Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白在结直肠癌中的表达意义

目的探讨结直肠癌Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(FLIP)(S)mRNA的表达水平及其临床意义。方法建立检测FLIP(S)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),用该方法检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织FLIP(S)mRNA表达水平。结果 FLIP(S)mRNA在结直肠癌组织和癌旁正常组织都有表达,在结直肠癌组织表达水平为0.23±0.19,明显高于癌旁正常组织0.13±0.10(P<0.05)。FLIP(S)mRNA表达水平与结直肠癌组织学分级密切相关(P<0.05),肿瘤分化程度越低,FLIP(S)mRNA的表达水平越高。结论 FLIP(S)在结直肠癌组织中表达升高;在分化越低组织中其表达水平越高;为揭示结直肠肿瘤的发生、发展提供新的理论依据,并为结直肠癌的有效治疗提供新的思路。

细胞内Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞内Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白(FLIP)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞凋亡的影响。方法:荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测胃癌组织及其癌旁正常组织FLIP(S)mRNA表达水平。结果:FLIP(S)mRNA在胃癌组织和癌旁正常组织都有表达,在胃癌组织表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。FLIP(S)mRNA在低分化癌组织中表达较中高分化表达高,有淋巴结转移表达高于无淋巴结转移,随着浸润深度的增加,FLIP(S)mRNA表达也增加,差异有统计学意义(P<0.05)。cFLIP的蛋白表达与胃癌细胞凋亡指数呈负相关(P<0.05)。结论:FLIP(S)在胃癌组织中表达升高,在分化越低组织中其表达水平越高,抑制胃癌癌细胞的凋亡,促进胃癌的发生,为临床治疗胃癌提供了新思路。

Fas、cFLIP及TGF-β_1在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的研究凋亡相关因子(Fas)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中的表达,以及与宫颈鳞癌临床病理和分期的关系,探讨3者在宫颈鳞癌发生、发展中的作用,同时也为寻找宫颈癌的诊断和治疗新靶点提供理论依据。方法采用免疫组织化学法检测59例宫颈鳞癌、45例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和15例正常宫颈组织中cFLIP、Fas及TGF-β_1的表达,并进行相关临床病理因素分析。结果在宫颈病变由良性到恶性的发展过程中,Fas和TGF-β_1的表达水平逐渐降低(P<0.05),cFLIP的表达水平逐渐升高(P<0.05)。在宫颈鳞癌发展过程中,Fas与cFLIP表达呈负相关(P<0.05),Fas与TGF-β_1的表达呈正相关(P<0.05)。结论Fas、TGF-β_1表达下调,以及cFLIP表达上调在宫颈鳞癌的发生、发展中发挥重要作用。

食管癌中c-FLIP蛋白的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的探讨细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)在食管癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测64份食管癌组织(观察组)和20份正常食管黏膜组织(对照组)中c-FLIP蛋白表达,并采用TNUEL法检测细胞增殖指数(K I)和凋亡指数(AI)。结果观察组c-FLIP蛋白阳性率明显高于对照组,P<0.05;c-FLIP蛋白表达与食管癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05);随c-FLIP蛋白表达强度的增加,细胞增殖指数逐渐增强、凋亡指数逐渐降低(P<0.05)。结论 c-FLIP蛋白高表达可促进食管癌的发生、发展。

KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。

c-FLIP不同单体沉默对重症急性胰腺炎大鼠中性粒细胞凋亡的影响研究

目的探讨细胞型Fas相关死亡域样白细胞介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)不同单体沉默对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠中性粒细胞凋亡的影响。方法选取50只SD雄性大鼠建立SAP模型,将造模成功的40只大鼠随机分为对照组、c-FLIP siRNA-NC组、c-FLIPS siRNA组、c-FLIPL siRNA组,每组10只;另取10只大鼠为假手术组。c-FLIP siRNA-NC组、c-FLIPS siRNA组、c-FLIPL siRNA组大鼠尾静脉注射1 nmol/ml的对应siRNA溶液,假手术组、对照组大鼠尾静脉注射等量生理盐水;转染后72 h,测定各组大鼠腹水量、血清淀粉酶及血清中性粒细胞凋亡水平,并观察胰腺组织病理变化。测定各组大鼠中性粒细胞中c-FLIPS、c-FLIPL、受体相互作用蛋白1(RIP1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)mRNA和蛋白表达水平。结果对照组、c-FLIP siRNA-NC组胰腺组织坏死严重、崩解,胰腺细胞排列紊乱,可见大量炎性细胞浸润;c-FLIPS siRNA组、c-FLIPL siRNA组胰腺细胞坏死减少,炎性细胞浸润减少,但胰腺组织疏松紊乱。与假手术组比较,对照组和c-FLIP siRNA-NC组腹水量、血清淀粉酶、中性粒细胞c-FLIPS mRNA和蛋白表达水平、c-FLIPL mRNA和蛋白表达水平升高,中性粒细胞凋亡率、RIP1 mRNA和蛋白表达水平、Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);但对照组与c-FLIP siRNA-NC组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与c-FLIP siRNA-NC组比较,c-FLIPS siRNA组和c-FLIPL siRNA组腹水量、血清淀粉酶、中性粒细胞c-FLIPS、c-FLIPL mRNA和蛋白表达水平降低,中性粒细胞凋亡率、RIP1、Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);但c-FLIPS siRNA组比较与c-FLIPL siRNA组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默c-FLIP的两种单体c-FLIPS、c-FLIPL可明显促进SAP大鼠血液中性粒细胞凋亡,且对SAP具有明显缓解作用;其机制与c-FLIPS、c-FLIPL能明显抑制SAP大鼠血液中性粒细胞c-FLIPS、c-FLIPL的mRNA和蛋白表达,促进RIP1、Caspase-8 mRNA和蛋白的表达,进而激活坏死性凋亡途径有关。

食管癌组织中c-FLIP蛋白的表达及意义

采用免疫组化SP法检测64例食管癌组织和20例正常食管黏膜组织中的c-FLIP蛋白表达,分析其与食管癌临床病理特征和预后的关系。64例食管癌标本中51例c-FLIP蛋白呈阳性表达(79.69%),明显高于正常食管膜组织(5%),两者比较P<0.01;c-FLIP蛋白表达与食管癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关。c-FLIP蛋白低表达组的3 a生存率明显高于高表达组(P<0.01)。c-FLIP蛋白在食管癌组织中表达显著高于正常食管组织,其表达与食管癌的发生、发展、预后密切相关,可作为食管癌诊断、病情评估、预后判断的指标。

胃癌组织中c-FLIP、NF-κBp65的表达变化及意义

目的探讨细胞型Fas相关的死亡区域蛋白样白介素-1转换酶抑制蛋白(c-FLIP)、细胞核因子κB(NF-κB)在胃癌发生、发展中的作用。方法选择胃癌组织标本80份(胃癌组)和癌旁组织80份(癌旁组),采用免疫组化法检测两组的c-FLIP、NF-κB p65,分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组c-FLIP、NF-κB p65阳性率明显高于癌旁组(P均<0.05);c-FLIP的表达与胃癌临床分期、分化程度、淋巴结转移、术后复发相关(P均<0.05),NF-κB p65的表达与浸润深度、分化程度、淋巴结转移、术后复发相关(P均<0.05);c-FLIP和NF-κB p65在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.303,P=0.006)。结论 c-FLIP、NF-κB p65的高表达可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。

沉默cFLIP在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

目的探讨沉默细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)对重症急性胰腺炎(SAP)导致的肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法分别取12只SD大鼠,随机分为对照组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA1组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA2组和cFLIPL(或cFLIPS)siRNA3组,筛选抑制率最高的cFLIPL siRNA和cFLIPS siRNA。50只SD大鼠随机分成假手术组、模型对照组、cFLIP siRNA-NC组、cFLIPS siRNA组、cFLIPL siRNA组,每组各10只。通过胰胆管内逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液建立SAP模型,建模成功后,cFLIPS siRNA、cFLIPL siRNA和cFLIP siRNA-NC组大鼠尾静脉注射对应siRNA溶液,其余组注射等量0.9%NaCl溶液。HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α含量;全自动分析仪检测静脉血白细胞数、中性粒细胞数;流式细胞术检测中性粒细胞凋亡;Western blotting检测中性粒细胞RIP1和caspase-8蛋白表达。结果cFLIPL siRNA2组以及cFLIPS siRNA1组干扰效率最明显,因此选择这2组进行后续实验(后续称为cFLIPL siRNA组和cFLIPL siRNA组)。与模型对照组大鼠相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组大鼠肺泡结构损伤减轻,肺泡壁变薄,炎症细胞浸润减少;与模型对照组相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显降低,静脉血白细胞数、中性粒细胞数明显降低,中性粒细胞凋亡率明显升高,cFLIPL、cFLIPS和RIP1蛋白表达量明显降低,caspase-8蛋白表达量明显升高;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究结果表明,靶向沉默cFLIP可能通过上调caspase-8和抑制RIP1的表达,促进中性粒细胞凋亡,减少炎症介质IL-6、IL-1β和TNF-α释放,抑制肺组织中的中性粒细胞浸润,缓解SAP导致的肺损伤,在SAP中发挥保护作用。

IGFBP-5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)及高危型人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR及免疫组织化学SP法检测28例正常宫颈组织、37例CIN、40例宫颈癌组织中IGFBP-5、cFLIP表达,二代杂交捕获法检测上述患者宫颈分泌物中高危型HPV DNA。结果IGFBP-5蛋白在正常组织、CIN、宫颈癌中表达差异有统计学意义(P<0.05),在CINⅡ/Ⅲ组达高峰,在宫颈浸润癌中IGFBP-5表达下降,且与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移有关。IGFBP-5 mRNA在宫颈癌中高于正常组织,但低于CIN组(P<0.05)。cFLIP蛋白及mRNA在正常组织未见表达,在CIN及宫颈癌中随病变程度加深而表达量增加,各组表达差异有统计学意义(P<0.05)。HPV阳性率在CIN及宫颈癌中高于正常组(P<0.05)。结论IGFBP-5及cFLIP与宫颈病变的发展有关,可用于判断患者病情变化及预后。

二甲双胍增强膀胱癌5637细胞对TRAIL的敏感性及其机制研究

目的探讨二甲双胍能否增强膀胱癌5637细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的敏感性及其机制。方法 MTT法检测不同浓度TRAIL(0、10、20、40、60、100 ng/mL)和二甲双胍(10 mM)联合用药对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用。Annexin V-FITC/PI双染检测二甲双胍对TRAIL诱导5637细胞凋亡的影响。Western blot检测二甲双胍和/或TRAIL干预5637细胞24小时后对caspase-8、caspase-3、PARP、DR4、DR5和c-FLIPL表达的影响。结果二甲双胍可增强TRAIL对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用,二甲双胍单独用药并未上调DR4和DR5表达,但显著下调c-FLIPL表达。结论二甲双胍显著增强膀胱癌5637细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与二甲双胍下调c-FLIPL表达有关。

DLK1及c-FLIP基因在AML中的表达

目的探讨急性髓细胞白血病(AML)患者c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因的表达水平及临床意义。方法应用逆转录-PCR半定量检测8例AML(AML组)及3例非恶性血液病患者(对照组)骨髓单个核细胞中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1 mRNA的表达水平。结果 AML组患者DLK1 mRNA、c-FLIPL mRNA、c-FLIPS mRNA表达均明显高于对照组(P<0.05),且AML各FAB亚型间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DLK1、c-FLIPL及c-FLIPS基因在AML患者中表达异常增高,可能在白血病细胞逃脱凋亡、无限增殖中发挥作用。

c-FLIP在胆囊癌和胆囊炎组织中的表达及其意义

目的研究凋亡抑制蛋白细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)在胆囊癌和胆囊炎组织中的表达差异,探讨c-FLIP在胆囊癌发生、发展中所起的作用。方法收集49例石蜡包埋的胆囊癌标本和30例慢性胆囊炎标本,用免疫组化SP法测定c-FLIP的表达,分析其表达的差异及c-FLIP表达与肿瘤分期、分化、淋巴结转移和性别的关系。结果c-FLIP在胆囊癌组织中的阳性表达率显著高于胆囊炎组织(85.71%vs26.67%,P<0.01);c-FLIP的表达与患者性别、胆囊癌的分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移之间的关联无统计学意义(P均>0.05)。结论c-FLIP过度表达可能是细胞发生恶变、对抗T细胞的杀伤作用甚至产生免疫耐受或免疫逃逸中的重要环节,在胆囊癌的发生、发展中起重要作用。

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA表达的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（system lupus erythematosus，SLE）患者外周血单个核细胞（peripheral blood monouuclear cells，PBMC）中细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）表达的意义。方法应用半定量RT—PCR方法检测38例SLE患者和21名正常人PBMC中cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA的表达水平，并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分进行相关性分析。结果①SLE患者PBMC中cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA表达水平均明显高于正常对照组（P〈0．01）；SLE患者活动组cFLIP—L mRNA表达水平显著高于非活动组（P〈0．05），cFLIP—S mRNA表达水平在SLE患者活动组与非活动组之间没有显著性差异（P〉0．05）。②SLE患者cFLIP—L mRNA表达水平与SLEDAI评分呈正相关（r=0．423，P〈0．01）；而eFLIP—S mRNA表达水平与SLEDAI评分无明显相关性（r=0．270，P〉0．05）。结论cFLIP—L mRNA和cFLIP—S mRNA可能在SLE发病机制中起重要作用。