小麦细胞增殖核抗原基因启动子的克隆及活性分析

细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因是DNA聚合酶δ的辅助因子,在真核细胞DNA复制及其损伤修复中发挥着重要的作用.采用高效热不对称交互PCR法(highefficiency thermal asymmetric interlaced PCR,hi TAIL-PCR)从小麦西农1 376基因组中扩增得到小麦PCNA基因启动子片段,并命名为Ta PCNA启动子.Plant CARE启动子在线分析软件预测含有光应答调控元件(Box I)、脱落酸应答元件(ABRE)、花粉发育应答元件(GGTT motif,GTGA motif)及细胞周期转换结合位点(E2F-binding site)等.为了分析其启动子活性,通过替换p BI121载体上的Ca MV35S启动子,构建了Ta PCNA启动子与β-葡糖醛酸酶(GUS)基因的融合表达载体,通过农杆菌介导法在烟草叶片中进行瞬时表达.GUS组织化学染色结果表明,Ta PCNA基因启动子能够驱动GUS基因在烟草叶片中表达,证实了所获得的启动子序列具有启动活性.本研究通过hi TAILPCR法克隆得到Ta PCNA基因的启动子,为深入研究该基因的功能奠定了基础.

镉胁迫对拟南芥幼苗形态生理和错配修复相关基因表达的影响研究

以拟南芥为供试材料,从形态指标、生理指标、分子指标3个层次研究了镉(Cd)的毒理效应,筛选Cd敏感生物标记物。分子指标的研究以18SrRNA为看家基因,错配修复基因MutS2homolog(atMSH2),atMSH3,atMSH7,细胞增殖核抗原1和2(atPCNA1和atPCNA2)为检测目的基因,采用半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术研究Cd胁迫对上述错配修复相关基因表达的影响。结果表明,不同浓度(0、0.125、0.25、1.0、3.0mg·L-1)Cd处理7d后,根长随Cd胁迫强度的增加而降低;0.125mg·L-1Cd处理下,地上部可溶性蛋白含量显著增加,而在0.25、1.0和3.0mg·L-1Cd时降低,但仍高于对照;幼苗叶片数、地上部鲜重、叶绿素含量变化与对照相比差异均不显著。地上部atMSH2,atPCNA1,atPCNA2基因表达量的变化与Cd胁迫浓度呈明显的倒U字型关系,分别在0.125,0.25和0.125mg·L-1Cd时达到最大值。以上结果表明,地上部可溶性蛋白含量变化与上述3个错配修复相关基因表达量的改变趋势相符,且均对Cd污染胁迫较敏感,可以作为检测Cd污染及其相关生物学效应的潜在生物标记物。

联合检测SOX4、P16、Ki67在宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的探究SOX4、P16、Ki67在宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义。方法选取我院2022年6月至2023年5月期间病理科确诊为宫颈上皮内瘤变患者32例为观察组,依据宫颈上皮内瘤变组织病变程度分为两组,其中低级别宫颈上皮内瘤变组织为低级别组(n=16),高级别宫颈上皮内瘤变组织为高级别组(n=16),另选取同期收入10例子宫肌瘤至我院实施全子宫切除术正常宫颈组织患者为对照组,并对上述患者均开展SOX4、P16、Ki67检测,分析表达情况。结果观察组中SOX4、P16、Ki67阳性率分别为50.00%、68.75%、68.75%,对照组均为0例(0.00%),观察组整体阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);低级别宫颈上皮内瘤变患者中SOX4、P16、Ki67阳性分别为7例(43.75%)、11例(68.75%)、11例(68.75%),高级别宫颈上皮内瘤变患者中分别为10例(62.50%)、13例(81.25%)、10例(62.50%),两组对比差异无统计学意义(P>0.05);SOX4、P16、Ki67阳性表达与宫颈上皮内瘤变呈正相关,P<0.05。结论SOX4、P16、Ki67表达与宫颈上皮内瘤变相关联,参与疾病发生、发展过程,在后续可作为判断宫颈癌疾病发生、发展的生物标志物。

Ki-67联合p16检测对HPV持续高危阳性患者子宫颈高级别鳞状上皮内病变的诊断价值

目的:分析原癌基因细胞增殖核抗原(Ki-67)联合细胞周期蛋白激酶的抑制因子(p16)检测对人乳头瘤病毒(HPV)持续高危阳性患者子宫颈高级别鳞状上皮内病变的诊断价值。方法:选取新余市人民医院2017年12月—2020年11月收治的慢性子宫颈炎患者134例、子宫颈低级别鳞状上皮内病变131例、子宫颈高级别鳞状上皮内病变129例、HPV持续高危阳性患者118例,分别记为对照1组、对照2组、对照3组、研究组,四组均取病灶组织采用免疫组化二步法检测Ki-67、p16蛋白表达,比较四组病灶组织Ki-67、p16蛋白表达情况及阳性率;比较研究组不同临床病理特征患者病变组织Ki-67、p16蛋白表达阳性率;采用列联表法分析在各组子宫颈高级别鳞状上皮内病变与病灶组织Ki-67、p16蛋白表达的关系,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析病变组织标本中Ki-67、p16及联合诊断子宫颈高级别鳞状上皮内病变的价值。结果:四组病灶组织Ki-67、p16蛋白表达分布比较差异均有统计学意义(Z=29.852,P<0.001;Z=25.856,P<0.001),研究组病灶组织Ki-67、p16蛋白表达阳性率均高于其余三组(P<0.01),且对照2组、对照3组病灶组织Ki-67、p16蛋白表达阳性率均高于对照1组(P<0.01),研究组子宫颈高级别鳞状上皮内病变与病灶组织Ki-67、p16蛋白表达均呈正相关(C=0.745、0.641,P<0.01),HPV持续高危阳性患者Ki-67、p16及联合诊断子宫颈高级别鳞状上皮内病变的敏感度分别为65.40%、69.20%、78.90%,特异度分别为71.70%、73.60%、73.60%,AUC分别为0.718、0.729、0.816,联合诊断的AUC值高于Ki-67、p16单一诊断(Z=6.854,P=0.000;Z=6.741,P=0.000)。结论:子宫颈高级别鳞状上皮内病变与HPV持续高危阳性患者病灶组织Ki-67、p16蛋白表达均呈正相关,Ki-67联合p16检测的诊断价值较高。

阴道镜联合P16、Ki67免疫组化染色在宫颈癌前病变中的诊断价值

目的:探讨阴道镜下联合应用抑癌基因蛋白16(P16)、原癌基因细胞增殖核抗原(Ki67)免疫组化染色在宫颈癌前病变中的诊断价值。方法:选择2020年1月至2023年6月就诊于清远市妇幼保健院的400例宫颈癌前病变患者作为研究对象,慢性宫颈炎患者400例作为阴性对照,均接受P16、Ki67检测和阴道镜检查,统计检查结果,以组织活检病理学检查结果为准,分析阴道镜联合P16、Ki67免疫组化染色诊断宫颈癌前病变的价值。结果:阴道镜联合P16、Ki67免疫组化染色诊断宫颈癌前病变的灵敏度为100.00%、阴性预测值为100.00%、特异度为97.50%、阳性预测值为97.56%、准确度为98.75%,均高于各方法单一检查,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论:阴道镜、P16、Ki67检查均是鉴别宫颈癌前病变的有效手段,三者联合检查可提高宫颈癌前病变的检出效果。

Relationship Between Apoptosis and PCNA Expression of Keratinocytes in Condylomata Acuminata

Objecrive: To investigate the relationship between apoptosis and proliferating cell nuclear antigcn (PCNA)expression of keratinocytes in Condylomata acuminata (CA). Methods: PCNA expression was observed byimmunohistochemistry technique (ABC method) in 51 CAspecimens and 1 normal specimens of foreskin or vaginalmucosae. 55 specimens (40 in the CA group and 15 in thecontrol group) were randomly sampled for in situ labelingof apoptotic cells using the TUNEL method. Results: Positive expression of PCNA in CA and controlgroups were 90.2% and 77.8%, respectively, and theproliferation index in CA group was significantly higherthan that in the control group (P<0.001). The positive rateof apoptosis was 42.5% in the LA group and 53.3% in thecontrol group, and there were no significant differences inthe apoptotic index and apoptosis-proliferation ratiobetween two groups (P>0.05). The proliferation indexshowed a significant negativc correlation with theapoptosis-proliferation ratio (r=-0.62, P=0.01) in the CAgrp. Conclusion: It is suggested that the proliferativeappearance of CA could be due to the imbalance betweencell growth and cell death which is caused by moreproliferation and less apoptosis in keratinocytes.