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回收甲状腺细针穿刺液基细胞进行 BRAF^(V600E)检测的应用价值 被引量:1
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作者 曹丹 吕京澴 陈汝蕾 《中国血液流变学杂志》 CAS 2022年第1期146-150,共5页
目的探讨从甲状腺细针穿刺(fine-needle aspiration,FNA)的液基涂片中提取DNA进行BRAFV600E基因检测的实际应用价值。方法选取细胞学诊断为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC),而BRAF^(V600E)阳性诊断依据不足的18例作为... 目的探讨从甲状腺细针穿刺(fine-needle aspiration,FNA)的液基涂片中提取DNA进行BRAFV600E基因检测的实际应用价值。方法选取细胞学诊断为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC),而BRAF^(V600E)阳性诊断依据不足的18例作为对照组,对照组的DNA均直接从细胞裂解液中提取,实验组来自于上述18例液基涂片上再回收的细胞,重新对其进行DNA的提取以及用扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)对BRAF^(V600E)突变状态进行检测分析,并确认术后组织学类型。结果实验组的DNA浓度、纯度以及内控均满足实验要求,与对照组差异没有统计学意义(P>0.05)。扩增结果显示实验组的扩增曲线呈S型且循环阈值(cycle threshold,Ct)小于30,均可判读为突变型,组织学确诊为PTC。结论FNA的液基涂片细胞再回收不影响DNA的质量,并且使得BRAFV600E的突变状态诊断更加明确。 展开更多
关键词 FNA 细胞回收 BRAF^(V600E)突变检测
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蛋白A亲和层析法纯化单克隆抗体工艺的优化 被引量:10
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作者 陈泉 卓燕玲 +6 位作者 许爱娜 咸漠 彭馨莹 杨元生 张海波 年锐 张巍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期807-818,共12页
治疗性单克隆抗体药物已成为生物医药领域市场最主要的产品类别。蛋白A亲和层析作为第一步捕获抗体蛋白最为有效的手段仍然在现有单克隆抗体纯化平台中占据主导地位。在本研究中,首先开发了一种基于低p H处理抗体细胞回收液的新型细胞... 治疗性单克隆抗体药物已成为生物医药领域市场最主要的产品类别。蛋白A亲和层析作为第一步捕获抗体蛋白最为有效的手段仍然在现有单克隆抗体纯化平台中占据主导地位。在本研究中,首先开发了一种基于低p H处理抗体细胞回收液的新型细胞液回收技术,该技术能有效去除宿主相关污染物(非组蛋白宿主杂质蛋白、组蛋白、DNA、蛋白聚合物等),同时保证较高的抗体回收率。通过该技术有效预处理后,蛋白A纯化效率可提高10倍左右,并且有效避免了抗体洗脱液中和后浊度的上升,大大减轻了后续蛋白纯化的压力。同时我们也对酸性处理中各种宿主杂质去除机制进行了研究。然后,预处理的洗脱液再经一步Capto adhere色谱纯化,非组蛋白宿主杂质蛋白降低至5 ppm、DNA小于1 ppb、组蛋白降低至检测限以下、蛋白聚合物小于0.01%。总过程抗体蛋白收率87%。该两步法抗体纯化技术可有效集成至当前主流抗体纯化平台,具有良好的大规模应用价值。 展开更多
关键词 蛋白A 单克隆抗体 纯化 细胞回收液 酸性沉淀 宿主杂质蛋白 组蛋白 DNA
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Cisplatin combined with hyperthermia kills HepG2 cells in intraoperative blood salvage but preserves the function of erythrocytes
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作者 Jin-ting YANG Li-hui TANG +4 位作者 Yun-qing LIU Yin WANG Lie-ju WANG Feng-jiang ZHANG Min YAN 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2015年第5期395-403,共9页
The safe use of intraoperative blood salvage (IBS) in cancer surgery remains controversial. Here, we investigated the kil ing effect of cisplatin combined with hyperthermia on human hepatocarcinoma (HepG2) cel s a... The safe use of intraoperative blood salvage (IBS) in cancer surgery remains controversial. Here, we investigated the kil ing effect of cisplatin combined with hyperthermia on human hepatocarcinoma (HepG2) cel s and erythrocytes from IBS in vitro. HepG2 cel s were mixed with concentrated erythrocytes and pretreated with cisplatin (50, 100, and 200μg/ml) alone at 37 °C for 60 min and cisplatin (25, 50, 100, and 200μg/ml) combined with hyperthermia at 42 °C for 60 min. After pretreatment, the cel viability, colony formation and DNA metabolism in HepG2 and the Na+-K+-ATPase activity, 2,3-diphosphoglycerate (2,3-DPG) concentration, free hemoglobin (Hb) level, osmotic fragility, membrane phosphatidylserine externalization, and blood gas variables in erythrocytes were determined. Pretreatment with cisplatin (50, 100, and 200μg/ml) combined with hyperthermia (42 °C) for 60 min significantly decreased HepG2 cel viability, and completely inhibited colony formation and DNA metabolism when the HepG2 cel concentration was 5×104 ml?1 in the erythrocyte (P0.05). In conclusion, pre-treatment with cisplatin (50μg/ml) combined with hyperthermia (42 °C) for 60 min effectively eliminated HepG2 cel s from IBS but did not significantly affect erythrocytes in vitro. 展开更多
关键词 Erythrocytes HepG2 cel s Intraoperative blood salvage CISPLATIN HYPERTHERMIA
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