天山雪莲细胞培养物与原药材中紫丁香苷含量的比较

目的比较天山雪莲细胞培养物与原药材中紫丁香苷含量的差异。方法建立了一种HPLC-DAD方法测定紫丁香苷的含量:色谱柱采用Agilent Zorbax SB-C18柱(4·6mm×250mm,5μm),柱温为25℃,流动相为乙腈-水(10:90),流速1·0mL·min-1,检测波长220nm。结果与天山雪莲原药材相比,细胞培养物中紫丁香苷的含量在液体培养和固体培养方式下,分别提高了20·96和55·50倍。结论利用细胞培养方式生产紫丁香苷具有良好的开发前景。

雪莲细胞培养物调血脂及抗氧化作用研究

目的:观察雪莲细胞培养物对高血脂模型大鼠的降血脂及抗氧化作用。方法:大鼠连续喂服高脂饲料12 d,造成高血脂模型,给予雪莲细胞培养物16.7、33.3、100 mg·kg-1·d-1连续45 d,测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、SOD、GSH、MDA、蛋白羰基等含量。结果:雪莲细胞培养物高、中、低剂量组均能明显降低高血脂模型大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇的含量,升高高密度脂蛋白胆固醇的含量,与模型组比较差异有统计学意义;雪莲细胞培养物高、中剂量和低剂量组可明显升高SOD含量,中、低剂量组可明显升高GSH含量,同时降低MDA含量,对蛋白羰基含量无明显影响。结论:雪莲细胞培养物具有明显的降血脂作用和一定的抗氧化作用。

大花金挖耳细胞培养物中总黄酮含量的检测

[目的]研究大花金挖耳果实和细胞培养物总黄酮含量的定性和定量测定。[方法]采用试管法和紫外分光光度法对大花金挖耳果实和细胞培养物中的黄酮进行定性鉴定;用紫外分光光度法测定总黄酮含量。[结果]试管法和紫外分光光度法检测到大花金挖耳果实细胞培养物含有黄酮;紫外分光光度法测定时,在其最大吸收峰510 nm处测得对照品在8.00～48.00μg/ml范围内线形关系良好(r=0.999 7),平均回收率为98.60%,RSD=1.12(%n=5)。[结论]所用方法简便、准确、稳定、灵敏、重现性好,可用于大花金挖耳果实和细胞培养物总黄酮含量的检测。

天山雪莲细胞培养物化学成分研究

目的研究天山雪莲细胞培养物的化学成分。方法对天山雪莲细胞培养物乙醇提取物的各个萃取部位进行反复柱色谱，根据光谱数据和理化性质确定化合物结构。结果从天山雪莲细胞培养物中分离得到5个化合物，分别为JB-谷甾醇（1）、胡萝卜苷（2）、3-羟基丁酸八聚体（3）、琥珀酸（4）、紫丁香苷（5）。结论化合物1—5均为首次在天山雪莲细胞培养物中分离得到。

支原体种属特异性PCR引物的设计及对细胞培养物支原体的检测

目的快速全面检测感染细胞、疫苗等多种生物制品中的支原体.方法从多种支原体的16SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列,作为支原体种属特异性引物,对标本进行检测.结果用这对种属特异性引物对已知阳性的50份标本进行检测,检测结果显示全部为阳性.应用于实践,检测了89份疫苗标本,阳性率为31.4%,而用常规培养法检测阳性率为12.3%.结论用该种属特异性引物检测支原体具有检测速度快、检测灵敏度高、特异性强等优点.

新疆紫草细胞培养物的化学成分研究

从新疆紫草[Arnebia euchroma(Royle)Johnst.]的细胞培养物分离到5个萘醌类化合物,据其理化性质和光谱数据,分别鉴定为去氧紫草素(deoxyshikonin,Ⅰ)、β,β-二甲基丙烯酰紫草素(β,β-dimethylacrylshikonin,Ⅱ)、乙酰紫草素(acetylshikonin,Ⅲ)、2,3-二甲基戊烯酰紫草素(teracrylshikonin,Ⅳ)和β-羟基异戊酰紫草素(β-hydroxyisovaleryl-shikonin,Ⅴ)。细胞培养物不含从新疆紫草根中分得的紫草素(shikonin);各成分在细胞培养物中的含量与在新疆紫草根中的含量有很大差异。

雪莲细胞培养物活血化瘀及抗炎作用研究

目的:观察雪莲细胞培养物的活血化瘀及抗子宫内膜异物炎症的作用。方法:以注射肾上腺素加冰浴的方法建立大鼠急性血瘀模型进行血液流变学检测(全血黏度、血浆黏度、血浆纤维蛋白原含量、红细胞压积、血小板聚集率),以子宫引入异物的方法建立大鼠子宫内膜炎症模型,观察致炎子宫肿胀程度并检测炎性介质。结果:连续给药7 d,雪莲细胞培养物低剂量组(35mg/kg)可明显降低急性血瘀模型大鼠的血浆纤维蛋白原含量,与模型组比较差异有统计学意义;雪莲细胞培养物高、中、低剂量组(140、70、35 mg/kg)可明显降低全血黏度10、全血黏度200,与模型组比较差异有统计学意义;雪莲细胞培养物高、中剂量组(140、70 mg/kg)对于大鼠子宫内膜异物的炎症有显著抑制作用,可以明显降低致炎子宫的肿胀率;雪莲细胞培养物高、中、低剂量组(140、70、35 mg/kg)可明显降低致炎大鼠血清中TNF-α含量,与模型组比较差异有统计学意义。结论:雪莲细胞培养物具有一定的活血化瘀作用,对大鼠子宫内膜炎症有一定的抑制作用。

应用SYBR Green Real Time PCR技术检测细胞培养物中支原体污染

根据常见支原体23S rRNA的保守区域基因序列,设计通用引物,应用SYBR Green Real Time PCR技术,研究建立了细胞培养物中支原体污染的快速检测方法。该方法能检测到污染细胞培养物的6种常见的支原体,敏感度达4.2×10-2pg/mL模式株的DNA。

中国红豆杉细胞培养物中两种紫杉烷的分离鉴定

从中国红豆杉细胞培养物中分离得到两个紫杉烷化合物 ,它们的结构为 1β-羟基巴卡亭 (1β-hydroxy baccatin )和云南红豆杉甲素 (yunnanxane)。

人参细胞培养物中超氧化物歧化酶的活力测定

测定了不同培养期的人参细胞培养物（ＣＭＧＣ）中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活力。实验表明：不同培养期ＣＭＧＣ中ＳＯＤ的活力不同。培养２１ｄ的样品中单位鲜重酶活力单位和蛋白质含量均为最高。

评价植物悬浮细胞培养物两项测定指标的建立(简报)

由于在细胞培养研究中缺乏一些可操作性强的且定量化的细胞状态评价指标,人们对植物细胞状态的有些性状的评价只能停留在定性描述水平,如对悬浮细胞培养物褐化程度的评价仅能作出定性判断。这里我们提出了两项悬浮细胞培养物细胞状态评价指标。

水母雪莲细胞培养物调血脂作用的初步研究

为研究水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠的调血脂作用,将雄性SD大鼠分为4组:正常对照组穴A组雪、高脂模型组穴B组雪、高剂量组穴C组雪和低剂量组穴D组雪。A组喂基础饲料,B组喂高脂饲料,C组喂高脂饲料的同时饲以大剂量水母雪莲细胞培养物,D组喂高脂饲料的同时饲以小剂量水母雪莲细胞培养物。给药1/d,3周后采血,测定血脂水平及肝肾功能。C组较B组各项血脂指标均有改善,各组间肝肾功能未见显著性差异。初步研究表明,水母雪莲细胞培养物对高脂大鼠具有调血脂的作用。本实验用药剂量安全。

中国红豆杉细胞培养物中紫杉烷的LC-ESI-MS代谢轮廓分析

目的建立小剂量生物样中紫杉烷的快速分析方法,为紫杉烷代谢特征研究提供新的分析方法和手段。方法用LCESIMS方法,先对包含了5种已知成分的紫杉烷混合溶液进行分析,以调整和优化质谱运行参数。随后正离子和负离子方式同时扫描,获得样品的总离子流图和多个色谱峰的相对分子质量信息,通过选择离子监控(SIM)对准分子离子峰进行MS/MS测定,分析化合物的结构特点和主要取代基,结合文献检索和遗传相关性分析,推测紫杉烷的结构。结果毛细管电压为25V、碰撞诱导能量为25eV时,获得较好的一级和二级质谱信号。具有多个乙酰取代基的紫杉烷在正离子扫描时,产生强的铵加合离子峰,含多个羟基的紫杉烷易产生质子加合峰。对样品中13个色谱峰进行了指认,其中8个经对照品和文献的比较可以确定其分子结构,另外5种可以推测紫杉烷母核的类型和取代基的数目和种类。结论用LCMS方法快速分析样品中紫杉烷的类型及其变化是可行的,为研究紫杉烷的代谢规律提供了有力的分析工具。

应用聚合酶链式反应检测细胞培养物和细胞培养用小牛血清支原体污染

支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种细胞系的第一次PCR扩增结果为全部为阳性,检出率为100%;11种细胞培养用小牛血清第一次PCR扩增后8种样品为阳性,对第一次PCR扩增为阴性的血清样品进行第二次PCR扩增结果全部为阳性,检出率100%。传统的支原体检测繁琐、费时、周期长而受到限制,本试验使用的套式PCR法为细胞培养工作中检测支原体污染提供了一种敏感、快速、特异的方法。

雪莲细胞培养物的质量标准研究

目的:建立雪莲细胞培养物的质量标准。方法:参照《中华人民共和国药典》2020年版附录,分别建立雪莲细胞培养物的一般检查项目及定性定量指标。以芦丁为对照品,利用紫外分光光度法建立雪莲细胞培养物总黄酮成分含量的测定方法;利用高效液相色谱(HPLC)法同时测定绿原酸、紫丁香苷和1,5-二咖啡酰奎尼酸成分含量,并建立其特征图谱,采用2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对特征图谱进行相似度分析。结果:15批次雪莲细胞培养物总黄酮类成分含量10.0%~11.0%;绿原酸含量0.86%~1.09%;紫丁香苷含量0.34%~0.48%;1,5-二咖啡酰奎尼酸含量3.20%~3.75%。15批雪莲细胞培养物指纹图谱相似度大于0.9,特征图谱中呈现10个特征峰,指认峰2为绿原酸、峰4为紫丁香苷、峰7为1,5-二咖啡酰奎尼酸。结论:本研究建立了雪莲细胞培养物的质量标准,建议醇溶性浸出物不得低于29.4%;雪莲细胞培养物中的总黄酮类成分含量不得低于10.0%,绿原酸、紫丁香苷、1,5-二咖啡酰奎尼酸的含量应分别不得低于0.86%、0.34%、3.20%,为天山雪莲药制品的工业化生产提供了参考。

大花金挖耳细胞培养物中内酯的检测(简报)

以大花金挖耳果实、幼苗和细胞培养物为材料，采用特异性呈色反应法对其内酯进行定性鉴定，紫外分光光度法测定内酯含量。结果表明，大花金挖耳果实、幼苗和细胞培养物含有内酯，天名精内酯酮和供试品在219nm处有最大吸收峰，紫外分光光度法测定内酯含量在0～124．00μg／mL内服从比耳定律（R=0．9918），平均回收率为98．98％，相对标准偏差为1．92％（n=5）。说明所用方法简便、准确、稳定，适用于大花金挖耳果实、幼苗和细胞培养物内酯的检测。

人参细胞培养物中过氧化氢酶活力的测定

测定了不同生长期的人参细胞培养物中过氧化氢酶的活力，结果表明此酶活力随人参细胞的培养时间而异。酶的单位鲜重活力从10d到21d内较快升高，在抽样测定中以21d时为最高，约为188u／mg人参细胞培养物。

红豆杉细胞培养物中紫杉醇的快速分离柱高效液相色谱法测定

目的:用快速分离柱高效液相色谱法测定红豆杉细胞培养物中的紫杉醇.方法:红豆杉细胞培养物中的紫杉醇用20%的甲醇提取,用固相萃取预分离和富集,然后以ZORBAX Stable Bound(4.6×50mm,1.8μm)C18快速分离柱为固定相,水和乙腈梯度洗脱为流动相分离,流速为2.0ml/min,用紫外二极管矩阵检测器检测.在该色谱条件下,紫杉醇在4.0min内可达到基线分离.结果:标准回收率为88%～93%,相对标准偏差为2.8%～3.4%.结论:快速分离柱高效液相色谱法是红豆杉细胞培养物中紫杉醇快速测定的可靠方法.

应用NESTED-PCR法检测细胞培养物中的支原体污染

[目的 ] 研究细胞培养物中支原体污染的快速检测方法。 [方法 ] 引物选择各型支原体 16S和 2 3SrRNA处的共同保守区域 ,应用NESTED -PCR ,检测细胞培养物中的支原体污染。 [结果 ] NESTED -PCR能检测 6种常见的污染细胞培养物的支原体 ,扩增的片段分别在 3 60～ 5 0 0bp和 15 0～ 3 0 0bp ;NESTED -PCR检测敏感性比一步法高。 [结论 ] 应用NESTED -PCR检测细胞培养物中的支原体污染 ,具有快速、特异和敏感的特点。