CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性之最佳测试条件研究

目的研究CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞(RFFBs)增殖活性的最佳测试条件。方法以兔筋膜作为成纤维细胞原代培养组织,利用传代至P3的成纤维细胞,对比CCK-8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异,研究CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性的最佳检测时间及最佳检测波长。结果 CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性的最佳检测时间为加入CCK-8试剂孵育后的4 h,最佳检测波长为450 nm。结论 CCK-8法在孵育4 h后及酶标仪450 nm波长下检测兔筋膜成纤维细胞的灵敏度最高。

MTT法和CCK-8法检测细胞活性之测试条件比较

利用HL60作为研究对象,对比了MTT法和CCK-8法在最佳检测时刻和检测波长等参数的差异。对于CCK-8法,最佳测试时刻在细胞液培养4 h后,最佳测试波长为490 nm。实验结果表明用CCK-8法检测的OD值与活细胞数的线性相关度要优于MTT法,是一种灵敏度较高、重复性好的的细胞活性检测方法。

CCK-8和MTS法检测人羊膜上皮细胞增殖的比较

目的探讨CCK-8、MTS两种不同的四唑盐试剂在羊膜上皮细胞增殖检测中的最适实验条件,并比较两者细胞毒性。方法取体外培养对数生长期羊膜上皮细胞,用完全培养基（DMEM/F12＋10%胎牛血清）配制成不同浓度的细胞悬液加入96孔板中培养24 h,分别加入CCK-8、MTS后于450 nm、492 nm波长处测定光密度（OD）。在同一细胞浓度下,根据同一波长不同时间检测的OD确定CCK-8的最佳孵育时间。取体外培养的对数生长期羊膜上皮细胞分别用DMSO、CCK-8、MTS处理1 h、2 h、3 h和4 h后,继续培养24 h,在450 nm处以CCK-8检测细胞增殖,并通过台盼蓝染色计数活细胞数。结果 CCK-8法的最佳波长为450 nm,MTS法的最佳波长为492 nm。CCK-8法灵敏度稍低于MTS法。1~4 h内,CCK-8试剂与待检测细胞最佳孵育时间为4 h。CCK-8法对细胞增殖影响及细胞毒性均小于MTS法。结论 CCK-8法是一种更为方便、细胞毒性作用较小的试剂。

CCK-8法与MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的比较研究

目的探讨CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。方法以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,采用CCK-8和MTT法检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞增殖的影响。结果 CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102～1×105个。结论 CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中最佳实验条件的筛选

目的筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的刺激指数进行方差分析。结果 CCK-8检测人PBMC增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为2.5×10~6/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h;检测小鼠脾细胞增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为5.0×10~6/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h。结论 CCK-8法便捷、灵敏、重复性好,可作为检测淋巴细胞增殖的稳定方法。本研究建立的CCK-8最佳实验条件可为免疫调节作用的药物体外筛选和免疫药理学作用的研究提供依据。

CCK-8法检测疟原虫HGXPRT蛋白刺激对淋巴细胞的增殖作用

目的检测疟原虫HGXPRT蛋白刺激淋巴细胞的增殖效果。方法以HGXPRT蛋白免疫小鼠后制备淋巴细胞,与相应刺激物共同培养后采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果不同浓度的HGXPRT对淋巴细胞的刺激效果不同,以5μg/ml时刺激增殖效果最好。结论HGXPRT对淋巴细胞具有增殖作用。

CCK-8法与MTT法检测兔成纤维细胞活性的比较研究

目的:探讨CCK-8法和MTT法检测兔成纤维细胞活性的最佳实验条件,并比较其优略。方法:以传至第3代的兔成纤维细胞为研究对象,分别用CCK-8法和MTT法检测兔成纤维细胞的增殖活性。结果:MTT法的最佳检测波长490nm,CCK-8法最佳检测波长为450nm,两法的最佳检测时间均为加入试剂后4h。适宜检测的细胞数量范围为2×103/ml～1×105/ml个。结论:CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测兔成纤维细胞增殖活性的方法。

细胞增殖检测(CCK-8检测法)最佳实验条件的确定

在培养基的研发及生产中,促细胞增殖的能力是鉴定培养基质量优劣的一项重要指标,其检测方法也是至关重要的。近年来,各研究院和生物实验室普遍采用快速细胞增殖检测的方法,如CCK-8染色法。本文通过一系列实验分析影响细胞增殖检测结果的因素,以及这些因素的影响范围,从而确定最佳的实验条件。

CCK-8法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比较研究

以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,探讨了CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。CCK-8的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102-1×105个。在检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞的增殖影响实验中,发现CCK-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小。实验结果表明CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

CCK-8法检测药物影响肿瘤细胞增殖的优化研究

目的通过优化CCK-8的实验条件,提高检测药物影响肿瘤细胞增殖的敏感性和可靠性。方法以人肺癌A549细胞和白血病Molt-4细胞为研究对象,CCK-8法和MTT法分别检测细胞增殖的变化,并与Coulter细胞计数法和克隆形成率法进行比较。结果在相同的细胞数下,CCK-8法的检测灵敏度明显高于MTT法。以细胞密度1 000个/孔接种,抗肿瘤药物多柔比星处理96 h后,CCK-8法检测到的变化与克隆形成率法相当。分析Molt-4悬浮细胞发现:CCK-8法与Coulter细胞计数法的检测灵敏度无明显差异(P>0.05)。结论优化实验条件后,CCK-8法是一种灵敏度高、可靠性良好的细胞增殖检测方法。

噻唑兰法和CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖反应的比较

目的：比较噻唑兰（MTT）法和CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖反应的最佳实验条件,并比较两种不同检测方法的灵敏度.方法：分离小鼠脾脏淋巴细胞,分别比较不同培养时间（69、70、71、72、73 h）、不同反应剂量（5、10、15、20、25 μl）、不同细胞数量（0、2.5×10^4、5×10^4、10×10^4、20×10^4）反应体系的MTT法和CCK-8法的吸光度值.结果：对于2×105的反应体系,MTT法的最佳培养时间为71 h,最佳反应剂量为15 μl.而CCK-8法的最佳培养时间为72 h,最佳反应剂量为10 μl.同时,通过对比两种不同检测方法对于相同细胞数量培养体系的吸光度值发现,CCK-8法的灵敏度要高于MTT法.结论：CCK-8法是一种较MTT法更优的检测小鼠淋巴细胞增殖反应的实验方法.

人肝癌细胞培养中CCK-8法与BrdU-ELISA法检测细胞增殖的比较

目的比较CCK-8法与BrdU-ELISA法检测人肝癌HepG2细胞增殖的可靠性。方法待细胞贴壁生长融合度分别达60%及80%时,以10-7mol/L浓度AngⅡ刺激细胞增殖,24小时后分别用CCK-8法和BrdU-ELISA法,以及免疫荧光方法检测细胞增殖情况。结果细胞60%汇合时CCK-8检测组和BrdU-ELISA检测组与各自的对照组比较,比值分别为1.30和1.59,检测值近似;细胞80%汇合时二者分别为1.02和1.40,免疫荧光结果显示AngⅡ刺激组的增殖细胞明显高于对照组。结论与CCK-8法相比,BrdU-ELISA更能客观地反映细胞增殖情况。

MTT法与CCK-8法检测兔视网膜色素上皮细胞活性的比较研究

目的:探讨MTT法和CCK-8法对细胞活性检测的最佳实验条件,并比较二者的优缺点。方法:取传至第5代的兔视网膜色素上皮细胞为研究对象,分别用MTT试剂和CCK-8试剂检测兔视网膜色素上皮细胞的增殖情况。结果:MTT法最佳检测波长为570nm,最佳检测时间在加入试剂后4h,细胞数量在1.25×103~2×104之间检测较好;CCK-8法最佳检测波长在450nm,最佳检测时间在加入试剂4~6h,适宜的细胞检测范围为1.25×103~1×104。结论:MTT法较CCK-8法细胞检测范围更广,孵育时间更短,是一种优于CCK-8法的细胞活性检测方法。

MTS和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖的比较

为探讨MTS法和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖的最佳试验条件,以12~13日胚龄番鸭鸭胚作为胚胎成纤维细胞原代培养的细胞来源,利用传至F2代的胚胎成纤维细胞为研究对象,对比MTS法和CCK-8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异,研究MTS法和CCK-8法检测番鸭胚胎成纤维细胞增殖活性的最佳检测时间、最佳检测波长,根据细胞数量与OD值的关系曲线确定两种试剂各自的最适细胞浓度。结果表明：MTS法的最佳波长为492 nm、CCK-8法为450 nm,MTS法的灵敏度稍高于CCK-8法;两种方法的最佳检测时间均为加入试剂后4 h;MTS法的最适细胞接种浓度为1.25×103~1×104个/mL,CCK-8法为2.5×103~1×104个/mL。MTS和CCK-8法均能较好地检测番鸭F2代胚胎成纤维细胞的体外增殖情况,相对于CCK-8法,MTS法更加经济,灵敏度更高。

应用CCK8法检测鸡淋巴细胞活性的检测最佳条件研究

为了研究应用CCK-8法检测鸡淋巴细胞增殖的体外培养最佳条件,试验设置了不同种板细胞数、血清浓度、培养时间、孵育时间和检测波长等条件对其进行比较研究。结果表明:1 750 r/min转速的改良鸡外周血淋巴细胞分离方法效果最佳;在体外增殖培养试验中,CCK-8加样4 h后在450 nm波长处检测OD值最理想,培养时间以44 h为最佳;在细胞数量一致的情况下,胎牛血清浓度为5%或者为10%差异不显著(P>0.05)。当细胞悬液浓度为1×10~6个/m L时,加入100,50,25,12.5μL不同细胞数,4组间比较均差异显著(P<0.05),并且随着细胞悬液浓度的增加OD值增加;最佳铺板细胞的细胞悬液浓度为2.0×10~6~3.0×10~6个/m L,取50~100μL为宜,即最佳细胞铺板数量控制在每孔1.5×10~5~2.0×10~5个/100μL。说明应用CCK-8法检测鸡外周血淋巴细胞活性的最佳条件除种板细胞数不同外,在检测波长、血清浓度、加样后孵化时间等方面与其他动物试验差别不大。

下调T细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)促进T细胞增殖并增强其免疫活性

目的利用RNA干扰技术沉默小鼠脾脏T淋巴细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)基因表达,观察TIPE2基因沉默对T淋巴细胞增殖及免疫活性的影响。方法磁珠分选T739小鼠脾脏T细胞,采用Western blot法筛选能有效沉默T淋巴细胞TIPE2基因的小干扰RNA(siRNA)序列。采用TIPE2特异性siRNA、阴性对照siRNA转染T细胞,在转染24 h后,流式细胞术检测T细胞表面CD69水平;转染72 h后,CCK-8法检测转染T淋巴细胞增殖情况,同时,ELISA检测转染T细胞上清液中白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)分泌水平。结果成功筛选出特异性沉默TIPE2水平的siRNA序列,下调TIPE2基因表达后,T细胞CD69水平增加;T淋巴细胞增殖能力显著增强,IL-2和IFN-γ水平增加。结论下调TIPE2基因水平,促进T淋巴细胞增殖和免疫活性。

雄黄溶液对Hela和Caski宫颈癌细胞增殖抑制作用的研究

宫颈癌是一种高发病率和高死亡率的女性恶性肿瘤。雄黄,一种传统的中草药成分,近年来由于其潜在的抗肿瘤活性受到关注。本研究旨在探究雄黄溶液对宫颈癌细胞株Hela和Caski的抑制作用。通过制备不同浓度的雄黄溶液,对两种细胞株进行处理,并使用CCK-8检测细胞活力。结果显示,随着雄黄浓度的增加,Hela细胞的增殖抑制率逐渐上升。这为雄黄在宫颈癌治疗中的潜在应用提供了初步的实验依据。

IRF8基因降表达、PINK1基因过表达对肺泡巨噬细胞NR8383增殖与活性的影响

目的观察干扰素调节因子8(IRF8)基因降表达、PTEN诱导激酶1(PINK1)基因过表达对肺泡巨噬细胞NR8383增殖与活性的影响,探讨IRF8与PINK1基因在该细胞增殖与活性中的作用。方法取对数生长期的小鼠肺泡巨噬细胞NR8383,随机分为7组。IRF8对照组、PINK1对照组分别转染IRF8干扰空质粒、PINK1过表达空质粒,联合对照组共转染用量减半的上述两种质粒;IRF8干扰组、PINK1过表达组分别转染IRF8干扰质粒pG2.2-IRF8-Rat-444、PINK1过表达质粒pCMV3-Rat-PINK1,联合干扰组共转染用量减半的上述两种质粒;正常对照组不做任何处理。转染48 h后收集细胞,采用CCK8法检测细胞增殖的OD值,LDH法检测细胞活性,采用Western blotting法检测细胞中的IRF8、PINK1蛋白。结果与联合对照组、PINK1对照组、IRF8对照组、正常对照组比较,IRF干扰组与PINK1过表达组均IRF8蛋白表达降低而PINK1蛋白表达升高,细胞增殖及细胞活性均降低(P均<0.05);与IRF干扰组、PINK1过表达组比较,联合干扰组IRF8蛋白表达降低而PINK1蛋白表达升高(P均<0.05),细胞增殖及细胞活性均降低,但仅细胞活性差异有统计学意义(P均<0.05)。结论IRF8基因降表达、PINK1基因过表达均可明显抑制肺泡巨噬细胞NR8383增殖及细胞活性,且具有协同作用。

小鼠脾T淋巴细胞增殖实验条件优化

目的探讨刀豆球蛋白A刺激小鼠脾T淋巴细胞增殖的最佳浓度与最佳作用时间。方法以小鼠脾T淋巴细胞与刀豆球蛋白A共同培养后,采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果不同浓度的刀豆球蛋白A对小鼠脾T淋巴细胞的刺激效果不同,在作用后48和72 h检测,10~25μg/mL浓度范围内增殖最为明显。结论刀豆球蛋白A对小鼠脾T淋巴细胞的增殖具有双重作用,推荐浓度为10~25μg/mL,检测时间为48~72 h。

细胞增殖的检测方法

近年来,细胞增殖一直是生物医学领域各专业的研究热点,细胞增殖检测技术种类繁多却并不完善,本文就细胞增殖的特征以及常用的细胞增殖的各种检测方法的优缺点作一综述。