新型杀菌剂氟吗啉对黄瓜疫霉病菌细胞壁主要组分合成及分布的影响

应用同位素示踪和组织特异性荧光染色等生物化学方法研究了新型杀菌剂氟吗啉对黄瓜疫霉病菌细胞壁主要组分合成及分布的影响.结果表明,氟吗啉对细胞壁的主要组成物质纤维素和非纤维素葡聚糖的合成没有抑制作用,但破坏细胞壁物质在菌丝正确位置的形成和分布,扰乱菌丝的极性生长.

酿酒酵母Snf1/AMPK蛋白激酶通过调节细胞壁合成相关基因的表达影响细胞壁完整性

【目的】初步探讨酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Snf1/AMPK蛋白激酶影响细胞壁完整性的机制。【方法】通过同源重组交换的方法,构建酿酒酵母Snf1/AMPK蛋白激酶催化亚基的敲除菌株snf1Δ,并通过基因回补对敲除菌株表型进行验证。在含有刚果红(Congo red)和荧光增白剂(Calcofluor white)的平板上检测snf1Δ菌株细胞壁的完整性,通过q RT-PCR的方法检测snf1Δ菌株中已知的细胞壁合成相关基因的表达情况。【结果】SNF1基因敲除影响细胞壁的完整性,并影响酿酒酵母对热激应答的反应。进一步研究发现,SNF1突变菌株中β-1,3-葡聚糖合成相关基因与β-1,6-葡聚糖合成相关基因的表达量均明显降低。【结论】结果显示酿酒酵母Snf1蛋白激酶影响细胞壁的完整性,此影响发生在转录水平上,即通过调节细胞壁合成相关基因的转录来实现,揭示了Snf1蛋白的一个新角色。

高表达GFP-PBP1b融合蛋白的猪链球菌菌株的构建及PBP1b蛋白细胞定位的研究

为鉴定猪链球菌(Streptococcus suis)A型青霉素结合蛋白PBP1b在S.suis中的细胞定位,本研究经PCR扩增S.suis pbp1b基因融合位点上下游序列UP和DN、强启动子Peno基因片段及绿色荧光蛋白(GFP)gfp基因片段,再通过重叠延伸PCR扩增构建融合片段UP-Peno-GFP-DN。利用同源重组的方法将UP-Peno-GFP-DN转化含反向筛选标记的PSS-pbp1b中间菌株,经含7%蔗糖的TSAS平板筛选,挑单菌落进行PCR及测序鉴定。PCR及测序鉴定结果显示,获得的重组菌株中Peno-gfp片段替换了PSS-pbp1b中的PSS片段,表明融合强启动子Peno、GFP及PBP1b(GFP-PBP1b)的重组菌株P-GFP-pbp1b正确构建。以S.suis 05ZYH33株和本实验室前期构建的GFP-pbp1b为对照,培养P-GFP-pbp1b菌株并测定OD600nm值,绘制各菌株的生长曲线;采用western blot检测P-GFP-pbp1b菌株中GFP-PBP1b融合蛋白的表达水平,并与GFP-pbp1b菌株进行比较;利用Alexa Fluor 633-WGA染色,经超高分辨显微镜观察GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b菌株形态及GFP-PBP1b融合蛋白在S.suis细胞中的定位。生长曲线结果显示,S.suis融合菌株GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b均正常生长;western blot结果显示,GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b菌株均能够表达GFP-PBP1b融合蛋白,但强启动子驱动的P-GFP-pbp1b菌株中GFP-PBP1b蛋白表达量较GFP-pbp1b菌株提高了6倍(P<0.01);超高分辨显微镜观察结果显示,GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b菌株形态均正常,GFP-pbp1b菌株中GFP荧光较弱,难以定位GFP-PBP1b,而P-GFP-pbp1b菌株中GFP荧光较强,能够明显观察到融合蛋白GFP-PBP1b定位在S.suis的细胞横隔和两极。本研究通过构建高表达GFP-PBP1b融合蛋白的P-GFP-pbp1b菌株首次观察到PBP1b在S.suis中的细胞定位,为进一步研究PBP1b在S.suis细胞壁肽聚糖合成中的作用奠定了基础。

金黄色葡萄球菌耐药机制及治疗药物

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起局部化脓和心内膜炎等多种感染的重要人兽共患革兰阳性病原菌。其传播速度快,致病力强,且耐药性日益严重,给全球公共卫生安全和动物养殖业造成了巨大威胁。这对深入了解金黄色葡萄球菌耐药机制以及药物新靶点的开发提出了迫切需求。因此,本文对当前临床使用的抗生素的作用机制和耐药机理进行了综述,并特别关注了相关领域的最新研究进展,以期望为临床防治细菌耐药和新药研制提供新的视角和参考。

RNA干扰Fus3基因对二态性真菌马尔尼菲青霉菌的孢子形成和细胞壁组分合成功能的影响

马尔尼菲青霉菌Penicillium marneffei是一种重要的条件致病真菌,可致艾滋病患者产生严重的系统性霉菌病并发症。基因组学的研究和RNA干扰技术,为马尔尼菲青霉菌致病基因和致病机制的深入探讨提供了可能。我们研究马尔尼菲青霉菌的一个新基因Fus3,它是丝氨酸/苏氨酸-特异性激酶丝裂原活化蛋白激酶家族的成员。为了研究Fus3的功能,我们利用根癌农杆菌介导的双链RNA干扰技术构建了Fus3 RNA干扰菌株(Fus3-i)。RNA干扰的活性是由木糖诱导的启动子xylP控制的。Fus3基因活性下降后影响了马尔尼菲青霉菌生长,包括孢子的生成,细胞壁组分的合成。实验表明,Fus3基因对于马尔尼菲青霉菌细胞生长发育起着重要的调控作用,为研究真菌疾病提供了帮助。

1例头孢曲松致剧烈腹痛用药分析

注射用头孢曲松钠是第三代头孢菌素,通过抑制细菌的细胞壁合成而起作用的杀菌剂,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有高效杀菌作用,在某些情况下,β-内酰胺酶(包括青霉素酶和头孢菌素酶)仍具有活性,最长的半衰周期为7~8h。由于使用范围较广,由此引发的不良反应问题也越来越多^([1]),本文就1例罕见头孢曲松致剧烈腹痛不良反应分析如下。

替考拉宁的药动学影响因素及治疗药物监测研究进展

替考拉宁为游动放线菌属发酵产生的一种新型杀菌性糖肽类抗菌药物,通过抑制细菌细胞壁合成从而抑制细菌生长,主要针对革兰阳性菌和厌氧微生物。1988年替考拉宁在意大利和法国首次上市,此后陆续在英国、香港、德国、荷兰、瑞士、韩国、巴西、澳大利亚、泰国、日本、比利时、希腊、南非等国家上市。替考拉宁于2000年12月获准进入我国,我国市场上进口替考拉宁（他格适）由赛诺菲-安万特（中国）投资有限公司生产。

柑橘枯水研究进展

枯水是柑橘采后常见的生理性病害,枯水果实糖酸风味急剧劣变、汁胞硬化,严重时不能食用,是制约柑橘产业发展的重要因素。该文从枯水对柑橘产业的影响、枯水与果实品质劣变的关系、枯水果实品质劣变的生物学基础、柑橘枯水防控技术等方面进行综述,并指出目前柑橘枯水研究存在的问题,展望了未来研究,以期推动柑橘枯水研究进展。

结核分枝杆菌L型研究现状与兽医临床

细菌L型（bacterial L-forms）是细菌在体内外受到各种直接或间接损伤细胞壁的理化和生物因素的影响,其细胞壁受到破坏或细胞壁的合成受阻而转化成一种细胞壁缺失或缺陷的细菌（cell Wall-de-ficeint bacteria,CWDB）。结核分枝杆菌（Myco-bacterium Tuberculosis）也同其它细菌一样,在干扰细胞壁合成或破坏细胞壁结构的因素作用下以及在自然生长繁殖的过程中，发生细胞壁缺陷形成L型（MTB—L）。

抗真菌药物的作用机制

近二十年来,真菌感染在免疫受损的病人群体中发病率猛增,其原因包括HIV感染、化疗引起的嗜中性白细胞减少、器官移植引起的免疫抑制、广谱抗生素的滥用以及激素的应用等等,特别引人注意的是HIV感染,据1995年世界卫生组织报告,到2000年,受HIV感染的累积人数将达3000～4000万,80%以上AIDS病人受真菌感染,即使未表现出严重的症状,其口腔含白色念珠菌水平也很高.深部真菌感染已经成为许多疾病的主要死亡原因之一.自发现第一个抗真菌抗生素灰黄霉素以来,该领域取得了长足的进展,相继有多类药物用于临床,表现出不同程度的治疗效果,这些药物的抗菌作用大小、机理以及毒性等不尽相同,因此,研究抗真菌药物的作用机制,了解其毒性机理及耐药菌的产生,可以为寻找更好的高效、低毒、广谱的药物提供分子水平上的重要依据.

流体剪切敏感型海洋灰绿曲霉AgugtA和AgugeA基因的克隆及功能分析

摘要：海洋灰绿曲霉HB1—19的高度剪切敏感性给反应器发酵造成很大困难。曲霉中的UDP-半乳糖基转移酶UgtA和UDP-葡萄糖差向异构酶UgeA对细胞壁的合成起着重要的作用。本文拟研究海洋灰绿曲霉中这两种酶在细胞壁合成中的作用及其与剪切敏感性的关系。首先，采用简并PCR与染色体步移技术克隆了海洋灰绿曲霉AgugtA和AgugeA的基因序列。然后，通过逆转录PCR确定了内含子及编码序列。AgugtA全长1377bp，有4个内含子，分别位于135～192，261～327，552～601，1047～1096bp之间，编码蛋白大小为383个氨基酸。AgugeA全长1322bp，有3个内含子，分别位于30～116，352～420和878～927bp之间，编码蛋白大小为371个氨基酸。通过进化树分析发现，AgugtA和AgugeA在灰绿曲霉及曲霉属其他菌株中有很高的同源性。通过比较海洋灰绿曲霉及模式茵构巢曲霉的AgugeA基因敲除及AgugeA蛋白抑制剂实验发现，AgugeA是海洋灰绿曲霉的必需基因，这可能与海洋灰绿曲霉的高度剪切敏感性有关。

fv-gs6:一个与金针菇菌柄伸长相关的葡聚糖合酶基因

根据金针菇(Flammulina velutipes)基因组及转录组数据,筛选得到1个β-1,6-葡聚糖合酶(β-1,6-glucan synthase)编码基因,命名为fv-gs6.该基因全长1 439 bp,含有9个外显子,8个内含子,编码339个氨基酸.多序列比对及系统进化分析结果表明:fv-gs6编码蛋白(Fv-GS6)具有β-1,6-葡聚糖合酶的保守motif,且与担子菌的β-1,6-葡聚糖合酶聚在同一个分支.生物信息学分析表明:该蛋白具备信号肽、亚细胞定位于细胞外,属于分泌蛋白;推测Fv-GS6蛋白可能直接在细胞外催化β-1,6-葡聚糖的合成.通过qRT-PCR方法检测该基因在子实体不同发育时期的表达量,结果显示:fv-gs6在菌柄上高表达,且在伸长期菌柄表达量最高;其中,菌柄的伸长区段表达量是不伸长区段的5.42倍.根据β-1,6-葡聚糖合酶在真菌细胞壁合成中的功能,推测fv-gs6的高表达可能促进细胞壁合成,参与金针菇菌柄的伸长过程.

水稻脆秆突变体bc16的鉴定和基因精细定位

脆秆突变体是一类研究植物机械强度的重要材料。利用EMS(甲基磺酸乙酯)诱变粳稻品种日本晴,筛选获得一个脆秆突变体,命名为bc16(brittle culm16)。与野生型植株相比,bc16茎秆、叶片和根明显变脆,而株高、穗粒数降低,穗长和主根长变短。茎秆细胞壁成分分析表明,bc16纤维素含量显著低于野生型植株,半纤维素含量则显著增加,而木质素含量差异不显著。突变体bc16薄壁细胞形状无规则、排列紊乱,表皮层下厚壁细胞次生壁和薄壁细胞壁变薄。遗传分析表明bc16突变体由隐性单基因控制,位于水稻第2染色体长臂端InDel标记2-F和2-H间66.6kb的区间内。该区间共有7个候选基因,其中Os02g0738900是bc3脆秆基因的等位基因。测序结果表明,bc16突变体中的Os02g0738900基因从ATG开始第5113位,在第13内含子近末端发生了T→A的置换,导致转录过程中该内含子末端6个核苷酸被剪切到mRNA中,最终导致翻译提前终止。实时荧光定量PCR结果表明Os02g0738900基因在bc16脆秆突变体根、茎、叶中的表达量降低。bc16基因可能通过调控厚壁组织次生细胞壁和薄壁细胞初生壁的合成来影响水稻茎秆机械强度。

广谱头孢呋肟的新型口服制剂——新菌灵

新菌灵(Zinnat)是半合成广谱头孢菌素头孢呋肟(Cefuroxime)的口服酯化前体药。又称为头孢呋肟酯(Cefuroxime axetil)。是由香港葛兰素研究机构开发的新药。该药抗菌活性很弱,口服吸收后迅速被肠粘膜、门脉血或肝内的非特异性酯酶水解释出头孢呋肟呈现强抗菌活性。它能与细菌细胞壁合成所需的青毒素结合蛋白(PBPS)结合,尤其是与PBP3具高亲和力,从而抑制细菌细胞壁合成,继而导致细菌死亡。

头孢菌素家族代代观

β-内酰胺类抗生素通过抑制细菌细胞壁合成实现杀死细菌的作用，对人体的不良反应较小，是当前应用最广泛的一类抗生素；其中头孢菌素无论是在种类还是数量上都是最多的，并且以疗效确切和安全性高被广大医务人员接受。2010年，第五代头孢菌素上市，使头孢菌素家族更加壮大。

疑似头孢噻肟钠引起虎角膜混浊的病例报告

2007年3月和2012年12月,广西南宁市动物园一只亚成体雌性白虎和一只6月龄雄性东北虎分别因胃肠型感冒,上呼吸道感染而使用头孢噻肟钠输液治疗,两例病例都是在用药后第4天出现右眼角膜变浑浊,变白、不透明、视力差症状,经对症治疗后都康复。头孢噻肟钠为第三代头孢菌素,有抗菌谱广,作用强的特点,对大肠杆菌、流感杆菌、沙门杆菌、产气杆菌和克雷伯氏杆菌等有强大活性。