体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的实验研究

目的 研究体外培养条件下大鼠胰岛凋亡发生及其机制。方法 采用网状纤维染色观察大鼠胰岛分离前后网状纤维分布情况 ;Hoechst 332 5 8荧光染色法 ,透射电镜法测定培养 1,3 ,7,14,2 1d胰岛细胞凋亡率 ;放射免疫法测定胰岛素 2 4h累积分泌量 ;MTT比色法间接测定细胞存活率 ;免疫细胞化学ABC法评价Fas,Fas配体 (Fas-L)阳性蛋白表达率。结果 大鼠分离后的胰岛网状纤维消失。培养 3d后 ,电镜观察可见胰岛细胞核皱缩 ,染色质边集于核膜处等典型的凋亡表现。培养 3d ,胰岛凋亡率为 (7.6± 5 .8) % ;随培养时间延长 ,胰岛凋亡率逐渐增加 ,培养 14,2 1d ,胰岛凋亡率分别为 (6 3.0± 2 .6 ) % ,(4 7.2± 8.1) %。免疫细胞化学检测Cateninβ表达培养 7d消失 ;Fas阳性蛋白表达率从培养 3d时 (8.1± 1.8) %上调至 14d ,2 1d时 (38.5± 4.7) % ,(35 .6±6 .5 ) % ;Fas -L在培养 3d前无表达 ,培养 7d为 (6 .8± 3 .2 ) % ,14d ,2 1d显著上调 ,分别达到 (19.6± 4.8) % ,(12 .4± 7.1) %。同时 ,胰岛素 2 4h累积分泌量 ,细胞存活率逐渐下降。结论 大鼠胰岛在体外培养条件下易发生凋亡 ;Fas,Fas-L可能参与胰岛凋亡事件的发生和发展。