RNA干扰HIF-1α降低宫颈癌细胞基质金属蛋白酶-2的表达

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)是普遍存在于实体瘤组织中的缺氧应答调控因子,在维持细胞能量代谢、肿瘤血管生成及转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。本研究探讨RNA干扰HIF-1α对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在宫颈癌HeLa细胞中表达的影响,初步探讨其机理。方法:①将15只裸鼠随机分为3组,分别用HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞接种。②用免疫组化法检测各组移植瘤组织中HIF-1α、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、钙紧张素(β-catenin)和MMP-2的表达。③将HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞,HIF-1α-HeLa细胞分别在乏氧(1%O2)及常氧条件下培养48h,用Western blot检测各组细胞中HIF-1α、E-cadherin、β-catenin和MMP-2的表达。结果:①免疫组化法检测结果显示,接种HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞的裸鼠移植瘤组织中HIF-1α的表达分别为(69.0±12.1)%、(62.8±12.3)%、(17.4±8.8)%,E-cadherin的表达分别为1.00±0.07、1.00±0.10、3.21±0.25,β-catenin的表达分别为4.21±0.92、4.31±0.87、1.29±0.72,MMP-2的表达分别为4.84±0.67、4.50±0.71、1.00±0.83。②HIF-1α和MMP-2的表达呈正相关(r=0.521,P=0.035)。③Western blot分析结果显示,在抑制HIF-1α表达的HIF-1α-HeLa细胞中,乏氧与常氧条件下HIF-1α、β-catenin和MMP-2蛋白低表达,E-cadherin蛋白高表达;而在HeLa细胞和pGenesil-1-HeLa细胞中得到相反的结果。结论:在人宫颈癌HeLa细胞中干扰HIF-1α后MMP-2的表达下降。

口腔癌前沿细胞基质金属蛋白酶-2表达与颈淋巴结转移的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶_2 (MMP_2 )在口腔粘膜鳞状细胞癌中的表达特点及其与颈淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组织化学LsAB法观察MMP_2在口腔癌生长前沿区与中央区细胞中的表达分布特点 ,并分别与颈淋巴结转移发生进行统计学分析。结果 71例口腔癌原发灶均有MMP_2表达 ,在口腔癌生长前沿区细胞的表达明显强于中央区 (P <0 0 1) ,呈条带状分布 ;口腔癌前沿区细胞MMP_2表达强度与颈淋巴结转移的发生呈正相关 (P <0 0 5 ) ,而中央区MMP_2表达强度与颈淋巴结转移无关 (P >0 0 5 )。结论 口腔癌生长前沿区细胞MMP_2表达明显强于中央区 ,与颈淋巴结转移有关 ,可作为口腔癌颈淋巴结转移的预测指标。

黄芪注射液体外对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的抑制作用

目的:探讨黄芪对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的抑制作用及其调节机制。方法:以黄芪注射液刺激体外培养的SD大鼠VSMC,Zymography法检测培养细胞上清液中MMP-2的活性,Western印迹法观察MMP-2蛋白水平变化。结果:黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性,且此作用呈浓度依赖性。结论:黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性,此作用为转录后调节。

胃癌细胞基质金属蛋白酶-2、9的表达及对细胞迁移的影响

目的研究基质金属蛋白酶-2、9(matrix metalloproteinase-2、9,MMP-2、9)在胃癌细胞株HGC-27和SGC-7901的表达及对细胞迁徙转移的影响。方法采用Real-time PCR检测MMP-2、9 mRNA的含量;以ELISA检测培养上清液中MMP-2、9的相对浓度;通过明胶酶谱法测定培养上清液中的MMP-2、9比活。用Transwell小室迁徙实验、同质黏附和异质黏附实验比较两株细胞体外迁徙黏附能力。结果HGC-27中MMP-2和MMP-9 mRNA含量高于SGC-7901。HGC-27上清液MMP-2、9相对浓度均高于SGC-7901,且MMP-2比活高于SGC-7901,两株细胞MMP-9比活相近。HGC-27穿膜细胞数和异质黏附细胞数高于SGC-7901,同质黏附细胞数低于SGC-7901,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论迁徙和异质黏附能力较强、同质黏附能力较弱的胃癌细胞HGC-27的MMP-2、9表达较强,提示MMP-2、9高表达可能促进胃癌细胞迁徙转移。

水蛭素抑制人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-2的生成及活化

研究凝血酶对人脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶的影响及重组水蛭素的作用。将原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的第2-5代分组后与凝血酶(4.0 ku／L)共同温育,同时分别加入水蛭素(6.0 ku／L)和肝素(6.0 ku／L),在不同时间,用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学分析的方法评价基质金属蛋白酶-2的表达情况。结果显示凝血酶促进血管内皮细胞产生和活化基质金属蛋白酶-2。重组水蛭素可以有效地阻断凝血酶的上述作用。

辛伐他汀对巨噬细胞基质金属蛋白酶-2、9及其组织抑制物-1、2基因表达调节的研究

目的 通过实验了解辛伐他汀是否能够调节巨噬细胞基质金属蛋白酶 - 2、9(MMP - 2、MMP - 9)及其组织抑制物 - 1、2 (TIMP - 1、TIMP - 2 )的基因表达 ,以明确辛伐他汀是否能够通过影响MMPs及TIMPs表达来发挥稳定动脉粥样硬化脂斑 ,防治其破裂的功能。方法 收集小鼠腹腔巨噬细胞与不同浓度的辛伐他汀进行培养 ,采用RT -PCR方法检测细胞MMP- 2、MMP - 9、TIMP - 1、TIMP - 2的基因表达。结果 5 μmol/mL浓度的辛伐他汀可以在相当程度上抑制MMP - 9的基因表达 ,并能完全抑制MMP - 2的基因表达 ;5 0 μmol/mL和 10 0 μmol/mL浓度可以完全抑制MMP - 2、MMP - 9的基因表达。对TIMP - 1及TIMP - 2基因表达的抑制呈剂量依赖关系 ,从 5 μmol/mL、5 0 μmol/mL到 10 0 μmol/mL基因表达量逐渐下降 ,当浓度为 10 0μmol/mL时 ,TIMP - 1的表达完全被抑制。结论 辛伐他汀可以通过调节MMPs途径发挥稳定动脉粥样硬化脂斑 ,防治其破裂的功能 ,但临床用药剂量不宜过大。

血小板源性生长因子提高血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的机制

目的研究在血小板源性生长因子作用下,大鼠血管平滑肌细胞表达膜型基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制物的变化,同时探讨两者对基质金属蛋白酶-2活性的影响。方法体外培养的血管平滑肌细胞经血小板源性生长因子处理0 min、20 min和6 h后进行如下检测:利用明胶SDS-PAGE酶谱检测血管平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶-2活性;基因芯片和RT-PCR技术检测血管平滑肌细胞表达膜型基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制物的变化。结果明胶酶谱测定表明:血小板源性生长因子显著提高血管平滑肌细胞分泌的基质金属蛋白酶-2的活性;基因芯片和RT-PCR结果显示:血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞表达膜型基质金属蛋白酶有明显的诱导作用,作用20 min和6 h后的表达是对照组(0 min)的1.86倍和2.93倍(P<0.05);同样血小板源性生长因子显著增强基质金属蛋白酶组织抑制物的表达,作用20 min和6 h后的基因表达是对照组(0 min)的1.35倍和1.82倍(P<0.05)。结论血小板源性生长因子显著增强了血管平滑肌细胞对膜型基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制物的表达,同时两者的协调作用使MMP-2的活性呈明显的增加趋势。

氯沙坦对心肌成纤维细胞基质金属蛋白酶-2、JNK1/2表达及增殖活性的影响(英文)

目的:研究氯沙坦通过影响高血压大鼠心肌成纤维细胞间质成分抑制心室重构的药理机制。方法:培养心肌成纤维细胞,免疫细胞化学法鉴定细胞,MTT法测氯沙坦和AngⅡ对细胞增殖活性影响的量效关系,Western Blotting测AngⅡ刺激成纤维细胞心肌JNK1/2、磷酸化JNK1/2表达的时效关系。根据实验所得AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖活性作用的EC50值、氯沙坦抑制心肌成纤维细胞活性作用的IC50值和AngⅡ刺激JNK1/2表达的最佳时间,心肌成纤维细胞分为无血清DMEM组、AngⅡ100 nmol/L组、AngⅡ100 nmol/L+losartan 100 nmol/L组、losartan 100 nmol/L组,药物干预后分别收集各组蛋白质、培养上清液,Western blotting检测各组MMP-2、JNK1/2、磷酸化JNK1/2蛋白表达,ELISA检测分泌至培养上清液中MMP-2的量。结果:AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖活性作用的EC50为53 nmol/L,氯沙坦抑制心肌成纤维细胞增殖活性作用的EC50为56.3 nmol/L。JNK1/2蛋白表达在AngⅡ刺激2 min达高峰,随后表达逐渐降低。AngⅡ增加JNK1/2表达,氯沙坦降低AngⅡ刺激导致的JNK1/2表达。AngⅡ组MMP-2蛋白表达较无血清DMEM组明显增高,氯沙坦降低AngⅡ刺激增高的MMP-2表达。AngⅡ组MMP-2分泌较无血清DMEM组增高,氯沙坦减少AngⅡ刺激所致MMP-2分泌增高。结论:氯沙坦防治高血压引起的心室重构,可能与其对抗AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖活性、MMP-2合成、分泌有关,信号通路涉及JNK1/2。

I型单纯疱疹病毒感染对人角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2和黏着斑激酶表达的影响

背景研究表明，I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染可导致角膜上皮细胞（CECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶（FAK）对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道。目的探讨HSV-1感染对体外培养的人CECsMMP-2和FAK表达的影响。方法以HSV-1（F株）感染体外培养的人CECs，应用逆转录PCR（RT—PCR）、免疫印迹法、免疫组织化学法分别于感染后2、20、40h检测人CECsMMP-2、FAK及磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）的表达情况。结果RT．PCR法检测结果显示，感染细胞的MMP-2mRNA、FAKmRNA较非感染细胞（即加入无病毒无血清培养液的阴性对照组）的表达明显增强，不同时间点间比较差异无统计学意义，组别与时间点间不存在交互作用（MMP-2mRNA：F目目=0．968，P=0．436；F蚴I=47．649，P=0．000；F女Ⅱ#目=0．757，P=0．536．FAKmRNA：F时间=0．658，P=0．631；F组别=35．182，P=0．000；F交互作用=1．386，P=0．137）。Westernblot法检测结果显示，感染后2h时p-FAK、FAK、MMP-2在感染细胞与非感染细胞间差异均无统计学意义（P’0．05），感染后20h、40h感染细胞的蛋白表达较非感染细胞均明显增强（P〈0．05）。免疫组织化学染色检测结果显示，随着感染时间的延长，MMP-2、FAK、p-FAK蛋白染色阳性细胞数目增多。结论在HSV-1感染早期，FAK的激活可刺激MMPs活性增强，从而加速角膜溃疡及坏死性病变的形成。

RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究

本研究运用RNA干扰(RNAi)技术将内皮细胞MMP-2进行基因沉默,揭示MMP-2在内皮细胞增殖、迁移、侵袭、血管形成以及细胞周期等方面的作用。采用脂质体法将MMP-2小干扰RNA(siRNA)转化内皮细胞EAhy926,通过RT-PCR及流式细胞术分别在基因和蛋白水平验证转化的效率。应用MTT比色法测定经MMP-2 siRNA干扰不同时间EAhy926细胞的增殖能力;虎红染色测定光密度法观察干扰48小时后内皮细胞在两种趋化因子作用下的迁移及侵袭能力的变化;Matrigel胶三维培养法观察干扰48小时后内皮细胞血管形成能力的改变;流式细胞术及半定量RT-PCR法测定内皮细胞周期和相关基因的变化。结果表明:干扰因素施加后48小时MMP-2基因表达水平降低至谷底,较正常对照下降约82%;流式细胞术分析表明,干扰因素施加后60小时MMP-2蛋白表达水平降低至谷底,较对照下降约60%。MTT法检测显示干扰前后内皮细胞增殖无明显变化。内皮细胞经MMP-2 siRNA干扰48小时后在两种趋化因子作用下的迁移能力均受到抑制,且对COLⅣ的抑制作用强于Fn(Fn未干扰组0.581±0.012,干扰组0.261±0.002;COLⅣ未干扰组对干扰组为0.467±0.009vs0.110±0.010,p<0.01)。侵袭实验也有相似的结果(Fn未干扰组对干扰组为0.365±0.012vs0.101±0.002;COLⅣ未干扰组对干扰组为0.317±0.009vs0.102±0.010,p<0.01)。内皮细胞体外的血管形成能力在经siRNA干扰48小时后下降至正常的58.9%。内皮细胞经MMP-2siRNA干扰48小时及72小时后,有丝分裂后期细胞比例(G1)分别由对照组[(65.9±2.53)%;(63.2±1.89)%]上升至[(83.9±2.53)%,(89.2±1.24)%](p<0.01);DNA复制期(S)和有丝分裂前期(G2)期细胞比例分别由对照组[(32.7±1.91)%,(37.1±2.65)%]下降至[(18.1±1.49)%,(10.2±0.85)%](p<0.01)。半定量RT-PCR分析结果显示,内皮细胞Rb、cyclinD1以及PCNA基因表达量分别下降至未干扰者的35%,51%和22%。结论:MMP-2的表达与内皮细胞的增殖无明显相关性,但在内皮细胞迁移、侵袭和血管形成等方面发挥重要作用,同时还通过Rb、cyclinD1以及PCNA等基因参与内皮细胞周期的调控。

氧化修饰低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (ox L DL)和天然低密度脂蛋白 (n LDL)促血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖是否与细胞外基质(ECM)降解及粘附蛋白合成有关。方法 应用 Northern印迹和 3 H- Td R掺入的方法 ,观察两种脂蛋白对 VSMC表达基质金属蛋白酶 - 2 (MMP- 2 )和骨桥蛋白 (OPN)的影响 ,以及 ECM代谢与 VSMC增殖之间的关系。结果 1 0 μg/ml ox L DL作用于细胞 2 4 h可使 MMP- 2和 OPN基因表达活性增加 1倍左右 ;n LDL对两种基因表达的诱导作用较弱 ,高浓度的 ox LDL对 MMP- 2和 OPN表达不产生明显的影响。在一定浓度和时间范围内 ,LDL促细胞增殖作用显示量 -效与时 -效依赖关系。结论 ox LDL和 n L DL可在多位点上发挥促进

环氧合酶-2反义寡核苷酸对鳞状细胞癌Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的:研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:免疫细胞化学法检测Colo-16细胞中COX-2蛋白表达;免疫荧光显微镜观察转染情况;蛋白免疫印迹(Western blot)及半定量反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Colo-16细胞MMP-2蛋白和MMP-2mRNA表达水平。结果:Colo-16细胞中COX-2蛋白阳性表达,并分布在胞质、胞核;Colo-16细胞胞质和胞核可见荧光标记的COX-2无义寡核苷酸、反义寡核苷酸;Western blot及RT-PCR检测结果显不COX-2反义寡核苷酸作用Colo-16细胞48 h后,MMP-2表达显著下调(P<0.05)。结论:COX-2反义寡核苷酸能有效下调Colo-16细胞MMP-2表达,提示COX-2反义寡核苷酸可能通过抑制MMP-2表达来阻断皮肤鳞状细胞癌的浸润、转移。

溶血磷脂酸对人卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2、9蛋白表达的影响

目的:探讨溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对人卵巢癌细胞(3AO)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法:采用免疫细胞化学法检测常规培养的人卵巢癌细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。加入不同浓度LPA(0、0.2、2、10、20μmol/L)作用不同时间(0、2、4、6、16、24 h)后,MTT法检测LPA对人卵巢癌细胞增殖的影响。应用Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果:溶血磷脂酸能促进MMP-2蛋白表达,并呈剂量、时间依赖效应,浓度在20μmol/L作用16 h后MMP-2表达增强最为显著。LPA对细胞MMP-9的蛋白表达无显著影响。结论:LPA促进人卵巢癌细胞增殖,可能通过上调MMP的表达,促进卵巢癌细胞的转移和扩散。

前列腺素E_2对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响及其信号通路研究

目的:观察前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)活性的影响及其信号通路的研究,从而探讨PGE2对前交叉韧带(Anterior cruciate ligament,ACL)的损伤或修复可能的影响。方法:用不同浓度的PGE2处理体外培养的滑膜细胞,处理后12、24、48 h和72 h明胶酶谱法检测培养液中MMP-2的活性;再用合适浓度的PGE2单独或分别与7种信号通路特异性抑制剂同时处理滑膜细胞,明胶酶谱法检测MMP-2的活性,并对其进行相对定量。结果:PGE2呈浓度和时间依赖性地增高滑膜细胞MMP-2的活性。p38、ERK、PKA通路抑制剂SB203850、PD98059、KT5720对PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增高无明显抑制作用;而JNK、AP-1和核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)通路抑制剂SP600125、姜黄素(Curcumin)和Bay11-7082/7085显著抑制了PGE2诱导MMP-2活性的增高,分别使72 h时MMP-2的活性降至43%、25%和16%、11%(P<0.01)。结论:PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增加可能是ACL损伤后难以自行修复的原因之一。JNK、AP-1和NF-κB通路可能参与调控PGE2对MMP-2活性的诱导;其中以NF-κB作用最显著,可能为ACL损伤的治疗提供一种新思路。

灯盏花素对凝血酶诱导内皮细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨不同浓度的灯盏花素对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及活性的影响。方法体外培养HUVECs,待细胞生长到融合状态时加不同浓度的灯盏花素(17.5、35.0、70.0μg/mL),1 h后加入凝血酶(4 kU/L),作用24 h后采用明胶酶谱法检测MMP-2的活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定MMP-2 mRNA的表达。结果凝血酶可诱导HUVECs MMP-2的表达;不同浓度的灯盏花素可抑制凝血酶诱导的MMP-2的表达(P<0.01)。结论灯盏花素可抑制凝血酶诱导的HUVECs MMP-2的表达;可能对抗动脉粥样硬化,稳定硬化斑块、防治斑块破裂和预防急性冠状动脉综合征的发生产生有益的作用。

氨氯地平对巨噬细胞基质金属蛋白酶-2,9 mRNA表达及分泌的影响

目的 :观察氨氯地平对巨噬细胞基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,MMP 9)的mRNA表达及分泌影响 ,探讨氨氯地平是否具有稳定动脉粥样硬化斑块 ,减少其破裂的功能。方法 :收集小鼠腹腔巨噬细胞与不同浓度的氨氯地平进行培养 ,采用RT PCR方法检测细胞MMP 2 ,MMP 9mRNA的表达 ;用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP 2 ,MMP 9的活性 ,在蛋白分泌水平观察氨氯地平对MMP 2 ,MMP 9分泌影响。结果 :5 μg·L- 1浓度的氨氯地平对MMP 2 ,MMP 9的mRNA表达和分泌几乎没有影响 (P >0 .0 5 ) ;15 μg·L- 1浓度可以完全抑制MMP 2 ,MMP 9的mRNA表达 ,对MMP 9分泌有明显的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,对MMP 2的抑制作用较轻 (P >0 .0 5 ) ;浓度为 30 μg·L- 1时 ,完全抑制MMP 2 ,MMP 9的mRNA表达 ,对MMP 2 ,MMP 9分泌的影响由于细胞破裂的影响而不能定论。结论 :中等浓度的氨氯地平可能具有稳定动脉粥样硬化斑块 ,减少其破裂的功能。

醛固酮对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2表达及细胞增殖的影响

目的探讨醛固酮(aldosterone,ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2(matrismetallopro-teinase-2,MMP-2)表达及细胞增殖的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscriptionpoly-merasechainreaction,RT-PCR)技术,观察ALD诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK2)合成MMP-2的情况,四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT]法观察不同浓度的ALD对HK2增殖的影响。结果在无ALD刺激的情况下,HK2细胞中有基础量的MMP-2mRNA的表达,ALD以剂量和时间依赖的方式抑制HK2细胞合成MMP-2mRNA,同时ALD以剂量和时间依赖的方式促进HK2细胞的增殖。结论ALD可抑制体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达MMP-2,促进人近端肾小管上皮细胞的增殖,提示ALD可能抑制了肾小管上皮细胞细胞外基质的降解,促进了肾纤维化的进展。

表没食子儿茶素没食子酸酯对星形神经胶质瘤U87MG细胞基质金属蛋白酶-2及核因子κB活性影响研究

目的通过研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对星形神经胶质瘤(GBM)细胞系U87MG细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的抑制作用及对核因子κB(NF-κB)活性的影响,探讨EGCG对恶性胶质瘤细胞的作用机制。方法体外培养U87MG细胞,用EGCG预处理后,四氮唑盐酶还原法检测细胞的增殖及乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率;明胶酶谱实验和实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2的酶活性和m RNA表达水平;Western blot检测p65的核转位。为进一步探讨NF-κB与MMP-2基因表达的关系,U87MG细胞与EGCG孵育的同时,加入25μmol/L NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)共同孵育,RT-PCR检测其对MMP-2表达的影响。结果 EGCG与佛波酯(PMA)诱导后的U87MG细胞共孵育后,当浓度<20μmol/L时,以剂量依赖性方式降低MMP-2 m RNA及其蛋白的表达。明胶酶谱实验显示,EGCG也能以剂量依赖性方式降低MMP-2的酶活性。PMA诱导后的U87MG细胞与EGCG共孵育后,转移至核内的p65蛋白随着EGCG浓度的增加而明显减少。NF-κB特异性抑制剂PDTC能协同EGCG下调MMP-2m RNA表达。结论 EGCG通过抑制NF-κB的转位,在基因和蛋白水平抑制PMA诱导的U87MG细胞MMP-2的表达及其酶活性。

曲伏前列腺素对培养人眼睫状肌细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

【目的】研究曲伏前列腺素作用下,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在人睫状肌细胞的表达。【方法】在人睫状肌细胞无牛血清培养基中加入1μmol/L曲伏前列腺素(travoprost),根据曲伏前列腺素孵育时间的不同,分为4个时间组,即0 h组(对照组)、6 h、12 h、24 h组。Real-time PCR和ELISA法分别检测上述各时间组人睫状肌细胞MMP-2在基因和蛋白水平的表达,每种方法分别重复做3次。Zymography技术分别检测4组细胞MMP-2的活性,重复4次。【结果】设定对照组mRNA相对表达量为1做作标准,6 h、12 h、24 h组MMP-2 mRNA相对表达量为0.58±0.04、1.20±0.05、1.95±0.11,MMP-2 mRNA表达呈逐渐升高趋势(P=0.000);ELISA检测MMP-2的A值分别为0.0503±0.0021、0.0627±0.0017、0.0673±0.0025、0.0783±0.0039,MMP-2的表达随travoprost作用时间延长逐渐升高(P=0.000)。Zymography技术检测MMP-2校正光密度值分别为10±5,52±7,104±21,237±40;MMP-2活性随travoprost作用时间延长而逐渐增强(P=0.000)。【结论】曲伏前列腺素作用于人睫状肌细胞后,MMP-2表达随药物作用时间延长逐渐增加,活性逐渐增强。

紫杉醇对血管外膜成纤维细胞基质金属蛋白酶-2和α-平滑肌肌动蛋白的影响

目的研究紫杉醇(抗癌药)对成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的影响。方法选取雄性SD大鼠,用贴壁法培养胸主动脉外膜成纤维细胞(AF),用RT-PCR方法检测α-SM-actin和MMP-2。结果成纤维细胞的MMP-2的表达量,紫杉醇组较对照组也明显降低(P<0.01);α-SM-actin的表达量,紫杉醇组较对照组明显降低(P<0.05),表明紫杉醇能抑制AF的MMP-2和α-SM-actin的表达,抑制AF的表型转化,从而抑制血管外膜的迁移。结论紫杉醇可防治冠状动脉介入术后再狭窄。