11/19、4 /16 (P <0 0 5 ) ;cyclinD1、cyclinE和P2 7KIP1在高、中和低分化的上颌窦鳞癌中阳性表达率组间比较差异无显著性 (P值均 >0 0 5 )。结论 ①在上颌窦炎性黏膜、上颌窦内翻性乳头状瘤及上?

CyclinD1、PCNA、Ki67细胞周期相关蛋白在喉复发癌组织芯片中的表达和意义

目的研究Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白的表达与喉癌复发的关系,并评价其对预后评估的作用.方法回顾分析1958～1999年喉癌手术病例574例,术后随访3年,确诊术后复发56例;正常喉对照标本39例.标本制成组织芯片,采用免疫组化SABC法,对芯片标本进行染色.结果 Cyclin D1、PCNA、Ki-67在喉癌组织及正常喉组织中均有表达,且在喉癌组织的表达强于正常喉组织(P<0.01),在喉癌复发组强于未复发组(P<0.01),与喉癌复发呈正相关.结论 Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白的表达可作为估计喉癌预后的指标.

细胞周期调控因子异常与食管癌

细胞周期是细胞生命活动的基本过程 ,其调控因子的异常与细胞癌变关系密切。食管癌发生发展过程中 ,多种细胞周期调控因子表达异常 ,并与临床病理特征有密切关系。

细胞周期调控因子p27^(kip1)和DI及SPF值在食管癌检测中的意义

目的:研究细胞周期调控因子p27kip1、DNA指数(DI)和细胞周期S期细胞比值(S-phasefraction,SPF)在食管癌组织中共同检测的意义。方法:对48例食管癌组织采用免疫组织化学方法检测其p27kip1蛋白含量的表达;同时,应用流式细胞术检测DI和SPF。结果:48例癌组织p27kip1蛋白高表达率为33·33%(16/48),而癌周正常组织为78·12%(25/32);癌组织的SPF(1·48±0·32)及DI[(19·48±12·35)%]明显高于癌周组织[1·02±0·17,(9·39±5·75)%],P<0·05;p27kip1低表达组的DI(1·66±0·28)和SPF[(19·78±6·12)%]高于p27kip1高表达组[1·10±0·19,(5·56±5·18)%],P<0·05。并且随着组织学分级和TNM分期的升高,DI和SPF有增加趋势,在Ⅰ、Ⅱ级之间及Ⅰ、ⅡA期之间的差异有统计学意义,P<0·05。结论:p27kip1、SPF和DI共同检测可作为辅助临床判断食管癌的生物学行为及预后的指标。

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸(9-cis-RA)处理前后人肺鳞癌细胞株L78、A2的细胞周期调控因子Cy-clinD1、Cdk4转录水平的变化。探讨其抑制肺鳞癌细胞生长的作用机制。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平的变化。结果:9-cis-RA对两细胞株的细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论:9-cis-RA抑制肺鳞癌细胞株L78、A2增殖的作用机理与其调节细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4的转录有关。