VEGF水平及其受体分型和角膜细胞增殖能力的相关性

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)水平及其受体分型(VEGFR1、VEGFR2)与角膜细胞增殖能力的相关性。方法受试者为A、B、C 3组,每组20例。A组为新生血管性青光眼组,B组为原发性青光眼组,C组为年龄相关性白内障组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和房水中VEGF、VEGFR1、VEGFR2水平和促红细胞生成素(EPO)水平。结果3组血清VEGF水平差异有统计学意义(F=680.667,P<0.001),3组血清EPO水平无显著差异(F=0.773,P>0.05)。3组房水VEGF水平差异具有统计学意义(F=552.247,P<0.001)。3组房水中EPO水平差异有统计学意义(F=1757.436,P<0.001)。新生血管性青光眼房水VEGF、EPO水平相关性不显著(r=-0.182,P>0.05)。A、B组血清VEGF、VEGFR2含量与C组相比有显著差异(均P<0.01)。3组血清VEGFR1含量未见明显差异(P>0.05)。结论血管生成性青光眼患者体内VEGF、VEGFR2和EPO局部水平升高,但EPO与虹膜血管生成无明显相关性。

不同深度针刺足三里穴对健康大鼠外周血细胞形态数量及淋巴细胞增殖能力和胸腺指数的影响

目的:有研究表明,针刺足三里穴能够提高衰老机体的免疫系统功能,关于足三里穴适宜的针刺深度及对健康机体影响的研究较少。实验观察不同深度针刺足三里穴对健康大鼠免疫功能的影响。方法:实验于2006-09/10在北京联合大学生物活性物质与功能食品北京市重点实验室完成。实验选用健康清洁级雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为3组:空白组、皮下组、肌肉组,每组8只。皮下组将毫针沿15°角斜向上平刺入足三里穴皮下,肌肉组将毫针直刺入足三里穴肌肉层,留针20min,1次/d,共14次,空白组不做针刺处理。测定针刺前后各组大鼠体质量的变化、大鼠胸腺指数、脾脏淋巴细胞增殖能力及外周血细胞计数等变化。结果:针刺作用后,肌肉组大鼠胸腺指数及淋巴细胞增殖能力均较空白组明显升高(P<0.05),皮下组和空白组大鼠胸腺指数及淋巴细胞增殖能力无统计学差异(P>0.05),肌肉组与皮下组大鼠白细胞总数、红细胞计数、血红蛋白含量及血小板总数与空白组比较,差异均不显著(P>0.05)。针刺一二周后,肌肉组与皮下组大鼠体重质量均明显低于空白组(P<0.01)。结论:肌肉层深层针刺足三里穴可提高健康大鼠胸腺指数及淋巴细胞增殖能力,增强大鼠机体免疫能力,同时对于机体外周血细胞无明显影响。

有丝分裂调控蛋白DIS3的表达调控对3株人骨髓瘤细胞增殖能力的影响

目的:探究有丝分裂调控蛋白DIS3的表达调控对3株人骨髓瘤细胞增殖能力的影响。方法:选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI 8226和U266B1为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA。细胞实验分为对照组、DIS3过表达-空载体组、DIS3-siRNA阴性对照组、DIS3过表达组以及DIS3-siRNA组共5组。细胞培养24、48和72 h后,应用MTT法检测3种细胞株的增殖能力;收集培养了72 h的细胞样本,应用RT-qPCR和Western blot分别检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果:MTT检测显示,与同时间点(24、48或72 h)DIS3过表达-空载体组比较,DIS3过表达组细胞增殖能力显著降低(P<0.05;P<0.01);与同时间点(24、48或72 h)DIS3-siRNA阴性对照组比较,DIS3-siRNA组细胞增殖能力均显著增加(P<0.01)。qRT-PCR和Western blot检测显示,与DIS3过表达-空载体组比较,DIS3过表达组细胞中PCNA的mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01);而与DIS3-siRNA阴性对照组比较,DIS3-siRNA组细胞中PCNA的mRNA及蛋白表达量均显著升高(P<0.01)。结论:过表达DIS3能显著降低3株人骨髓瘤细胞的增殖能力,这可能与降低PCNA的表达密切相关。

麻黄加术汤对寒湿环境下小鼠脾淋巴细胞增殖能力作用的实验研究

目的探讨寒湿环境因素对正常及呼吸道合胞病毒感染小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响以及麻黄加术汤的治疗作用。方法借助人工气候箱模拟寒湿外邪环境,通过体外细胞培养、MTT法检测脾淋巴细胞增殖能力的变化,分析寒湿外邪及麻黄加术汤对病毒感染小鼠免疫状态产生的影响。结果与正常组比较,病毒组和寒湿组均使小鼠脾淋巴细胞增殖能力显著下降(P<0.001)。与病毒模型组和寒湿病毒模型组分别比较,麻黄加术汤和利巴韦林均使小鼠脾淋巴细胞的增殖能力显著升高(P<0.001);与病毒+麻黄加术汤组比较,寒湿病毒+麻黄加术汤组显著降低(P<0.05)。结论寒湿环境对上呼吸道感染小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响较呼吸道合胞病毒滴鼻更加显著。麻黄加术汤可提高小鼠的免疫功能,而其对寒湿病毒所致小鼠脾淋巴细胞的增殖能力降低的改善不及病毒所致,可能是由于寒湿病毒较病毒使小鼠脾淋巴细胞的增殖能力降低更显著所致。

桂附地黄丸对骨髓基质干细胞增殖能力的影响

目的:观察桂附地黄丸对老年狗骨髓基质干细胞增殖能力的影响。方法:取4只老年杂种狗,给予桂附地黄丸口服,用药前后抽取骨髓进行细胞分离,并以细胞密度为1×105/mL、1×106/mL、1×107/mL接种,观察细胞生长情况。并对获得的细胞进行脂肪诱导、骨诱导分化试验。结果:4只狗服药前的骨髓接种后,细胞不易生长、传代;服药后骨髓细胞较易生长及增殖。生长的细胞进行的成脂肪和成骨诱导分化试验为阳性结果。结论:桂附地黄丸对老年狗骨骨髓基质干细胞的增殖具有一定促进作用。

培养的角膜缘上皮细胞增殖能力的动态研究

目的 探讨组织块培养角膜缘上皮细胞在不同时间以及第 2、3代培养的角膜缘上皮细胞早期 (6～ 8d)的增殖能力。方法 应用组织块培养法培养角膜缘上皮细胞 ,在d8、12、16、2 0、2 4用流式细胞仪检测其细胞周期 ,同时对组织块培养 16d的角膜缘上皮细胞进行传代 ,用同样方法检测第 2、3代细胞出现汇合时 (6～ 8d)的细胞周期。结果 组织块培养角膜缘上皮细胞增殖指数 (ProliferativeIndex ,PI)在高水平上呈下降趋势 (分别为 31 2 %、2 0 1%、17 6 %、15 6 %、13 4 % ) ;2、3代培养细胞早期的增殖指数较高 (分别为 30 3%、2 6 % )。结论 组织块培养的角膜缘上皮细胞增殖能力在 8～ 2 4d内在高水平上呈下降趋势 ,第 2、3代培养的细胞在培养早期的增殖能力也较高 。

^(60)Coγ射线照射对AT和GM细胞增殖能力及O_2^(.-)浓度的影响

为探求AT5BIVA细胞辐射敏感性与超氧阴离子自由基O2.-之间的联系,以正常人皮肤成纤维细胞GM0639为对照,用3HTdR掺入法和细胞色素C还原法分别测定正常及照射条件下细胞增殖能力及其培养介质中O2.-浓度(nmol/106细胞)。结果表明,在正常培养条件下,两种细胞的增殖能力和向培养介质中释放O2.-的量均随培养时间的延长而增加。在不同剂量60Coγ射线照射条件下,两种细胞的增殖能力和向培养介质中释放O2.—的量均随剂量增大而减小;两种细胞的增殖能力均与其培养介质中O2.—浓度密切相关,且AT5BIVA细胞的增殖速率大于GM0639细胞。提示AT5BIVA细胞高辐射敏感性与O2.—产生量密切相关。

MTT法检测淋巴细胞增殖能力的影响因素

机体免疫系统中淋巴细胞增殖是机体对非己抗原刺激产生免疫应答过程中的重要事件。淋巴细胞增殖结果表现为产生效应淋巴细胞。清除非己抗原，维护机体内环境稳定。淋巴细胞增殖效果决定了效应淋巴细胞的数量，决定了机体免疫应答反应的强度，反映了机体的细胞免疫状态。因此，淋巴细胞增殖实验的结果是细胞免疫的一个测定指标。

人脑膜瘤血管生成和细胞增殖能力的关系

目的 :探讨人脑膜瘤血管生成与细胞增殖能力的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测38例人脑膜瘤 (良性 14例 ,非典型和间变型各 12例 )第 因子相关抗原和增殖细胞核抗原的表达特点 ,分析肿瘤微血管密度 ( MVD)值与增殖细胞核抗原标记指数 ( PCNA LI)之间的关系。结果 :良性与非典型脑膜瘤 MVD值之间差异无显著性 ,间变型脑膜瘤 MVD显著高于良性和非典型脑膜瘤的 MVD值 ( P<0 .0 1) ,间变型脑膜瘤 PCNA LI明显高于良性和非典型者。良性脑膜瘤 MVD和 PCNA LI不相关 ,而非典型和间变型脑膜瘤 MVD值与 PCNA L I之间呈正相关。结论 :非典型和间变型脑膜瘤血管生成与细胞增殖能力有一定关系。

益生菌对新城疫疫苗免疫雏鸡淋巴细胞增殖能力的影响

本试验以1日龄雏鸡为研究对象,采用细胞培养和MTT检测技术,通过T、B淋巴细胞增殖能力的测定,研究了益生菌对新城疫疫苗免疫雏鸡外周血液和免疫器官T、B淋巴细胞对ConA或PMA增殖能力的影响。结果表明,雏鸡ND疫苗免疫后,益生菌应用雏鸡和ND疫苗免疫雏鸡外周血液和免疫器官中淋巴细胞增殖能力均不同程度高于对照雏鸡,且益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡较ND疫苗单独免疫雏鸡,其淋巴细胞增殖能力显著增强。NDV强毒攻击后,无论是益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡还是ND疫苗单独免疫雏鸡外周血液和免疫器官T、B淋巴细胞增殖能力均不同程度高于对照雏鸡,而益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡淋巴细胞增殖能力又强于ND疫苗单独免疫雏鸡。且益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡保护率为100%,ND疫苗单独免疫雏鸡为80%,对照雏鸡发生典型新城疫病全部死亡,表明益生菌可增强ND疫苗的免疫效应,提高ND疫苗免疫雏鸡对NDV强毒攻击的免疫保护力。

辣椒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力和胶原合成的影响

目的:探讨辣椒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力和胶原合成的影响,以期为辣椒素在瘢痕防治的临床应用方面提供实验依据。方法:取增生性瘢痕10例,采用组织块培养法获得原代成纤维细胞,选用4代细胞为实验模型,将辣椒素(2～100mg/L)加入细胞培养体系中进行干预并与对照组比较,用3H-TdR和3H-脯氨酸参入法分别检测成纤维细胞增殖能力和胶原合成水平的变化。结果:辣椒素对成纤维细胞的作用表现为剂量和时间依赖性。高含量的辣椒素(>50mg/L)对成纤维细胞有直接的损伤作用,作用24h后可导致细胞死亡;2和10mg/L低含量的辣椒素在不杀伤细胞的同时,能够显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞3H-TdR和3H-脯氨酸参入,仅为未用药组的50%和30%。结论:辣椒素可以导致培养的增生性成纤维细胞功能发生明显改变,细胞增殖能力和胶原合成能力受到显著抑制。结合同期临床观察表明,辣椒素在瘢痕防治的临床应用方面具有潜在的价值。

稳定表达NDRG2的培养人晶状体上皮细胞株的建立及其对细胞增殖能力的影响

目的分别建立人N-Myc下游受调节基因2(N-Myc downstream regulated gene2,NDRG2)表达上调、下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,并观察NDRG2对晶状体上皮细胞增殖能力的影响。方法分别用质粒PLenti6-NDRG2、PLenti6-cherry、PLKO-NDRG2shRNA、PLKO-scramble以及PAX2和PMD2G构建慢病毒载体,感染培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04),通过药物筛选获得NDRG2表达上调、下调的晶状体上皮细胞株。采用Real-time PCR、Western blot等方法检测NDRG2的表达。通过MTT、EdU等方法检测所获得细胞株的生长曲线及增殖能力。结果 NDRG2 mRNA在过表达对照组和过表达组细胞中的相对表达量分别为1.04±0.38、6.57±0.97,两组间差异有统计学意义(P<0.05);NDRG2mRNA在干涉对照组和干涉组细胞中的表达量分别为1.05±0.31、0.49±0.14,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG2过表达和干涉慢病毒载体感染后,SRA01/04细胞中NDRG2 mRNA的表达分别出现了明显的上调和下调。Western blot检测结果显示:与各自对照组相比,在NDRG2过表达组和干涉组细胞中,NDRG2蛋白的表达量分别出现了明显的升高和降低。MTT检测结果显示:与其对照组相比,NDRG2过表达组细胞生长曲线表现出降低趋势,干涉组细胞生长曲线表现出升高趋势,在培养后5d检测时差异有统计学意义(P<0.05)。EdU检测结果显示:过表达对照组Cherry-SRA01/04细胞、过表达组NDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(41.57±2.53)%、(33.53±3.03)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05),提示NDRG2表达上调后DNA的合成受到抑制。干涉对照组Scramble-SRA01/04细胞和干涉组shNDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(27.70±1.05)%、(46.43±4.01)%,差异有统计学意义(P<0.05),提示NDRG2表达下调后DNA合成速度加快。结论通过病毒载体感染联合药物筛选,分别建立了NDRG2表达上调和下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,且NDRG2基因对晶状体上皮细胞的增殖能力具有负向调节作用。

益生菌对新城疫疫苗免疫雏鸡免疫器官T细胞增殖能力和IL-2mRNA表达影响

为探索益生菌对新城疫（ND）疫苗免疫雏鸡的免疫效果影响。将100只1日龄AA肉鸡随机分为益生菌组、ND疫苗单独免疫组、益生菌联合ND疫苗应用组和空白对照组。采用MTT法和实时荧光定量PCR法检测各试验雏鸡于ND疫苗两次应用后0、7、14、28、42 d胸腺、脾脏中细胞免疫功能及IL-2 mRNA的表达。结果发现,益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡后,其胸腺和脾脏中T细胞增殖能力和IL-2 mRNA表达,分别于ND疫苗免疫后7～28 d明显（P〈0.05或P〈0.01）高于ND疫苗或益生菌单独应用雏鸡。表明益生菌可通过提高雏鸡免疫器官中T细胞增殖功能和IL-2 mRNA表达,发挥增强ND疫苗免疫效应作用。

β连环素、核因子κB表达水平与尖锐湿疣患者角质形成细胞增殖能力的关联性分析

目的探讨β连环素(β-catenin)、核因子κB(NF-κB)与尖锐湿疣(CA)患者细胞增殖的关联性。方法选取某医院收治的CA患者92例(2019年1月至2021年1月)作为研究对象,按照感染类型分为高危组(n=41)与低危组(n=51),同时选取同期于我院检查的112例健康体检者作为健康体检组。对比三组β-catenin、NF-κB表达情况、角质形成细胞增殖能力及其关联性。结果高危组、低危组β-catenin、NF-κB阳性率均高于健康体检组(P<0.05);伴随时间延长,高危组、低危组角质形成细胞增殖能力呈升高趋势(P<0.05);经Spearman相关性分析,β-catenin、NF-κB与角质形成细胞增殖能力呈正相关(P<0.05)。结论β-catenin、NF-κB表达水平与CA患者角质形成细胞增殖能力呈正相关,临床可客观评估CA患者病情严重程度,为确定治疗方案提供重要依据。

毒害艾美耳球虫感染对雏鸡免疫器官IL-2表达及淋巴细胞增殖能力的影响

为了探讨毒害艾美耳球虫(E.necatrix)感染雏鸡后,其免疫器官白细胞介素(IL-2)和T、B淋巴细胞增殖能力的变化,本研究应用组织匀浆涂片和酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对E.necatrix感染雏鸡免疫器官的T淋巴细胞百分数、IL-2诱生活性、T和B淋巴细胞对ConA或PMA的增殖能力动态变化进行较全面系统的研究。结果发现,E.necatrix感染雏鸡后,其胸腺和脾脏T淋巴细胞百分数分别于感染后7d～21d和7d～24d明显高于对照雏鸡;IL-2诱生活性分别于16d～18d和18d～21d较对照雏鸡显著升高;T淋巴细胞对ConA的增殖能力分别在14d～16d和10d～18d明显增强。法氏囊和脾脏B淋巴细胞对PMA的增殖能力分别于14d～24d和14d～21d显著高于对照雏鸡。表明E.necatrix感染雏鸡免疫器官的IL-2调节及细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。

燃煤砷暴露对人体T细胞增殖能力的影响及其机制探讨

目的:探讨燃煤砷暴露对人体T细胞增殖能力的影响及其作用机制。方法:采集贵州省燃煤污染型砷中毒病区居民及非病区居民外周血,按《地方性砷中毒诊断标准》(WS/T211-2001)分为暴露组(17例)、轻度砷中毒组(35例)、中度砷中毒组(38例)、重度砷中毒组(19例)及对照组(35例)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测T细胞刺激指数;钙离子荧光探针(Fluo-3/AM)染色流式细胞术检测外周血单个核细胞(PB-MC)钙离子指数(IECa2+);电泳迁移率改变实验(EMSA)检测PBMC活化T细胞核转录因子(NF-AT)结合DNA的活性。结果:经刀豆蛋白A(ConA)刺激后,暴露组及轻、中、重度砷中毒组刺激指数(1.315±0.962、1.611±1.224、1.114±0.545、1.289±0.875)均低于对照组(2.322±1.241,P<0.01)。经抗CD3单克隆抗体(McAb)刺激后,暴露组及轻、中、重度砷中毒组刺激指数(0.997±0.177、1.103±0.291、1.007±0.221、0.957±0.205)亦均低于对照组(1.842±0.429,P<0.01)。轻、中、重度砷中毒组PBMC经抗CD3 McAb处理后,IECa2+(110.130±49.637、92.429±31.191、77.640±35.372)均显著低于对照组(145.986±59.450,P<0.01);中、重度砷中毒组IECa2+亦均显著低于暴露组(121.337±46.410,P<0.05)。轻、中、重度砷中毒组PBMC内NF-AT结合DNA活性(1.354±0.446、1.290±0.291、1.159±0.411)均显著低于对照组(1.722±0.291,P<0.01)和暴露组(1.611±0.294,P<0.05)。结论:燃煤砷暴露可导致人体T细胞刺激指数下降、PBMC内IECa2+减少及NF-AT结合DNA的活性降低,表明砷可抑制人体T细胞增殖能力,其原因可能与砷对T细胞受体(TCR)/CD3信号转导途径的影响有关。

二甲双胍对部分恶性肿瘤细胞增殖能力的影响

(1)目的探讨二甲双胍对TPC-1人乳头瘤状甲状腺癌细胞、Eca-109人食管癌细胞、SHSY5Y人神经母细胞瘤细胞、PC-3人前列腺癌细胞、HT-29人结肠癌细胞及HCT-8人结肠癌细胞增殖能力的影响,分析二甲双胍的抗肿瘤作用。(2)方法将6种恶性肿瘤细胞均匀地种植于96孔板内,37℃、双气、饱和湿度下常规培养;MTT实验检测各肿瘤细胞在不同浓度盐酸二甲双胍作用48小时的细胞增殖能力及1.5mg/mL盐酸二甲双胍作用24小时、48小时、72小时的细胞增殖能力。(3)结果盐酸二甲双胍抑制了TPC-1人乳头瘤状甲状腺癌细胞、Eca-109人食管癌细胞、SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞、PC-3人前列腺癌细胞、HT-29人结肠癌细胞及HCT-8人结肠癌细胞的增殖(P <0.05),且呈剂量及时间依赖性。(4)结论二甲双胍可降低实验中各种肿瘤细胞的增殖能力,抑制细胞增殖,提示二甲双胍可能具有广泛的抗肿瘤作用。

不同剂量异鼠李素对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响及其机制探讨

目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期RAW264. 7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/m L脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/m L)的溶液,模型组加入含10μg/m L LPS的1640培养基(含10%FBS),对照组加入含10%溶剂对照的1640完全培养基。测算各组细胞增殖指数,检测各组一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果与对照组比较,模型组细胞12、24、36、48 h细胞增殖指数增加(P均<0. 05);与模型组比较,低剂量组24、36 h及中剂量组和高剂量组12、24、36、48 h细胞增殖指数减少(P均<0. 05);与低剂量组比较,中剂量组24 h及高剂量组24、48 h细胞增殖指数减少(P均<0. 05)。与对照组比较,模型组NO、TNF-α水平升高(P均<0. 05);与模型组比较,低剂量组NO水平及中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0. 05);与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0. 05)。结论 ISO可抑制RAW 264. 7细胞增殖能力,且呈剂量依赖性,高剂量作用最大;机制可能与抑制NO、TNF-α有关。

不同外邪对正常及免疫功能低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响

目的:通过检测在风寒、寒湿和湿热环境下小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,探讨不同外邪因素对小鼠免疫功能的影响。方法:选择刀豆蛋白(ConA)诱导脾淋巴细胞增殖,采用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增殖能力。结果:①各外邪因素处理组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力皆明显低于正常组(P<0.01)。②各外邪低免组与低免组相比,风寒低免组、寒湿低免组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力明显降低(P<0.01);湿热低免组小鼠脾淋巴细胞增殖能力也有降低,但无统计学差异。③风寒低免组与风寒组相比、寒湿低免组与寒湿组相比、湿热低免组与湿热组相比,小鼠脾淋巴细胞的增殖能力均明显降低(P<0.01)。结论:与正常组相比,各外邪因素处理组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力都发生降低,低免模型组小鼠的淋巴细胞增殖能力下降程度尤其显著。实验表明风寒、寒湿、湿热3种外邪因素可使小鼠免疫功能降低,易导致疾病的发生。