白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖及基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,初步探讨Res抑制肝癌细胞侵袭转移的机制。方法:应用不同浓度的Res分别作用于人肝癌细胞系SMMC-7721细胞24、48和72 h,采用甲基噻唑基四唑比色试验(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)观察Res对SMMC-7721细胞增殖的影响;反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-9 mRNA的表达;蛋白印迹分析(Western blot analysis)法检测MMP-9蛋白表达情况。结果:Res对SMMC-7721细胞有增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;经Res作用后,SMMC-7721细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论:Res对肝癌细胞的生长具有抑制作用,且能下调其MMP-9的表达,可能具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。

氟对大鼠破骨细胞基质金属蛋白酶-9的影响

目的 观察氟对大鼠破骨细胞分泌的基质金属蛋白酶 - 9(MMP- 9)的影响。方法 采用 westernblot技术观察染氟大鼠股骨干骺端 MMP- 9的表达 ;应用免疫组织化学方法观察氟对体外培养的破骨细胞MMP- 9的表达的影响。结果 染氟大鼠股骨干骺端 MMP- 9的蛋白表达增高 ;氟可使体外培养的破骨细胞MMP- 9的蛋白表达增高。结论 氟通过提高破骨细胞的 MMP- 9的表达而致破骨性骨吸收活性增强。

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞基质金属蛋白酶-9的抑制作用

的 探讨口虾蛄提取物对CNE - 2Z细胞基质金属蛋白酶 - 9(MMP - 9)的作用。方法 采用细胞免疫化学法及明胶酶谱法检测药物对CNE - 2Z细胞MMP - 9表达及分泌的影响 ;体外侵袭试验检测药物对CNE - 2Z细胞侵袭能力的影响。结果 口虾蛄提取物能抑制CNE - 2Z细胞MMP - 9表达及分泌 ,以量效方式抑制CNE - 2Z细胞体外侵袭能力。结论 口虾蛄提取物能通过抑制MMP - 9表达及分泌而降低CNE -

氟化物对培养的破骨细胞基质金属蛋白酶-9的影响

目的 观察氟对培养的大鼠破骨细胞基质金属蛋白酶 9(Matrixmetalloproteinase 9,MMP 9)的影响。方法 机械分离新生大鼠四肢长骨的破骨细胞 ,于分离后 2h加入不同浓度的氟化物 ,应用免疫组织化学技术和原位杂交技术检测氟化物干预下培养的破骨细胞MMP 9的蛋白质和mRNA的表达。结果 随着染氟剂量的增加 ,破骨细胞内MMP 9的蛋白质表达增高 ,以 2 0 ,4 0mg/LF 组最为显著 ,同时破骨细胞内MMP 9mRNA表达亦增加 ,1 0 ,2 0 ,4 0mg/LF 组与对照组比较差异有显著性。结论 氟通过提高MMP 9的蛋白质和mRNA表达 。

氧化低密度脂蛋白增加巨噬细胞基质金属蛋白酶-9和-12的表达

为探讨巨噬细胞在动脉粥样斑块不稳定性中的作用机制 ,观察致动脉粥样硬化的主要炎性因子 氧化低密度脂蛋白 (oxLDL) ,对巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP 9和MMP 12表达和分泌的影响。在体外分离培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,以不同浓度低密度脂蛋白 (LDL)、氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)作用细胞 ;作用 6h后用RT PCR检测MMP 9,MMP 12mRNA表达 ,作用 2 4h后用Westernblot和 β 酪蛋白酶谱法检测MMP 9,MMP 12酶蛋白的分泌及活性。ox LDL增强巨噬细胞MMP 9,MMP 12mRNA表达和酶蛋白的分泌及活性 ,对MMP 12的诱导作用更为显著且呈浓度依赖性。表明oxLDL可能通过同时上调巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP 9和MMP

黄芪总提物对体外脂多糖刺激的枯否细胞基质金属蛋白酶-9活性的影响

目的 :研究黄芪总提物 (totalextractionofAs tragalus,TEA)对体外脂多糖 (LPS)刺激的枯否细胞(KC)基质金属蛋白酶 9(MMP 9)活性的影响。方法 :采用IV型胶原酶灌流分离大鼠肝枯否细胞进行原代培养 ,用LPS刺激枯否细胞并收集上清液 ,酶谱法观察TEA对肝枯否细胞产生MMP 9的影响。结果 :TEA (5～ 40mg·L- 1 )对LPS(1 μg·ml- 1 )刺激的大鼠肝KC细胞MMP 9活性有明显的抑制作用。结论 :TEA对体外激活的肝枯否细胞产生MMP 9有明显的抑制作用 。

新生隐球菌培养上清液对大鼠脑微血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9和微管相关蛋白的增强作用

目的:观察深部致病性真菌新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶对脑微血管内皮细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9、微管相关蛋白(Tau-LRP)表达的影响以及抑肽酶的干预作用。方法:在含有成熟的脑微血管内皮细胞的培养皿中,分别加入胞外蛋白水解酶相关成分及其特异性抑制剂后,应用免疫组化技术检测内皮细胞中MMP-9、Tau-LRP表达的变化。结果:加入新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶和(或)丝氨酸蛋白酶后内皮细胞的MMP-9、Tau-LRP表达均升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);抑制剂组的MMP-9、Tau-LRP与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶通过上调MMP-9和(或)Tau-LRP表达,诱导微血管内皮细胞基质降解和细胞自身微管结构及紧密连接发生变化,可能是最终导致血脑屏障通透性增加的原因之一。

白介素-1和血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 :观察白介素 1和血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶 9(MMP 9)表达的影响及其作用机制。方法 :用酶谱分析法检测MMP 9蛋白水平 ,采用电泳迁移率变动分析法测转录因子AP 1结合活性 ,用RT PCR法检测MMP 9的mRNA水平。结果 :白介素 1(2 0ng/ml)和血小板源性生长因子 (2 0ng/ml)联合使用显著增加MMP 9蛋白表达 ,提高AP 1结合活性 ,使MMP 9的mRNA水平明显增高。结论 :白介素 1和血小板源性生长因子联合使用可刺激MMP

沙库巴曲缬沙坦钠抑制血管紧张素Ⅱ诱导THP-1巨噬细胞基质金属蛋白酶-9的表达

目的探讨沙库巴曲缬沙坦钠(LCZ696)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导(THP)-1巨噬细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的机制。方法0.1μmol/L佛波酯(PMA)加至THP-1单核细胞48 h,将其诱导分化为THP-1巨噬细胞,随机分为4组:①PMA组,即对照组;②PMA+AngⅡ组(100μmol/L,1 h);③PMA+AngⅡ+LCZ696组(10μmol/L,1 h);④PMA+AngⅡ+二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)组(100μmol/L,1 h)。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MMP-9 mRNA的变化,用蛋白质印迹法检测胞质MMP-9蛋白的表达。结果与对照组相比,AngⅡ诱导的THP-1巨噬细胞MMP-9 mRNA表达上调(P<0.05),MMP-9蛋白量也增加(P<0.05),而使用LCZ696及PDTC后显著抑制MMP-9 mRNA的转录(P<0.05),MMP-9蛋白量也减少(P<0.05)。结论沙库巴曲缬沙坦钠可能通过核因子(NF)-κB信号途径抑制THP-1巨噬细胞MMP-9的表达。

氟伐他汀钠对舌鳞癌Tca8113细胞基质金属蛋白酶-9表达影响的研究

目的:探讨氟伐他汀钠对舌鳞状细胞Tca8113细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:不同浓度氟伐他汀钠干预细胞24 h,用荧光免疫组织化学法、Western Blot检测细胞MMP-9蛋白表达,对数据进行统计学分析。结果:实验组细胞较对照组细胞中的MMP-9表达明显减少(P<0.05),各实验组间随着药物浓度增加蛋白表达递减。2种试验方法结果一致。结论:氟伐他汀钠可以抑制舌鳞状细胞癌细胞中MMP-9蛋白表达,且为浓度依赖性。

葛根素对溶血磷脂酰胆碱诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察葛根素对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨葛根素抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:用不同浓度(1.0～10.0mg/L)的溶血磷脂酰胆碱(LPC)孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞24h,观察培养上清液中MMP-9含量的变化。不同浓度(10-6～10-4mol/L)的葛根素预先孵育平滑肌细胞4h,然后加入LPC(5.0mg/L)作用24h,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中MMP-9含量,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测平滑肌细胞MMP-9 mRNA的表达,蛋白印迹法(Western blot)检测NF-κB p65蛋白的表达。结果:LPC能明显增加上清液中MMP-9的含量,而预先应用不同浓度的葛根素干预后,MMP-9含量、mRNA表达以及NF-κB p65蛋白的表达水平均明显降低,并且具有剂量依赖性。结论:LPC通过激活NF-κB p65而使平滑肌细胞MMP-9表达增强,而葛根素对上述效应具有抑制作用。

血管紧张素-(1～7)对单核/巨噬细胞基质金属蛋白酶-9与CD40/CD40L的抑制作用

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种严重威胁人类身体健康的常见病、多发病，是冠心病的主要原因。越来越多的研究提示AS是一个血管受损伤后的炎症反应过程，血管壁的慢性炎症是AS的特征。基质金属蛋白酶（MMPs）是一种依赖Zn^2＋和Ca^2＋的酶家族，能特异性地与细胞外基质各成分相结合，并降解胞外基质。近年来的研究发现．不稳定斑块，

载脂蛋白E对脾脏淋巴细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的探究载脂蛋白E(Apo E)对髓鞘抗原刺激的小鼠脾脏淋巴细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55(MOG35-55)作为抗原诱导免疫Apo E基因缺失型(Apo E-/-)和野生型(WT)型的C57BL/6J小鼠,免疫后第7天取小鼠脾脏,分离并体外培养淋巴细胞,随机分为4组,即Apo E-/-实验组(E-Apo E-/-)、WT实验组(E-WT)、Apo E-/-对照组(C-Apo E-/-)、WT对照组(C-WT)。予以MOG35-55刺激E-Apo E-/-组和E-WT组淋巴细胞,C-Apo E-/-组和C-WT组给予等量生理盐水作为对照处理,24 h后离心并收集上清。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的浓度。结果 (1)小鼠被诱导免疫后,Apo E-/-小鼠和WT小鼠脾脏淋巴细胞均能分泌TNF-α、IL-17、MMP-9,Apo E-/-小鼠脾脏淋巴细胞分泌的量较多,差异有统计学意义(P<0.05);(2)体外用MOG35-55刺激脾脏淋巴细胞后,E-Apo E-/-组和E-WT组淋巴细胞TNF-α、IL-17、MMP-9的浓度明显升高,且E-Apo E-/-组较E-WT组更显著,差异有统计学意义(P<0.05);(3)各组小鼠脾脏淋巴细胞分泌TIMP-1的量未见明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Apo E可以调节脾脏淋巴细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-17和基质金属蛋白酶MMP-9,进而可能影响血脑屏障的完整性。

密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响

目的:探讨白细胞介素-1(IL-1)诱导的破骨细胞性骨吸收过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA 的表达及补肾中药密骨片的调控作用。方法:从出生24 h 的乳鼠长骨中分离破骨细胞,从1月龄大鼠长骨中分离骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和骨髓基质细胞、破骨细胞培养系。在重组 IL-1α(rhIL-α)作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养20 h,计数骨吸收陷窝数及测算陷窝面积;并采用原位杂交技术研究破骨细胞 MMP-9 mRNA 的表达。结果:在基质细胞存在的条件下,IL-1可使骨吸收活性提高2～4倍,MMP-9 mRNA 呈高表达;而用密骨片药液处理后,MMP-9 mRNA 表达下降,作用呈量效关系。结论:密骨片可对抗 IL-1对基质细胞的影响,抑制破骨细胞重要的蛋白分解酶 MMP-9的表达而减少骨吸收。

姜黄素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定。加入不同浓度的姜黄素处理细胞24h。采用免疫细胞化学染色法和ELISA法测定细胞MMP-9的表达。结果不同浓度的姜黄素(6.25,12.5,25,50,100μg/mL)作用人脐静脉内皮细胞24h后均能明显抑制细胞MMP-9的表达,并且随着浓度的升高抑制作用明显增强。结论姜黄素能明显降低人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达。

EGCG对结肠癌HT-29细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法应用RT-PCR法和Western blot法检测EGCG干预前后HT-29结肠癌细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白表达。结果EGCG25、50、100μg/ml作用于结肠癌细胞株HT-2948h后,MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达量随着EGCG浓度的增加而下降,结果有统计学差异(P<0.05)。结论EGCG可显著抑制HT-29细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达,呈剂量依赖性。

苯扎贝特对脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响及机制

目的观察苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白所诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响及是否与血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达相关。方法体外培养人脐静脉内皮细胞，逆转录聚合酶链反应检测MMP-9和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达。结果与对照组（0．151±0．004、0．562±0．021）比较，氧化型低密度脂蛋白组LOX-1 mRNA（0．943±0．003）、MMP-9 mRNA（1．020±0．039）表达均明显增加（P〈0．05）；与氧化型低密度脂蛋白组比较，苯扎贝特组和多聚肌甘酸（血凝素氧化型低密度脂蛋白受体1阻滞剂）组血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA（0．258±0．002、0．463±0．007）、MMP-9 mRNA（0．894±0．041、0．872±0．046）表达均减少（P〈0．05）；与苯扎贝特组比较，苯扎贝特组加多聚肌甘酸组血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA（0．144±0．003）、MMP-9 mRNA（0．541±0．030）表达均明显减少（P〈0．05）。结论血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1可能参与苯扎贝特下调内皮细胞MMP-9基因的表达。

血凝素样氧化低密度脂蛋白对单核巨噬细胞源泡沫细胞基质金属蛋白酶-9的调控作用

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人单核巨噬细胞源泡沫细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和活性的影响,以及此过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的调控作用。方法体外原代培养人单核细胞来源的巨噬细胞,传至2～6代用于实验。依不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用24h,以及ox-LDL40mg/L作用1、12、24h分组,另设LOX-1受体阻断剂多聚肌苷酸(PolyI)干预组。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定LOX-1和MMP-9mRNA表达,酶谱法分析MMP-9的活性。结果 ox-LDL作用后,LOX-1和MMP-9mRNA表达升高,MMP-9的分泌及活性升高(P<0.05),且诱导作用呈浓度-时间依赖性;多聚肌苷酸抑制后,MMP-9mRNA表达及活性明显下降(P<0.05)。结论 LOX-1作为ox-LDL的特异性受体,介导ox-LDL诱导的上调单核巨噬细胞LOX-1、MMP-9表达及活性的作用。

急性冠状动脉综合征患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶-9活性水平的观察

目的检测急性冠状动脉综合征（ACS）患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活性水平并探讨其意义。方法选取35例ACS患者和选10例经冠状动脉造影证实无冠状动脉病变患者（对照组），分离其外周血单个核细胞，酶谱法检测MMP-9活性。结果与对照组比较，ACS患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶-9活性显著增强（P〈0．01）。结论ACS患者循环中单个核细胞MMP-9活性显著增高，可能在不稳定斑块的发生和发展中起着重要作用。