含jumonji结构域的蛋白2B和缺氧诱导因子1α在儿童非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义

目的探讨含jumonji结构域的蛋白2B(jumonji domain-containing protein 2B,JMJD2B)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-lα)在儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)组织中的表达和意义。方法应用免疫组化检测46例NHL儿童(观察组)和24例反应性增生儿童(对照组)淋巴结组织标本中JMJD2B和HIF-1α的表达,分析JMJD2B和HIF-1α与NHL患儿临床病理特征和预后的关系,以及在NHL组织中JMJD2B和HIF-1α表达的相关性。结果观察组JMJD2B(87%vs 21%)和HIF-1α(83%vs 42%)表达阳性率均高于对照组(P<0.05)。JMJD2B和HIF-1α表达与NHL患儿血清乳酸脱氢酶水平和国际预后指数危险度相关(P<0.05)。JMJD2B与HIF-1α在NHL患儿组织中的表达呈正相关(rs=0.333,P=0.024)。结论JMJD2B和HIF-1α在儿童NHL组织中表达增高,二者在儿童NHL发生发展过程中可能起协同作用;JMJD2B可作为儿童NHL辅助诊断、评估病情、指导治疗、评估预后的新指标.

微小RNA-141-3p靶向调控含CUE结构域蛋白2基因对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响

目的 探讨微小RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至2019年12月,从美国ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 雨蛙素干预处理后AR42J细胞中miR-141-3p的表达水平显著升高[(2.43±0.24)比(1.00±0.09)],CUEDC2的表达水平显著降低。miR-141-3p靶向负性调控CUEDC2表达。与转anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(136.54±14.58)ng/L比(226.48±20.54)ng/L]和IL-6[(115.89±11.65)ng/L比(193.47±18.63)ng/L]的分泌显著降低;与转染pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(158.74±15.32)ng/L比(236.87±18.66)ng/L]和IL-6[(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L]的分泌显著降低;转染si-CUEDC2可逆转转染anti-miR-141-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论 抑制miR-141-3p通过靶向CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。

贵州黑山羊细胞因子诱导的SH2包含蛋白基因5′调控区SNP研究

本试验为改善贵州本地优良品种贵州黑山羊生长性能,寻找生长相关基因细胞因子诱导的SH2(Src-homology 2)包含蛋白(cytokine inducible SH2-containing protein,CISH)启动子区多态性位点,并研究其对启动子功能元件的影响。将贵州本地优良品种贵州黑山羊构建DNA池,直接测序筛选SNP位点,生物信息学软件预测核心启动子区域、转录因子、CpG岛。结果发现,CISH基因5′调控区存在1个SNP位点为G-95C,得到CISH基因核心启动子区和CpG岛,SNP位点导致附近转录因子新位点产生和原来结合位点消失,但并不改变CpG岛大小。CISH基因5′调控区存在1个对启动子功能元件有较大影响的SNP位点,研究结果为进一步确定CISH基因启动子功能奠定基础。

含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的:探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响。方法:健康雄性SD大鼠160只被随机分为五组(对照组、模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP组),每组32只。除对照组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液)外,其余四组构建四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,并将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP及靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP自大鼠尾静脉分别注射入Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠,各组分别于造模第2、4、6、8周选取8只大鼠留取肝组织标本。采用HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用Masson三色染色检测大鼠肝组织胶原沉积;采用实时荧光定量PCR检测大鼠肝组织SHP2、ERK1 mRNA表达;采用免疫组织化学染色检测SHP2蛋白表达;采用Western blot检测ERK1和p-ERK1蛋白表达。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,在各造模时间点,与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织胶原沉积比较,Ad-SHP2组均加重,而Ad-shRNA/SHP2组均减轻。导入野生型SHP2基因后大鼠肝组织的SHP2 mRNA及蛋白表达明显升高(均P<0.05),而导入靶向SHP2的shRNA后大鼠肝组织的SHP2 mRNA及蛋白表达明显降低(均P<0.05)。在各造模时间点(第2、4、6、8周),模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠肝组织ERK1 mRNA及蛋白表达以及p-ERK1蛋白表达高于对照组(均P<0.05),但上述四组大鼠肝组织的ERK1 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05);而在各时间点与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织p-ERK1蛋白表达比较,Ad-SHP2组升高(均P<0.05),Ad-shRNA/SHP2组降低(均P<0.05),模型组与Ad-GFP组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大鼠纤维化肝组织中SHP2过表达可通过促进ERK1/2磷酸化增强ERK1/2活性,而SHP2低表达则可通过抑制ERK1/2磷酸化降低ERK1/2活性。

含溴结构域蛋白4加重高糖诱导的内皮细胞损伤机制探讨

目的 探讨含溴结构域蛋白4(BRD4)对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、高糖刺激组(HG)、BRD4沉默组(BRD4 siRNA组)、BRD4沉默的HG组(BRD4 siRNA+HG组)。采用ELISA法检测各组炎症细胞因子水平,采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用试剂盒检测各组超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性以及丙二醛(MDA)水平,采用一氧化氮(NO)检测试剂盒检测NO含量,采用免疫荧光染色检测核因子E2相关因子2(NRF2)的表达以及核转位情况。结果 对照组和BRD4 siRNA组细胞促炎症因子、ROS、MDA、NO水平、SOD2和Gpx活性、细胞活性、细胞凋亡数量、NRF2表达及核转位水平差异无统计学意义(P>0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平高于对照组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、NRF2表达以及核转位水平低于对照组,且BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平低于HG组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、细胞NRF2表达以及核转位水平高于HG组(P<0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量多于对照组,与HG组相比,BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量减少(P<0.05)。结论 BRD4通过抑制NRF2的核转位加重高糖诱导的内皮细胞损伤,BRD4可能参与糖尿病并发症的发生发展。

胃癌肿瘤相关巨噬细胞内SHP2通过抑制STAT3-TGFβ通路进而减轻PD-L1表达

目的:探究肿瘤相关巨噬细胞内含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP2)对胃癌内细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达的影响及其机制。方法:将人单核/巨噬细胞THP-1细胞、人胃癌细胞系SGC-7901细胞培养后,THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞,采用慢病毒感染的方法构建稳定敲低和过表达SHP2基因的THP-1细胞,与SGC-7901细胞非接触式共培养,将其分为对照(NC)组和SHP2-shRNA组、NC组和SHP2-mimic组、Stattic(STAT3抑制剂)+NC组和Stattic+SHP2-shRNA组。利用超速离心法提取THP-1细胞上清液外泌体,免疫印迹检测THP-1细胞中STAT3-TGFβ通路相关蛋白及外泌体CD9和TGFβ蛋白表达情况,免疫印迹检测SGC-7901细胞STAT3-TGFβ通路相关蛋白及PD-L1、p-STAT3、IL-10、PTEN和p-PI3K蛋白表达情况,CCK-8检测SGC-7901细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:THP-1细胞中,SHP2-shRNA组SHP2蛋白表达水平显著低于NC组,p-STAT3、IL-10和TGFβ及外泌体中CD9和TGFβ蛋白表达水平显著高于NC组;SHP2-mimic组SHP2蛋白表达水平显著高于NC组,p-STAT3、IL-10和TGFβ及外泌体中CD9和TGFβ蛋白表达水平显著低于NC组。共培养的SGC-7901细胞中,SHP2-shRNA组SHP2和PTEN蛋白表达水平显著低于NC组,p-STAT3、TGFβ、PD-L1和p-PI3K蛋白表达水平及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著高于NC组;Stattic干预后,SHP2蛋白表达水平未被影响,PTEN蛋白表达水平增加,p-STAT3、TGFβ、PD-L1和p-PI3K蛋白表达水平及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力降低,Stattic+NC组和Stattic+SHP2-shRNA组之间差异无统计学意义。结论:肿瘤相关巨噬细胞SHP2通过抑制胃癌细胞内STAT3-TGFβ通路活性抑制PD-L1和p-PI3K表达,进而抑制胃癌细胞增殖活性及迁移和侵袭能力,从而延缓胃癌进展。

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导中转化生长因子β1及Smad2/3的影响

背景:滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但其机制尚有待探讨。目的:观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Smad2/3表达的影响。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞;分别以空白血清对照组,左归丸、右归丸、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠),以及诱导剂组为对照共5组对骨髓间充质干细胞进行干预。采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,用免疫组化法检测转化生长因子和Smad2/3在细胞内的表达。结果与结论:左归丸、右归丸含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨后Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1、Smad2/3蛋白表达高于空白组、诱导剂组,差异有显著性意义(P<0.05),且左归丸优于右归丸(P<0.05)。提示左、右归丸含药血清能通过转化生长因子β1调节Smad2/3信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且左归丸组效果更好,表明中医"滋肾阴"法更能有效的促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型,Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达,SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD(0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD(0.23±0.01、0.27±0.01、0.30±0.01、0.33±0.01)较对照组(0.19±0.01)显著增加(P<0.05),且逐渐升高(P<0.05)。SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织中表达SHP2的活化HSC占总的活化HSC的百分比(54%±3%、62%±2%、73%±4%、86%±3%)逐渐升高(P<0.05)。结论在四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型中,肝组织及在体HSC的SHP2表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。

大鼠肝纤维化病理过程中肝组织SHP2表达与在体肝星状细胞凋亡的关系

目的探讨大鼠肝纤维化病理过程中肝组织含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达与在体肝星状细胞(HSC)凋亡的关系。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法建立大鼠肝纤维化模型,Masson三色染色及HE染色测定大鼠肝组织的病理学变化,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学及末段脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末段标记(TUNEL)双重染色测定在体活化HSC凋亡,免疫组织化学染色测定大鼠肝组织SHP2表达。结果免疫组织化学染色显示,与对照组大鼠肝组织SHP2阳性表达积分光密度值(IOD)(0.19±0.01)比较,造模不同时间(2、4、6、8周)大鼠肝组织SHP2阳性表达IOD(0.23±0.01、0.27±0.01、0.30±0.01、0.33±0.01)显著升高(P<0.05),并随着造模时间的延长逐渐增加(P<0.05)。α-SMA免疫组织化学及TUNEL双重染色检测显示,正常大鼠肝组织中几乎见不到HSC凋亡,模型组大鼠随着肝纤维化的加重,肝组织中活化HSC与凋亡HSC均增加,但造模不同时间(2、4、6、8周)大鼠肝组织中肝星状细胞的凋亡指数(47%±1%、41%±2%、35%±1%、29%±1%)却逐渐减少(P<0.05)。结论在四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化病理过程中,纤维化大鼠肝组织SHP2表达与在体HSC的凋亡呈显著负相关。

缺氧诱导因子2α对含CUB结构域蛋白1的调控及在肝癌转移中的作用

目的探讨缺氧诱导因子2α（HIF-2α）对CUB结构域蛋白1（CDCP1）的调控及其在肝癌转移中的作用。方法采用小干扰RNA（siRNA）和慢病毒转染的方法敲减和稳定过表达HIF-2α的肝癌细胞系MHCC97H，采用Western blot和实时荧光定量PCR检测CDCP1mRNA和蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测HIF-2α对细胞侵袭能力的影响，采用免疫组化染色方法检测肝癌组织标本中CDCP1的表达。结果HIF-2α和CDCP1均能在乏氧条件下被诱导，且CDCP1在乏氧条件下的活化依赖于HIF-2α的表达。在肝癌细胞中，CDCP1在转录和翻译水平均受到HIF-2α的调控，过表达HIF-2α后，CDCP1mRNA的表达水平为5．92±0．28，高于阴性对照组（1．00±0．12），差异有统计学意义（P〈0．05）：敲减HIF-2α 48h和72h后，MHCC97H细胞中CDCP1mRNA的表达水平分别为0．25±0．04和0．18±0．02，均低于对照组（分别为1．00±0．18和1．00±0．19），差异均有统计学意义（均P〈0．05）。CDCP1的表达与患者的无瘤生存有关（P〈0．05）。结论CDCP1的表达与肝癌的进展有关，CDCP1的表达受HIF-2α的调控。通过靶向抑制HIF-2α和（或）CDCP1的表达可能对肝癌转移起到一定的抑制作用。

大鼠纤维化肝组织中SHP1表达与肝星状细胞活化及增殖的关系

目的:探讨大鼠肝纤维化病理过程中肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP1)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法:随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法建立大鼠肝纤维化模型,Masson三色染色及HE染色检测大鼠肝脏组织的病理组织学变化,SHP1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP1表达,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-SMA及SHP1表达,并分别对大鼠肝组织的SHP1表达及大鼠肝组织中活化HSC的SHP1表达与大鼠肝组织的α-SMA表达进行Pearson’s相关性分析。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,随着造模时间延长,大鼠肝纤维化逐渐加重。与对照组大鼠肝组织的SHP1阳性表达平均光密度值(MOD)(0.08±0.01)比较,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP1阳性表达MOD(0.11±0.01、0.14±0.01、0.16±0.01、0.19±0.01)显著增加(P<0.05),并逐渐升高(P<0.05)。与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达MOD(0.04±0.01)比较,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达MOD(0.06±0.01、0.09±0.01、0.12±0.01、0.16±0.02)明显增加(P<0.05),并逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。SHP1与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模2周、4周、6周、8周大鼠纤维化肝组织中表达SHP1的活化HSC占总的活化HSC的百分比(26.49%±3.44%、37.14%±4.57%、44.90%±2.94%、58.09%±5.33%)逐渐升高(P<0.05)。上述大鼠纤维化肝组织的SHP1表达及大鼠纤维化肝组织中表达SHP1的活化HSC占总的活化HSC的百分比均与大鼠纤维化肝组织的α-SMA表达呈显著正相关(r值为0.926,0.984,P<0.05)。结论:在大鼠肝纤维病理过程中,肝组织及在体HSC的SHP1表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。

猪CISH基因过表达对IL-6和TNF-α基因mRNA的表达调控研究

为了分析猪细胞因子诱导的含SH2结构域蛋白(CISH)基因对白细胞介素6(IL-6)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)等基因表达的调控,深入研究CISH基因的生物学功能,试验采用猪CISH基因过表达质粒pcDNA-CISH瞬时转染PK-15细胞,利用Real-time PCR技术分析了CISH过表达对相关基因表达量的影响。结果表明:在PK-15细胞中,CISH基因过表达并没有引起TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等基因相对表达量的显著改变;细菌脂多糖(LPS)刺激PK-15细胞后,IL-6、TNF-α和TLR4等基因的相对表达量极显著上调(P<0.01);LPS刺激CISH基因过表达的PK-15细胞后,IL-6基因的相对表达量显著上调(P<0.05)。说明在LPS的刺激下,CISH过表达可以上调IL-6基因的相对表达量。

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子2对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis factor-αinduced protein 8-like 2, TIPE2)对慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)大鼠心肌细胞凋亡的作用及其对核苷酸结合寡聚化结构域2(necleotide-binding oligomerization domain containing 2, NOD2)信号通路的影响。方法 TIPE2野生型(TIPE2^(+/-))及TIPE2基因表达缺失(TIPE2^(-/-))SD大鼠分别为TIPE2^(+/-)组和TIPE2^(-/-)组各5只,均采用尾静脉注射阿霉素2 mg/kg,每周1次,连续8周制备大鼠CHF模型。造模前、注射8周时应用超声心动图测量左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension, LVEDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic dimension, LVESd)、左心室缩短分数(left ventricular fractional shortening, LVFS)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF);处死大鼠,取心脏标本行HE染色观察心肌组织病理学改变,Tunel法测定心肌细胞阳性染色面积比率及凋亡指数,Western blot法检测2组心肌组织TIPE2、NOD2、核因子-κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)蛋白相对表达量,免疫组织化学法检测心肌组织白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)阳性表达率。结果 TIPE2^(+/-)组、TIPE2^(-/-)组注射8周时LVEDd[(6.8±0.1)、(7.3±0.2)mm]、LVESd[(4.1±0.2)、(4.5±0.3)mm]均大于造模前(P<0.05),LVFS[(40.7±0.8)%、(38.2±1.6)%]、LVEF[(68.8±3.2)%、(60.5±1.6)%]均低于造模前(P<0.05);TIPE2^(-/-)组注射8周时LVEF较TIPE2^(+/-)组降低(P<0.05),LVESd、LVEDd、LVFS与TIPE2^(+/-)组比较差异均无统计学意义(P>0.05);TIPE2^(-/-)组大鼠心肌细胞HE染色示心肌纤维排列紊乱,细胞水肿、呈多灶性肌浆溶解,有不同程度炎症细胞浸润,TIPE2^(+/-)组心肌细胞水肿、炎症细胞浸润程度较TIPE2^(-/-)组轻;TIPE2^(-/-)组心肌组织阳性染色面积比率[(21.32±3.51)%]、心肌细胞凋亡指数[(45.23±6.52)%]均高于TIPE2^(+/-)组[(8.81±4.34)%、(15.41±2.12)%](P<0.05);TIPE2^(-/-)组NOD2蛋白(0.68±0.12)、NF-κB蛋白相对表达量(0.78±0.18)及IL-1β阳性表达率[(3.75±0.41)%]高于TIPE2^(+/-)组[(0.22±0.07)、(0.12±0.09)、(1.92±0.21)%](P<0.05),TIPE2相对表达量(0.02±0.01)低于TIPE2^(+/-)组(0.52±0.08)(P<0.05)。结论 TIPE2可通过抑制NOD2信号通路来抑制CHF大鼠心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用。

海蓬子皂苷甲调控SHP/STAT信号通路抗肝癌的研究

目的研究海蓬子皂苷甲(bigelovii A,BA)诱导细胞凋亡的作用及其机制。方法使用MTT实验检测BA对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析BA对细胞凋亡的影响;Western blot分析p-STAT3、STAT3、p-STAT5、STAT5、SHP-1、SHP-2的表达。结果20和40μmol·L^-1 BA可诱导HepG2细胞发生凋亡,具有剂量依赖性。10、20和40μmol·L^-1 BA可抑制IL6诱导的STAT3和STAT5磷酸化,但酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠可逆转该抑制作用,且20μmol·L^-1 BA能激活蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2。结论BA可能通过SHP-1/SHP-2和STAT3/STAT5通路诱导HepG2细胞凋亡。

饮食诱导肥胖大鼠下丘脑CIS和SOCS-3的mRNA表达

观察饮食诱导肥胖(diet-induced obese,DIO)大鼠下丘脑细胞因子诱导的含SH2区域的蛋白(cytokine in-ducible SH 2containing protein,CIS)与细胞因子信号转导抑制因子-3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS-3)mRNA表达的变化。将雄性6周龄SD大鼠,随机分为基础饮食组和高脂饮食组,饲养9周后处死。采用RT-PCR技术检测下丘脑CIS mRNA与SOCS-3 mRNA表达,结果表明高脂组大鼠下丘脑CIS mRNA、SOCS-3 mR-NA表达水平显著高于基础饮食组(P<0.05)。提示CIS、SOCS-3可能参与DIO大鼠肥胖的发病机制。

小鼠成肌细胞低氧/复氧模型的建立及验证

目的:构建体外小鼠成肌细胞间歇性低氧/复氧模型并验证。方法:设定三气培养箱的混合气中1%或4%O2含量为低氧培养条件,二氧化碳培养箱中的条件为复氧条件,将小鼠成肌细胞(C2C12)分别按不同氧浓度(1%和4%)及复氧循环周期(6 h和8 h)处理,结束后观察细胞增殖情况,测定细胞培养液中葡萄糖、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)及分泌性蛋白质分子--含Ⅲ型纤连蛋白结构域蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain containing 5, FNDC5)浓度,测定细胞低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)蛋白的表达水平。结果:(1) 1%低氧浓度组较4%低氧浓度组细胞增殖慢、FNDC5含量低,培养液中葡萄糖浓度高、LDH活性及细胞中HIF-1α蛋白表达较高(P<0.05)。(2)1%低氧浓度条件下,与循环周期6 h组相比,循环周期8 h组细胞活力显著下降(P<0.05)。结论:本研究模拟了体外小鼠成肌细胞在不同低氧/复氧条件下的损伤状况及FNDC5的差异表达,1%低氧浓度和复氧循环周期6 h可作为较佳的体外C2C12细胞实验模型建立条件。

多发性肌炎外周血白细胞中细胞因子信号转导蛋白抑制因子基因表达的初步研究

目的研究活动期多发性肌炎患者外周血白细胞细胞因子信号转导蛋白抑制因子(SOCS)1、SOCS2、SOCS3和细胞因子诱导的含SH2区域蛋白1(CIS)与正常人表达的差异,探讨SOCS在多发性肌炎发病中可能的作用。方法 2011年6月-12月,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测了14例活动期多发性肌炎患者和14例正常人外周血白细胞中SOCS1、SOCS2、SOCS3和CIS1基因的相对表达量。结果与对照组相比,多发性肌炎症患者外周血白细胞基因SOCS 1～3表达明显降低(P值均<0.05),CIS1基因的表达较对照组明显升高(P<0.05),差异有统计学意义。结论 SOCS基因家族可能参与了多发性肌炎的发病,该蛋白分子家族的成员可能会成为多发性肌炎治疗的一种新的候选基因。

PPARα在移植免疫中的作用

器官移植是治疗器官终末期疾病的主要方法,而移植排斥是移植物丧失功能的主要原因。先天性和获得性免疫均参与了移植排斥反应。长途/白细胞介素1受体结构域含适配器蛋白诱导干扰素（toll/interleukin-1receptor domain-containing adaptor-protein inducing interferon,TRIF）和髓样分化因子88（myeloid Differentiation Factor 88，MyD88）先天性免疫反应中具有重要作用，在先天性和获得性免疫中具有桥梁作用，过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator—activated receptor．PPAR）α具有抑制免疫反应和调节免疫偏移及抑制TRIF和MyD88表达的作用，因此，PPARα可能在诱导移植耐受上具有潜在的应用价值。

威宁黄牛CIS基因外显子区多态性与生长性状的关联性

为进一步了解细胞因子诱导SH2蛋白(CIS)基因的遗传变异情况和威宁黄牛选育改良的分子标记奠定基础,选择106头威宁黄牛作为研究对象,利用PCR-SSCP、DNA测序方法分析CIS基因外显子区多态性(SNP)与生长性状的关联性。结果表明:在威宁黄牛公、母畜CIS基因外显子区A4560G位点表现出AA、AG和GG基因型,该位点均与胸围有显著关联;AG杂合子的基因型频率最高,公、母畜分别为0.529 4和0.436 2;AG基因型个体的胸围均值最高,公、母畜分别为165.69cm和161.77cm。A4560G突变可能是重要的功能突变位点,CIS基因可作为威宁黄牛选种选育的候选基因。