WARS1通过免疫相关基因STAT1调控卵巢癌细胞增殖与侵袭的作用机制研究

分析WARS1通过免疫相关基因STAT1调控在卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)当中的增殖与侵袭的作用机制。方法 将上海市奉贤区中心医院、江苏省常州市妇幼保健院以及金华市妇幼保健院在2012-2017年收治的174例患者,共收集108例浆液性卵巢癌样本。按照WARS1的表达情况分为高表达组与低表达组,分析不同组别在分类、年龄、病理级别、淋巴结转移以及临床分期上存在的差异。使用RT-PCR及WB技术在mRNA及蛋白水平检测上皮性卵巢癌性葆艾CAOV3、OV429、OVCAR3、OVCAR5、OVCAR8、A2780、SKOV3及ES2中的WARS1表达情况,选择表达量较高的细胞株进行稳转敲低,表达量较低的细胞株进行稳转过表达,对稳转敲低及过表达的效率进行验证。将干扰效率最佳的siRNA对上皮性卵巢细胞癌进行干扰,鉴定敲低及过表达的WARS1细胞功能,使用CCK及克隆实验检测其中的细胞增殖能力,使用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,使用Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。借助TGGA数据库对基因集进行富集分析,明确WARS在卵巢癌生物学功能影响的分子机制。结果 分类、浆液性卵巢癌淋巴结转移、浆液性卵巢癌临床分期与其密切相关(P<0.05);通过CCK-8试验进行稳转敲低之后,增殖能力有明显的降低,经过克隆形成实验的稳转敲低之后,卵巢癌细胞增殖能力降低。经过Transwell实验敲低WARS1之后,卵巢癌细胞的迁移能力、侵袭能力降低。经过凋亡实验之后,发现卵巢癌细胞凋亡能力升高。通过富集分析发现,WARS1会对P13K/AKT/mTOR信号通路有促肿瘤的作用。结论 WARS1在卵巢癌当中为高表达,与患者的不良预后有密切关系,可能会在未来成为浆液性卵巢癌的潜在治疗靶点。

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell实验分别检测其增殖与迁移能力。利用Starbase数据库预测miR-376c-3p的下游靶基因,并通过蛋白质印迹实验进行验证。结果:与人乳腺上皮MCF-10A细胞相比,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中miR-376c-3p表达水平显著降低(P<0.01);平板克隆实验显示,过表达miR-376c-3p可以显著抑制乳腺癌细胞增殖(P均<0.05);Transwell实验和划痕实验表明,miR-376c-3p表达上调可抑制乳腺癌细胞迁移能力;通过生物信息学预测分析,结果显示miR-376c-3p可以与谷氨酸受体相互作用蛋白1(glutamate receptor interacting protein 1,GRIP1)结合,且蛋白质印迹实验证实过表达miR-376c-3p可以抑制乳腺癌细胞GRIP1表达,同时波形蛋白表达水平明显下调,E-钙黏蛋白表达明显上调。结论:在乳腺癌细胞中,miR-376c-3p表达下调;在体外,过表达miR-376c-3p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,可能通过靶向GRIP1调节乳腺癌细胞上皮间质转化进程。

紫草素对鼻咽癌细胞生物学行为影响的研究

目的研究紫草素(shikonin)对体外鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移能力的影响。方法采用细胞生长曲线绘制法及MTT法检测紫草素作用后细胞增殖抑制情况;在荧光显微镜下利用Hoechst33258观察细胞的凋亡现象;应用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期的变化;划痕擦伤实验检测紫草素对细胞迁移的影响。结果不同浓度紫草素对CNE-1细胞的增殖均有抑制作用,与无药物处理对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;Hoechst33258染色检测发现细胞核出现致密的固缩形态及颗粒状荧光;FCM检测细胞周期显示,CNE-1细胞生长被阻滞在G0/G1期;划痕擦伤实验显示紫草素在一定浓度范围内可以抑制CNE-1细胞迁移。结论紫草素能明显抑制体外鼻咽癌CNE-1细胞增殖及迁移,阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导CNE-1细胞凋亡。

EZH2抑制剂对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖与转移能力的抑制作用。方法将EZH2抑制剂GSK343作用于体外培养的人宫颈癌HeLa细胞,用MTT及克隆形成率实验检测细胞生长和增殖的变化,细胞划痕实验测定细胞迁移能力的变化,Western blot检测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达;同时以等体积GSK343溶剂DMSO为对照。结果 MTT结果显示,GSK343对HeLa细胞的生长具有明显抑制作用,呈时间依赖性;克隆形成和细胞划痕实验显示,GSK343能显著抑制HeLa细胞的增殖及迁移能力;Western blot结果显示,GSK343处理后细胞上皮标志蛋白E-cadherin表达明显增高,间质标志蛋白N-cadherin表达明显减低。结论 EZH2抑制剂GSK343可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移,其机制之一可能是通过抑制HeLa细胞上皮间质转化过程来实现的。

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布.方法RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布.结果照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01).结论RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性.

外泌体及其在口腔鳞状细胞癌中的研究进展

外泌体是细胞主动分泌、可以介导细胞间通信的一种囊泡状小体,具有促进血管新生、抗肿瘤免疫、调控组织再生等生理功能。肿瘤细胞来源的外泌体可以通过激活多种信号通路,影响肿瘤微环境等方式参与肿瘤细胞的增殖与迁移。肿瘤细胞分泌的外泌体中含有的蛋白质、RNA及脂质等有可能用于疾病的临床诊断。本文主要对外泌体的组成及其在口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌)中的研究进展进行综述。

结直肠癌中辅酶Q_(10)的功能及分子机制探讨

目的:探索辅酶Q_(10)(coenzyme Q_(10),CoQ_(10))对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响及潜在分子机制。方法:使用CoQ_(10)分别处理SW480细胞和RKO细胞后,采用细胞计数和细胞划痕实验探究CoQ_(10)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响;采用流式细胞术探究CoQ_(10)对结直肠癌SW480细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RNA-seq测序分析CoQ_(10)对结直肠癌RKO细胞系基因表达谱的影响,将差异表达基因进行GO和KEGG通路分析,最后采用定量RT-PCR验证RNA-seq结果。结果:(1)CoQ_(10)对结直肠癌细胞系SW480的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移均无明显影响,对结直肠癌细胞系RKO的细胞增殖也无明显影响,但可抑制RKO细胞迁移。(2)CoQ_(10)处理结直肠癌RKO细胞后的RNA-seq结果表明,差异表达基因明显富集于细胞黏附分子信号通路、细胞外基质受体信号通路和胆固醇信号通路等。定量RT-PCR验证结果表明,CoQ_(10)处理确实可导致胆固醇合成通路中的PCSK9、HMGCR、HMGCS1和DHCR7基因表达明显上调,提示CoQ_(10)可能通过调节这些基因的表达来抑制结直肠癌细胞RKO的迁移。结论:CoQ_(10)对结直肠癌细胞的增殖无明显影响,但可通过参与调节胆固醇代谢而抑制部分结直肠癌细胞的迁移能力。

CRISPR/Cas9介导下构建FN1敲除的DLD1细胞系及初步功能学研究

[目的]利用CRISPR/Cas9技术构建FN1基因敲除的人结直肠腺癌DLD1细胞系,并初步探讨FN1基因敲除对DLD1细胞增殖、迁移的影响。[方法]根据CRISPR/Cas9技术原理,设计针对FN1基因的crRNA,体外混合crRNA、tracrRNA、Cas9酶,形成核糖核蛋白(即RNP复合物)后转染至DLD1细胞,实现基因编辑。采用二维梯度稀释法挑取单克隆细胞系,使用测序及蛋白质印迹技术(Western Blotting)检测FN1基因敲除情况,通过CCK8、Transwell及划痕实验检测FN1敲除对DLD1细胞增殖、迁移的影响。[结果]测序结果表明,8号单克隆细胞系在靶点附近缺失1 366个碱基,造成FN1编码基因的移码突变,蛋白翻译提前终止。与未编辑细胞相比,DLD1FN1-KO细胞的增殖及迁移能力明显降低。[结论]成功构建DLD1FN1-KO细胞系。初步证实,与未编辑细胞相比,DLD1FN1-KO细胞在第5d增殖水平减慢约40%(P <0.001)、迁移水平减慢约27%(P <0.001)。