丙型肝炎病毒核心蛋白上调细胞周期调节蛋白Weel基封表达研究

目的：了解丙型肝炎病毒核心蛋白和细胞周期调节蛋白Weel基因表达的关系，研究HCV核心蛋白在HCV致病的分子生物学机制中的作用．方法：应用聚合酶链反应(PCR)扩增Weel基因启动子，命名为Weep．以T-A克隆法，将Weep基因片段连入载体pGEM-T．将获得的质粒pT-Weep，与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和XhoI双酶切后构建Weel启动子报告载体pCAT3-Weep，分别以重组报告载体pCAT3-Weep和pcDNA3．1(-)-core瞬时转染HepG2细胞，以转染pCAT3basic的HepG2细胞为阴性对照，48h后收获细胞．应用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性，以了解HCV核心蛋白对Weel基因启动子的反式激活作用．结果：构建的表达载体pcDNA3．1(-)-core和报告载体pCAT3-Weep经过序列分析和酶切鉴定正确．pCAT3-Weep和pcDNA3．1(-)-core瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的3．4倍，pCAT3-Weep的2．3倍．结论：丙型肝炎病毒核心蛋白可反式激活Weel基因启动子，进而上调细胞周期调节基因Weel的表达。

淫羊藿素通过调控黏着斑激酶及下游细胞外信号调节激酶/细胞周期蛋白D1和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素蛋白信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究

目的探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5μmol/L不同浓度的ICA给药干预72小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7肝癌细胞生存的影响;将Huh7肝癌细胞给与ICA高(10μmol/L)、中(5μmol/L)、低(2.5μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7肝癌细胞给与ICA IC 50值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析。另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析。结果ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在G1期发生阻滞(P<0.05)。另外,研究发现ICA可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1以及p-Akt、p-mTOR、p-S6的表达水平。结论ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长。

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均<0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均<0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均<0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。

六亚甲基二乙酰胺对HL-60细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响

六亚甲基二乙酰胺 (hexamethylenebisacetamide ,HMBA)是一种极性诱导分化剂 ,已应用于临床治疗急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征 (MDS) ,但其诱导髓系白血病细胞分化的机制尚不清楚。本研究观察了HMBA对HL 60白血病细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响 ,以探讨其药理机制。用流式细胞术检测HMBA对HL 60细胞细胞周期分布和细胞周期蛋白D、E及p2 7表达的影响 ,用RT PCR研究HMBA对细胞周期负性调控分子CKIp15,p16,p2 7基因mRNA表达的影响。结果表明 ,HMBA主要使HL 60细胞阻滞于G0 /G1期 ,经HMBA处理后HL 60细胞胞浆内细胞周期蛋白E蛋白表达显著降低 ,而细胞周期蛋白D和p2 7蛋白表达则显著增高 ;未经HMBA处理的HL 60细胞 p15,p16mRNA均无表达 ;3mmol/LHMBA处理 2 4小时后 p15mRNA出现弱阳性条带 ,48小时和 72小时后出现强阳性条带 ,p16mRNA则在 48小时后出现弱阳性条带 ,72小时后出现强阳性条带 ;p2 7mRNA在未经处理和处理后 2 4,48和 72小时后均出现强阳性条带 ,阳性程度无明显差异。结论 :HMBA的药理机制之一可能是通过下调细胞周期蛋白E ,上调p2 7蛋白的表达 ,同时使得 p15,p16基因mRNA重获表达 ,阻滞HL 60细胞周期于G1期 。

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的:观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用;研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cy-clin E、CDK_2和p27^(Kipl)蛋白表达的改变,并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法:0.2～3.2 mg/ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96 h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带,流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96 h时细胞内cyclin E、CDK_2和p27^(Kipl)的蛋白表达。结果:庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用,庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性;庆大霉素致细胞周期停滞于G_1期。随着庆大霉素浓度的增加,细胞内cy-clin E和 CDK_2蛋白表达逐渐下调,而p27^(Kipl)蛋白表达则逐渐上调。结论:庆大霉素诱导的LLC-PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclin E和 CDK_2表达下调以及p27^(Kipl)表达上调有关。

多球壳菌素诱导系膜细胞凋亡及对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响

目的观察多球壳菌素(ISP-1)对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用,研究ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养大鼠GMC,加入100μmol/L ISP-1干预,分别于作用6、12、24、48 h后以流式细胞术检测GMC凋亡,Hoechst33258/PI染色观察凋亡细胞形态变化,琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象,并通过SuperArray Real-Time PCR细胞周期基因芯片测定ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,Western blotting法观察Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果ISP-1可显著诱导GMC凋亡,并呈一定的时间依赖性,作用48 h后细胞凋亡最显著,Hoechst33258/PI荧光染色法可见亮蓝色的凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现;PCR细胞周期基因芯片检测结果发现ISP-1可显著上调GMC Rad51、Atm、Brcal、Caspase3、cyclinA2、cyclinC、chek1、cyclinB1、cyclinB2、cyclinD2、cyclinF、Cdc25a和P27等一些与DNA损伤、凋亡和细胞周期调节蛋白相关的基因的表达;Western blotting发现ISP-1可显著上调GMC Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论ISP-1可时间依赖性诱导体外培养的正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关。

细胞外信号调节激酶-1、细胞周期蛋白D1表达与儿童急性白血病关系研究

目的探讨细胞外信号调节激酶_1(ERK1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达与儿童急性白血病(AL)的关系。方法50例儿童AL(AL组)和26例AL完全缓解(AL_CR组)患儿为病例组,23例非肿瘤性疾病患儿为对照组,采用超敏SP免疫组织化学法,检测各组骨髓细胞中ERK1、cyclinD1的表达情况。结果AL组ERK1、cyclinD1阳性率分别为68.00%和56.00%,明显高于AL_CR组(3.85%,3.85%)和对照组(0,0)(P<0.01);高危AL患儿中阳性率分别为90.91%、86.36%,明显高于标危AL患儿(P<0.01);16例AL患儿化疗前ERK1、cyclinD1阳性率分别为75.00%、68.75%,化疗缓解后阳性率均为0(P<0.01);AL组中ERK1、cyclinD1表达相同(χ2=2.5,P>0.05)。结论AL患儿ERK1、cyclinD1表达率较高,可作为近期疗效的观察指标;ERK1与cyclinD1过度表达相同,可能在AL发生发展过程中有协同作用。

益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27表达的影响

目的观察中药复方益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27表达的影响。方法将41只SD大鼠随机分为正常对照组与糖尿病组。后者以链脲佐菌素腹腔内注射诱导糖尿病大鼠模型,成模大鼠按干预方法不同分为:益肾汤、缬沙坦、糖尿病未治疗3组。干预8周,观察大鼠体重、肾重、血糖、24 h尿总蛋白、24 h尿白蛋白、尿素氮、肾组织p27表达等指标。结果与糖尿病未治疗组比较,益肾汤及缬沙坦组肾组织p27表达显著减少,尿白蛋白含量降低;肾组织p27的表达量与24 h尿白蛋白浓度呈显著正相关。结论益肾汤防治糖尿病肾病的作用与降低肾脏p27表达有关。

细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1和p27kip1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤〔1〕,欧美国家中的老年患者(60岁以上)约占49%〔2〕。细胞在基因水平上失去对本身生长的正常调控,生长周期失调紊乱,可发生肿瘤,p27 kip1作为抑癌基因,负性调控细胞周期,表达水平与细胞增殖程度紧密关联。CKS1正性调节细胞周期,是一种癌基因,能够促进肿瘤发生,在肝癌、乳腺癌、胃癌等癌组织中表达增高〔3,4〕。

缺血性急性肾衰大鼠肾组织细胞周期调节蛋白表达的变化

目的 :探讨缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK 2的表达及与肾小管上皮细胞增生的关系。 方法 :建立缺血性急性肾功能衰竭大鼠模型 ,分别在第 0、2、7、10、14天处死。以生化法测定血清肌酐 (SCr)值 ,以免疫组织化学染色技术观察肾组织内细胞增生程度以及cyclinE和CDK 2的表达和分布情况。 结果 :大鼠SCr值在缺血再灌注第 2天开始显著增高 ,第 7天最高 ,第 10天开始降低 ,第 14天基本降至正常。对照组肾组织细胞增生指数 (PI)为 0 1% ,肾缺血后第 2、7、10和 14天PI分别为 14 8%、30 9%、2 3 6 %和12 4%。cyclinE和CDK 2蛋白在肾组织内分布于皮质肾小管 ,少数在间质 ,且肾缺血后第 2天表达弱阳性 (+) ,第7天表达强阳性 (+++) ,第 10天表达阳性 (++) ,第 14天表达弱阳性 (+) ;肾小球内基本无表达。 结论 :缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织cyclinE/CDK 2蛋白表达增强与肾小管上皮细胞增生程度相一致。表明cyclinE和CDK 2是调控缺血性急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞增生的关键蛋白。

喉鳞状细胞癌患者视网膜母细胞瘤蛋白和细胞周期调节蛋白D1异常表达

目的:探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)患者视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)和细胞周期调节蛋白D1(Cyclin D1)的异常表达及其相关性。方法:选择36例喉部疾病手术患者,包括LSCC(LSCC组)、声带息肉(息肉组)和癌前病变(癌前组)各12例,各组均于手术后取病变组织,采用Western-blotting检测pRb和Cyclin D1蛋白表达水平,统计学分析各组两指标差异及相关性。结果:与息肉组比较,癌前组pRb表达水平降低(P<0.01),Cyclin D1表达水平升高(P<0.01);与癌前组比较,LSCC组pRb水平更低(P<0.01),Cyclin D1水平更高(P<0.01)。三组pRb与Cyclin D1蛋白水平均呈显著负相关(r分别为-0.94、-0.83和-0.92,P均<0.01)。结论:LSCC的发生和发展与pRb表达降低和Cyclin D1表达增加有关。

补肾促卵颗粒对体外受精-胚胎移植技术周期颗粒细胞家族特异性受体α-1和细胞周期调节蛋白B1表达的影响

制约妊娠率的研究之一就是卵母细胞质量的提高。胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）家族特异性受体α-1（GFRα-1）表达于在小鼠、猪等哺乳动物卵母细胞和颗粒细胞[1]。Aravin-dakshan等[2]认为卵母细胞通过间隙连接的建立通过受体GFR-1调控着GDNF在颗粒细胞上的表达。

系膜细胞增殖与细胞周期调节蛋白

系膜细胞增殖是多种肾小球疾病的共同特征。包括免疫介导的肾小球疾病如IgA肾病、膜增殖性”肾小球肾炎、狼疮肾炎；代谢性肾病如糖尿病肾病；血流动力学异常介导的肾病如5／6肾切除等。继发于系膜细胞增殖的细胞外基质（ECM）增多和肾小球滤过功能下降是慢性肾脏病（CKD）进展的重要原因。因此。调控系膜细胞增殖具有重要的意．义。针对不同类型的损伤，肾脏的各种固有细胞可表现为增殖、肥大、凋亡、分化等。而不同细胞的不同反应决定了这种肾小球损伤的组织病理学和临床表现特征。这些细胞反应乍看上去毫不相关．实际上．细胞的最终命运是在细胞周期水平由共同的调控者——细胞周期调节蛋白决定的。

泛素-蛋白酶体途径介导的细胞周期调节蛋白的水解

泛素-蛋白酶体途径高选择性地降解细胞在应激和非应激条件下产生的异常蛋白质,对维持细胞正常生理功能具有十分重要的意义。在蛋白质降解过程中泛素的重要作用越来越得到研究者的重视。许多研究表明泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白水解在真核细胞 G_1→S期过程中起着至关重要的作用。本文就细胞周期 G_1、S 期中由泛素介导的几种重要的细胞周期调节蛋白的水解作一综述。

PTEN蛋白在细胞周期调节中的作用

PTEN是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因,它能特异性地使3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)去磷酸化,拮抗三磷酸肌醇激酶(PI3K/AKT)信号转导系统,使细胞周期阻滞于G1期。也可通过灶性粘连激酶(FAK)途径和致细胞分裂素激活的蛋白激酶(MAPK)途径来调节细胞周期进展和细胞凋亡等,从而抑制多种肿瘤的发生和发展。在白血病细胞系中,PTEN基因通过直接或间接失活机制出现表达异常,其机制需进一步研究。

IL-13等因素对肾小球系膜细胞表达细胞周期调节负控蛋白p27的影响

目的 :探讨IL 13、ET 1、甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞表达细胞周期负控蛋白p2 7的变化。方法 :不同浓度IL 13 (10ng/mL、10 0ng/mL)、ET 1(10 7mol/L)、甲基强的松龙 0 5μg/mL、肝素钠 2 0 0mg/L和10 0 μg/L ,作用于培养的系膜细胞。流式细胞仪检测p2 7表达水平。结果 :IL 13 10ng/mL浓度组和 10 0ng/mL浓度组p2 7表达为 46 74± 3 2 5和 2 3 8± 2 56,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1,P <0 0 5) ,两不同浓度组之间差异有显著意义 (P <0 0 1)。ET 1刺激 14h和 18h后p2 7的表达分别为 14 76± 1 49和 12 18± 1 3 0 ,与对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5,P <0 0 5)。甲基强的松龙 48h及 72h后p2 7表达为 9 9± 1 0 1和 9 12±0 93 ,与对照组比较明显降低 ,P <0 0 0 1。肝素钠 10 0mg/L浓度组和 2 0 0mg/L浓度组p2 7的表达分别为 2 6 94±1 2 3和 2 8 0 4± 0 99,较对照组明显升高 (P <0 0 5) ,不同浓度组间比较无明显差异。结论 :肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p2 7表达水平不同。p2

细胞周期调节蛋白与肾脏疾病

细胞周期调控是肾脏疾病发病机制研究的新领域。细胞周期调节蛋白调控细胞的生长方式 。

G蛋白调节子16对胶质瘤C6细胞周期的调节

目的 探讨G蛋白调节子 16(RGS16)对胶质瘤C6细胞周期的影响。方法 利用脂质体介导法将RGS16基因导入C6细胞中 ,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁生长情况 ;免疫细胞化学法检测转染前后RGS16蛋白的表达情况 ;流式细胞仪检测转染pCMV 5 RGS16和 pCMV 5质粒后每隔 12h后的细胞周期变化。 结果 转染pCMV 5 RGS16质粒 2 4h后 3 0 .0 %细胞贴壁性降低 ,突起收缩 ,细胞变圆 ,72h之后细胞又恢复正常 ;RGS16蛋白的表达呈时相性 ,3 6h时表达率最高 (阳性率为13 .0 % ) ,72h表达终止 ;C6细胞的各期细胞比例变化与RGS16蛋白表达对应 ,在 3 6h时G1期比例从转染前的 70 .5 %降低到60 .2 % ,S期比例从 2 0 .9%增加到 3 4.9% ;在 48h时G1期增加到 76.2 % ,S期减少到 11.4% ;72h各期恢复到正常比例。对照组细胞转染前后形态变化不明显 ,RGS16蛋白表达阴性 ,细胞周期变化不明显。

Alzheimer病患者外周血淋巴细胞周期分布及细胞外信号调节激酶1/2/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路的改变及意义

目的研究Alzheimer病(AD)患者外周血淋巴细胞周期分布及上游调控通路细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的改变及意义。方法对30例AD患者(AD组)用流式细胞分析仪检测外周血淋巴细胞周期分布,用Western Blot法检测淋巴细胞ERK1/2/m TOR通路和周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21的表达,并与帕金森病(PD)患者(PD组)及正常对照者(NC组)进行比较。分析AD组细胞周期相关蛋白与简易精神状态检查(MMSE)量表评分、病程的关系。结果与NC组相比,AD组外周淋巴细胞分布于G1期的比例(G1%)显著下降而S%显著升高(均P<0.01);淋巴细胞中p-ERK1/2、pm TOR和p21水平显著下降(均P<0.01)。与NC组相比,PD组ERK1/2、p-ERK1/2、m TOR、p-m TOR、p21的差异均无统计学意义。AD组外周血淋巴细胞p-m TOR水平与MMSE评分呈正相关(r=0.592,P=0.018),与病程呈负相关(r=-0.558,P=0.025)。结论 AD患者外周血淋巴细胞周期分布存在异常,淋巴细胞的pERK1/2、p-m TOR和p21水平显著下降,并且病情越重、病程越长者p-m TOR水平下降越明显。外周血淋巴细胞p-ERK1/2、p-m TOR和p21有可能成为AD诊断及病情评价的外周标志物。