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沙眼衣原体DNA的荧光定量PCR检测
被引量:
3
1
作者
吴莹瑶
关琪
邵阳阳
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期486-486,共1页
关键词
荧光
定量
pcr
检测
沙眼衣原体DNA
实时
荧光
定量
pcr
实验室检测技术
核酸
扩
增
技术
生物学方法
分子生物学
免疫学方法
细胞培养
检测方法
感染诊断
技术要求
包涵体
金标准
下载PDF
职称材料
二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌感染的临床比较
被引量:
1
2
作者
董青
葛惠男
+4 位作者
杨达人
张芸燕
叶泓
孙丹娅
朱雄雄
《放射免疫学杂志》
CAS
2012年第6期677-680,共4页
目的:二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌(HP)感染的临床诊断价值,用以向临床日常实践中推荐使用。方法:117例胃炎、胃溃疡和胃癌患者胃黏膜活组织标本采用HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR进行HP检测,并比较二种检测方法的特...
目的:二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌(HP)感染的临床诊断价值,用以向临床日常实践中推荐使用。方法:117例胃炎、胃溃疡和胃癌患者胃黏膜活组织标本采用HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR进行HP检测,并比较二种检测方法的特异性、灵敏度等。同时以组织学染色和细菌培养二种"金标准"法作为比较。结果:二种"金标准"法诊断了HP感染的阳性66例,阴性51例;66例"金标准"检测法诊断HP阳性的标本中,其中有62例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阳性,60例实时荧光定量PCR检测阳性;51例"金标准"检测法诊断HP阴性的标本中,其中有49例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阴性,50例实时荧光定量PCR检测阴性,据此HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测HP的诊断敏感性为93.9%(62/66),特异性为96.1%(49/51);实时荧光定量PCR检测HP的诊断敏感性为90.9%(60/66),特异性为98.0%(50/51)。结论:HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR检测技术相当,但HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测不需要昂贵的仪器设备,结果便于阅读,操作方法简单,适宜于作为HP感染筛查的基础。
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关键词
诊断
幽门螺杆菌(HP)
恒温
扩
增
-
防污染
核酸
扩
增
试纸法
实时
荧光
定量
pcr
下载PDF
职称材料
ICC-qPCR病毒灭活验证方法的建立及其应用
被引量:
1
3
作者
魏慧慧
段晓杰
+3 位作者
张羽
王玉梅
刘万卉
徐丽明
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期398-405,共8页
目的:建立细胞培养-核酸扩增荧光定量PCR(integrated cell culture quantitative PCR,ICC-qPCR)病毒灭活验证方法;结合传统细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,考察ICC-qPCR方法的适用性;利用这2种方法验证复用电生理导管环氧乙烷...
目的:建立细胞培养-核酸扩增荧光定量PCR(integrated cell culture quantitative PCR,ICC-qPCR)病毒灭活验证方法;结合传统细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,考察ICC-qPCR方法的适用性;利用这2种方法验证复用电生理导管环氧乙烷病毒灭活工艺的有效性。方法:通过制备指示病毒(伪狂犬病毒,PRV)质粒DNA作为定量标准品,用PRV特异性引物建立定量PCR方法;再用PRV病毒侵染宿主细胞,同时用热灭活PRV作为对照,确定PRV活病毒全部进入宿主细胞但不扩增的最佳样本收获时间,通过检测细胞中活病毒,建立ICC-qPCR活病毒检测方法;确立CPE法测定滴度与ICC-qPCR法检测DNA拷贝数之间的线性关系。最后,模拟临床使用的最坏情况对一次性电生理导管进行含指示病毒(PRV)生物污染物负载,模拟环氧乙烷病毒灭活工艺,通过ICC-qPCR和CPE法验证病毒灭活工艺的有效性。结果:本研究中建立的ICC-qPCR方法的标准曲线线性关系r2>0.99;定量下限为104 copies·μL^(-1),约相当于2 logs·mL^(-1),检测下限为103copies·μL^(-1),约相当于-1 logs·mL^(-1);特异性结果表明只能检测到PRV的扩增曲线,无非特异性扩增;重复性试验的RSD<5%。确定ICC-qPCR方法中PRV最佳收获时间为宿主细胞染毒后1~2 h。ICC-qPCR检测拷贝数与病毒滴度间具有良好的线性关系(r2>0.99)。ICC-qPCR法病毒灭活工艺验证结果表明:经环氧乙烷灭活后病毒负载导管其病毒滴度降低>9.0 logs;阴性对照组(负载不含PRV生物污染物)和空白导管样品均未检出病毒DNA。CPE法的病毒滴定结果表明,经环氧乙烷灭活后病毒负载导管其病毒滴度降低≥8.5 logs·mL^(-1);阴性对照组和空白导管样品均未检出PRV。结论:本研究建立的ICC-qPCR方法应用于PRV病毒灭活验证,可以有效检测活病毒,比传统CPE法(-0.5 logs·mL^(-1))灵敏度高。将此方法应用于复用电生理导管的环氧乙烷病毒灭活工艺验证,同时与CPE法进行比较,验证了ICC-qPCR方法的适用性以及环氧乙烷灭活电生理导管负载的PRV病毒的工艺有效性。
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关键词
伪狂犬病毒(PRV)
病毒灭活验证
细胞培养
-
核酸
扩
增
荧光
定量
pcr
(
icc-qpcr
)
细胞
病变效应(CPE)
病毒滴度
DNA拷贝数
复用电生理导管
原文传递
题名
沙眼衣原体DNA的荧光定量PCR检测
被引量:
3
1
作者
吴莹瑶
关琪
邵阳阳
机构
沈阳医学院附属中心医院检验科
中山大学达安基因股份有限公司
出处
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期486-486,共1页
关键词
荧光
定量
pcr
检测
沙眼衣原体DNA
实时
荧光
定量
pcr
实验室检测技术
核酸
扩
增
技术
生物学方法
分子生物学
免疫学方法
细胞培养
检测方法
感染诊断
技术要求
包涵体
金标准
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
R375.9 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌感染的临床比较
被引量:
1
2
作者
董青
葛惠男
杨达人
张芸燕
叶泓
孙丹娅
朱雄雄
机构
江苏省苏州市中医院检验科
江苏省苏州市中医院消化内科
出处
《放射免疫学杂志》
CAS
2012年第6期677-680,共4页
文摘
目的:二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌(HP)感染的临床诊断价值,用以向临床日常实践中推荐使用。方法:117例胃炎、胃溃疡和胃癌患者胃黏膜活组织标本采用HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR进行HP检测,并比较二种检测方法的特异性、灵敏度等。同时以组织学染色和细菌培养二种"金标准"法作为比较。结果:二种"金标准"法诊断了HP感染的阳性66例,阴性51例;66例"金标准"检测法诊断HP阳性的标本中,其中有62例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阳性,60例实时荧光定量PCR检测阳性;51例"金标准"检测法诊断HP阴性的标本中,其中有49例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阴性,50例实时荧光定量PCR检测阴性,据此HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测HP的诊断敏感性为93.9%(62/66),特异性为96.1%(49/51);实时荧光定量PCR检测HP的诊断敏感性为90.9%(60/66),特异性为98.0%(50/51)。结论:HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR检测技术相当,但HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测不需要昂贵的仪器设备,结果便于阅读,操作方法简单,适宜于作为HP感染筛查的基础。
关键词
诊断
幽门螺杆菌(HP)
恒温
扩
增
-
防污染
核酸
扩
增
试纸法
实时
荧光
定量
pcr
Keywords
diagnosis
helicobacter pylori(HP)
preventing contaminating nucleic acid amplification
-
test strip
real
-
time
pcr
分类号
R573 [医药卫生—消化系统]
下载PDF
职称材料
题名
ICC-qPCR病毒灭活验证方法的建立及其应用
被引量:
1
3
作者
魏慧慧
段晓杰
张羽
王玉梅
刘万卉
徐丽明
机构
烟台大学药学院
中国食品药品检定研究院
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期398-405,共8页
基金
中国食品药品检定研究院中青年基金"ICC-qPCR病毒灭活验证方法的建立及其应用(2018C6)
国家科技重点研发计划"生物源性材料及产品的检测与评价关键技术及其标准化研究"(2016YFC1103203)
+1 种基金
中国药品监督管理研究会课题
"一次性高值耗材类医疗器械复用的风险评估策略研究"(CSDR-QXJG-2017-0006)
文摘
目的:建立细胞培养-核酸扩增荧光定量PCR(integrated cell culture quantitative PCR,ICC-qPCR)病毒灭活验证方法;结合传统细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,考察ICC-qPCR方法的适用性;利用这2种方法验证复用电生理导管环氧乙烷病毒灭活工艺的有效性。方法:通过制备指示病毒(伪狂犬病毒,PRV)质粒DNA作为定量标准品,用PRV特异性引物建立定量PCR方法;再用PRV病毒侵染宿主细胞,同时用热灭活PRV作为对照,确定PRV活病毒全部进入宿主细胞但不扩增的最佳样本收获时间,通过检测细胞中活病毒,建立ICC-qPCR活病毒检测方法;确立CPE法测定滴度与ICC-qPCR法检测DNA拷贝数之间的线性关系。最后,模拟临床使用的最坏情况对一次性电生理导管进行含指示病毒(PRV)生物污染物负载,模拟环氧乙烷病毒灭活工艺,通过ICC-qPCR和CPE法验证病毒灭活工艺的有效性。结果:本研究中建立的ICC-qPCR方法的标准曲线线性关系r2>0.99;定量下限为104 copies·μL^(-1),约相当于2 logs·mL^(-1),检测下限为103copies·μL^(-1),约相当于-1 logs·mL^(-1);特异性结果表明只能检测到PRV的扩增曲线,无非特异性扩增;重复性试验的RSD<5%。确定ICC-qPCR方法中PRV最佳收获时间为宿主细胞染毒后1~2 h。ICC-qPCR检测拷贝数与病毒滴度间具有良好的线性关系(r2>0.99)。ICC-qPCR法病毒灭活工艺验证结果表明:经环氧乙烷灭活后病毒负载导管其病毒滴度降低>9.0 logs;阴性对照组(负载不含PRV生物污染物)和空白导管样品均未检出病毒DNA。CPE法的病毒滴定结果表明,经环氧乙烷灭活后病毒负载导管其病毒滴度降低≥8.5 logs·mL^(-1);阴性对照组和空白导管样品均未检出PRV。结论:本研究建立的ICC-qPCR方法应用于PRV病毒灭活验证,可以有效检测活病毒,比传统CPE法(-0.5 logs·mL^(-1))灵敏度高。将此方法应用于复用电生理导管的环氧乙烷病毒灭活工艺验证,同时与CPE法进行比较,验证了ICC-qPCR方法的适用性以及环氧乙烷灭活电生理导管负载的PRV病毒的工艺有效性。
关键词
伪狂犬病毒(PRV)
病毒灭活验证
细胞培养
-
核酸
扩
增
荧光
定量
pcr
(
icc-qpcr
)
细胞
病变效应(CPE)
病毒滴度
DNA拷贝数
复用电生理导管
Keywords
pseudorabies virus ( PRV )
virus inactivation validation
integrated cell culture quantitative
pcr
(
icc-qpcr
)
cytopathic effect( CPE )
virus titer
DNA copies
reused catheter
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
沙眼衣原体DNA的荧光定量PCR检测
吴莹瑶
关琪
邵阳阳
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
下载PDF
职称材料
2
二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌感染的临床比较
董青
葛惠男
杨达人
张芸燕
叶泓
孙丹娅
朱雄雄
《放射免疫学杂志》
CAS
2012
1
下载PDF
职称材料
3
ICC-qPCR病毒灭活验证方法的建立及其应用
魏慧慧
段晓杰
张羽
王玉梅
刘万卉
徐丽明
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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