15脱氧前列腺素J_2对同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用和对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)的作用。方法:用不同浓度的Hcy和15d-PGJ2对大鼠VSMCs进行刺激,以3H-TdR掺入方法观察15d-PGJ2对Hcy诱导大鼠VSMCs增殖的抑制作用,以Western印迹方法分析ERK1/2蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果:15d-PGJ2可明显抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖,但对Hcy诱导的ERK1/2磷酸化无明显作用。结论:15d-PGJ2可能通过MAPK/ERK1/2信号途径的下游步骤抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖。

探讨PNS对体外高糖培养的大鼠系膜细胞增殖和凋亡的影响及机制

高血糖、糖基化产物、血管紧张素Ⅱ、血流动力学障碍以及多种细胞因子、生长因子及趋炎症反应物质的产生,是导致肾小球硬化和肾间质纤维化主要发病机制。三七总苷(PNS)是三七的主要有效成分,通过下调残肾组织内的TG表达,抑制肾脏固有细胞表型转化而起抗纤维化作用有关。探讨PNS对大鼠肾系膜细胞增殖情况和细胞调亡形态学及P38MAPK通路在该过程中的可能作用,寻找防治糖尿病肾病的新方法。

大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应

目的探讨大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应。方法选取新生清洁级健康SD大鼠作为研究对象,对其颅骨成骨细胞进行分离、培养,使用含不同浓度甲状旁腺激素的培养液进行连续培养,分别采用四甲基偶氮唑盐比色法和蛋白免疫印迹杂交法对不同时间大鼠成骨细胞增殖情况及护骨素蛋白表达情况进行测定。结果随着培养时间延长,所有组别的成骨细胞吸光度值均呈不断增加的趋势,且同一时间点的吸光度值均显著高于空白对照组,比较差异有统计学医院(P<0.05)。培养液中甲状旁腺激素的浓度为10-8mol/L条件下,各时点的吸光度最高。观察各组成骨细胞中护骨素的表达情况,可见,其与甲状旁腺激素浓度无显著相关性,但空白对照组中护骨素与actin信号比显著高于其他组别,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状旁腺激素能刺激成骨细胞的增殖,并促进护骨素蛋白分泌水平下调。

人工蛹虫草子实体提取物对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨人工蛹虫草不同溶剂提取部位对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法:系膜细胞与不同溶剂提取物共同培养或加入LPS刺激细胞增殖,培养68h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察人工蛹虫草不同溶剂提取物对培养的肾小球系膜细胞增殖的影响。结果:正丁醇提取物在2～250μg·ml^(-1)浓度范围内呈浓度依赖性抑制系膜细胞增殖;乙酸乙酯提取物的抑制浓度为0.51～100μg·ml^(-1),甲醇提取物的抑制浓度为62.5～250.0μg·ml^(-1),而水提醇沉提取物在0.5～12.5μg·ml^(-1)范围内具有促进系膜细胞增殖作用;乙醇提取物作用不明显。结论:人工蛹虫草子实体存在对肾小球系膜细胞增殖有抑制和促进作用的成分。

糖尿病大鼠表皮干细胞及其增殖分化相关蛋白的研究

目的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)能主动参与创面修复,促进创面再上皮化。建立糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠模型,观察DM大鼠皮肤中ESCs增殖分化相关蛋白——角蛋白19(keratin19,K19)、β1整合素(β1-integrin)、β-连环素(β-catenin)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,探讨DM大鼠皮肤创面难愈合的潜在机制。方法20只雄性SD大鼠,体重250～300g,随机分为DM组和正常对照组,每组10只。DM组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ,65mg/kg)制备DM大鼠模型,正常对照组不作处理。给药后4周取两组大鼠胰腺组织,HE染色观察胰岛组织学变化。取两组动物背部全层皮肤,分离培养ESCs,取第2代ESCs行免疫细胞化学染色鉴定K19、β1-integrin、β-catenin和PCNA阳性表达,流式细胞仪检测细胞周期,细胞接种1周后检测两组细胞克隆形成率。结果DM大鼠造模成功率为90%。DM组胰腺HE染色可见胰岛细胞数明显减少,出现变性坏死;正常对照组胰岛细胞结构清楚,无变性坏死。DM组大鼠ESCs的K19、β1-integrin、β-catenin及PCNA阳性表达分别为82.63±14.77、21.59±4.71、76.49±6.58、90.77±12.44,均低于正常对照组的151.24±42.83、54.48±17.43、116.39±9.26、110.62±20.67,差异均有统计学意义(P<0.01)。DM组ESCs克隆形成率为6.43%±1.01%,明显低于正常对照组的11.37%±1.62%,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示DM组88.89%细胞处于G0/G1期,凋亡细胞数为3.98%;正常对照组91.50%细胞处于G0/G1期,无凋亡细胞。结论通过腹腔一次性注射65mg/kgSTZ可有效建立DM大鼠模型。DM大鼠ESCs数量少、增殖分化能力低可能是DM创面难愈合的重要机制之一。