球形芽胞杆菌Cry48Aa/Cry49Aa杀蚊毒素与致倦库蚊中肠上皮细胞复合物的结合特性

Cry48Aa/Cry49Aa毒素是近年来在球形芽胞杆菌IAB59中发现的新型双组分毒素,仅对库蚊具有较高的毒杀作用并能杀死二元毒素(Bin)抗性库蚊,是一种比较有潜力的新型杀蚊毒素蛋白,但目前对Cry48Aa/Cry49Aa毒素的作用模式还不清楚。本研究将cry48Aa和cry49Aa基因在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中表达,纯化毒素的生测结果表明该复合毒素对Bin毒素敏感和抗性致倦库蚊均表现较高的毒杀作用,毒力无显著差异。生物素标记的毒素与致倦库蚊BBMF特异性结合试验表明Cry48Aa和Cry49Aa毒素与两蚊虫品系BBMF都具有较高的结合特异性,Cry48Aa结合能力较高,其解离常数(Kd)分别为(9.5±1.8)和(13.9±2.3)nmol/L;Cry49Aa的解离常数分别为(25.4±3.8)和(28.1±4.2)nmol/L。异源竞争结合试验结果表明Cry48Aa毒素则可以有效地和Cry49Aa毒素竞争结合BBMF蛋白上的结合位点,其IC50分别为(22.1±3.7)和(15.4±2.6)nmol/L,而Cry49Aa不能竞争封闭Cry48Aa毒素与两蚊虫品系BBMF蛋白的结合位点,其IC50均大于17μmol/L。该研究结果可为揭示Cry48Aa/Cry49Aa毒素的作用机制提供一定的研究基础。

胶原涂层煅烧骨-成骨细胞复合物的体内成骨作用

目的观察胶原涂层煅烧骨-成骨细胞复合物植入体内后成骨性能,探讨治疗骨缺损的新方法。方法以牛松质骨制成煅烧骨(TBC),并涂以胶原制成胶原涂层煅烧骨(TBCc),培养兔骨膜成骨细胞(POB),构建复合物TBCc-POB;将该复合物移植到BALB/c裸小鼠背部右侧皮下,4周取材;同时将该复合物植入兔背部右侧肌袋内,8周取材。两种动物均在对侧相应部位植入单纯TBCc作为对照,并在相应时间内取组织块常规处理后光镜、电镜观察。结果植入材料在皮下及肌袋处均有成骨细胞大量生长、增殖,并有软骨组织、骨组织形成,而对照组则没有。结论将TBCc-POB 材料植入体内后,成骨细胞能够存活并产生软骨组织和骨组织。

用流式细胞仪检测血小板P-选择素和血小板-中性粒细胞复合物

用流式细胞仪方法测定血小板的 ＣＤ６２Ｐ和 ＰＮＣ．选 ２５名健康不吸烟自愿者（男 １１名，女 １４名，年龄 ２２－６８岁，平均４２岁）．在用血小板激活物ＡＤＰ前后来评估流式细胞仪检测血小板的方法．ＣＤ６２Ｐ和ＰＮＣ在ＡＤＰ刺激后明显增高［分别为（８．０±２．７）％到（１８．８±６．４）％，Ｐ＜０．０１，（９．４±３．４）％到（１４．５±７．２）％Ｐ＜０．０１）］．论证，流式细胞仪测定血小板的方法是可行的，该方法简便，快速，敏感性高．

Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物在软骨损伤中的应用

背景:体外实验显示,Ⅱ型胶原能诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,但有关Ⅱ型胶原水凝胶制备及其在软骨运动损伤中的修复尚缺乏报道。目的:观察Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物在软骨损伤修复中的作用。方法:取30只新西兰大白兔,建立软骨损伤模型,造模后随机分为2组,每组15只,实验组于软骨损伤处植入Ⅱ型胶原水凝胶-骨髓间充质干细胞复合物,对照组植入Ⅱ型胶原水凝胶。植入后4,8周,取材软骨损伤部位,进行苏木精-伊红染色及甲苯胺蓝染色。结果与结论:(1)实验组:植入后4周,苏木精-伊红染色结果可见炎性细胞浸润,以巨噬细胞为主,存在少量中性粒细胞;甲苯胺蓝染色未见阳性。植入后8周,苏木精-伊红染色下可见大量软骨细胞增殖,有成软骨和肌管形成,并且可见血管再生;甲苯胺蓝染色接近正常组织;(2)对照组:植入后4周,苏木精-伊红染色可见损伤周围间质水肿明显,损伤骨骼肌细胞核消失,存在大量炎性细胞浸润;甲苯胺蓝染色未见阳性。植入后8周,苏木精-伊红染色下可见少许成软骨细胞形成,纤维组织增多;甲苯胺蓝染色未见阳性;(3)结果表明:Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物修复软骨损伤具有良好的成软骨能力。

不同程度低氧培养对多孔钽-人成骨细胞复合物细胞形态及COL-Ⅰ、OC蛋白表达的影响

[目的]探讨低氧培养条件对多孔钽-成骨细胞形态学、增殖能力以及COL-Ⅰ、OC蛋白表达的影响。[方法]选用MG63成骨细胞原代培养及传代。将第3代细胞以1×10~6/L^(-1)细胞浓度接种于多孔钽材料进行复合培养。采用三气培养箱,以20%氧体积分数作为常氧环境,氧体积分数2%作为缺氧环境,同时设1%及3%氧体积分数作为缺氧反应对比条件。实验分组:将多孔钽-成骨细胞复合物分为4组:常氧钽组(对照组),3%缺氧钽组、2%缺氧钽组及1%缺氧钽组(实验组)。CCK-8法检测多孔钽-成骨细胞复合培养第1、3、5、7、9、11 d各组成骨细胞生长和增殖状态;扫描电镜观察缺氧对多孔钽-成骨细胞复合物形态特征影响;透射电镜观察缺氧条件下成骨细胞超微结构改变;免疫细胞化学法检测缺氧各组成骨细胞COL-Ⅰ、OC蛋白的表达。[结果]CCK-8法检测显示缺氧条件下各实验组与对照组比较,细胞随培养时间的延长,成骨细胞生长及增殖速度明显放慢,除第1 d外,其余各时间点OD值差异均有统计学意义(P<0.05);各实验组组间比较除第3 d外,其余时间点各组间比较差异均存在统计学意义(P<0.05),扫描电镜显示在缺氧条件下多孔钽-成骨细胞对缺氧反应表现为体积变小,伪足少而细,只分泌极少量的细胞外基质覆盖于多孔钽表面。透射电镜显示:在缺氧条件下钽-成骨细胞复合培养与常氧培养的成骨细胞相比,线粒体、内质网扩张,空泡样变性,线粒体嵴断裂或消失。免疫细胞化学检测结果得出:缺氧条件下各实验组成骨细胞COL-Ⅰ、OC蛋白表达较对照组显著降低(P<0.05)。[结论]多孔钽-成骨细胞复合物在缺氧条件下成骨细胞增殖能力降低,细胞形态及超微结构改变,功能降低以及成骨蛋白COL-Ⅰ、OC表达降低。提示:监测骨缺损局部氧分压将有助于三维结构骨移植材料内部成骨细胞生长及骨形成量。

Hsp70-H22肿瘤细胞肽复合物与树突状细胞成熟的关系

探讨热休克蛋白 70 (Hsp70 ) - H2 2肽复合物与小鼠骨髓来源的树突状细胞 (dendritic cell,DC)成熟之间的关系。采用 GM- CSF、IL- 4刺激培养小鼠骨髓细胞 ,增殖产生大量 DCs;从 H2 2肝癌细胞中获取肿瘤细胞肽 ,体外与Hsp70进行结合 ,结合产物修饰 DC,通过细胞因子检测试剂盒和流式细胞仪对修饰的 DCs上清液和 DCs膜表面分子进行检测。发现 Hsp70 - H2 2肽复合物修饰的 DCs大量分泌 IL- 12、TNF- α、IL- 1β等细胞因子 ,并且高表达主要组织相容性 类抗原 (MHC 类 )、 CD80、 CD40等分子 ,而单独的 Hsp70或 H2 2肽则不具有此作用。结果提示 :Hsp70 - H2 2肽复合物可诱导 DC成熟 ,这种成熟的

麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎大鼠行为学和红细胞C3b受体及红细胞免疫复合物花环率的影响

目的:观察麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎大鼠(AR)和红细胞免疫的影响。方法:采用10%二异氢酸甲苯酯(TD I)橄榄油溶液给大鼠滴鼻造成的变应性鼻炎大鼠模型,观察麻黄细辛附子汤对大鼠行为学和红细胞C3b受体及红细胞免疫复合物花环率的影响。结果:麻黄细辛附子汤能够显著减少大鼠鼻分泌物量、喷嚏次数和鼻抓痒次数,使红细胞C3b受体和红细胞免疫复合物花环率升高。结论:麻黄细辛附子汤对实验性变应性鼻炎大鼠有明显作用,其机制可能与红细胞C3b受体和红细胞免疫复合物花环率升高有关。

心肌梗死患者C_(3b)受体和红细胞免疫复合物受体变化

目的 观察急性心肌梗死患者溶栓治疗前后红细胞C3b受体 (RBC -C3bR)及红细胞免疫复合物受体(RBC -ICR)的变化。方法 与健康对照组相比 ,观察急性心肌梗死患者应用rt-PA治疗前后RBC -C3bR及RBC -ICR的变化。结果 心肌梗死急性期RBC -C3bR明显减低 (p <0 .0 1) ,RBC -ICR增高 (p <0 .0 1) ;经rt-PA治疗后14天后 ,上述免疫紊乱有所恢复。结论 急性心肌梗死患者红细胞免疫粘附功能异常 ;应用rt-PA溶栓治疗后可得到改善。

光系统I捕光天线及反应中心、细胞色素b6f复合物的结构与功能研究2011年度报告

该研究旨在揭示光合膜色素蛋白复合体——光系统I捕光天线及核心复合体、细胞色素b6f复合物的结构与功能。通过多种光谱学技术研究光能的吸收传递和转化的量子机理,并通过获得膜蛋白晶体,在近原子或原子水平分辨率解析膜蛋白的空间结构,揭示光合作用的物质基础,更深刻地理解光合作用机理。该报告还将研究参与光合膜组装、光能转换和利用及功能调控有关的重要基因以及相应的蛋白的结构与功能,揭示光合作用中光抑制和光氧化调控的分子机理,为提高光能利用效率提供理论依据。

Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物的构建及在滑膜肉瘤小鼠模型上的应用

目的建立Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物并利用复合物制作移植瘤动物模型,为其他软组织肿瘤动物模型的建立提供思路。方法培养扩增SW982细胞,消化收集细胞,用Metrigel对SW982细胞进行重悬,同时加入VEGF,应用Transwell制作Metrigel-VEGF-SW982细胞支架复合物,并进行培养,HE染色观察细胞支架复合物形态结构。选取10只4周龄雌性SCID小鼠,随机分成支架组和对照组。支架组小鼠腋下移植细胞支架复合物,对照组注射移植细胞培养基悬液。8周后,比较两组造模成功率,取材HE染色观察肿瘤的组织形态特点。结果利用Metrigel对SW982细胞进行立体式培养,能够很好的模拟细胞在体的生长状态。采用细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,成瘤率较对照组明显提高,且肿瘤体积更大,细胞密度更高,肿瘤内部有新生血管。结论利用MetrigelVEGF-SW982细胞支架复合物构建滑膜肉瘤动物模型,能够极大地提高模型成瘤率,为滑膜肉瘤的研究提供便利。

脂肪干细胞复合生物可降解材料体外构建组织工程尿道支架

背景:研究表明脂肪干细胞具有向尿路上皮细胞分化的能力,可作为尿道组织工程重建的种子细胞。为此,作者进行研究制作一种携带脂肪干细胞的新型尿道组织工程支架。目的:探讨利用人脂肪干细胞及聚乳酸/胶原材料构建新型组织工程尿道支架的可行性。方法:采用吸脂术中废弃的脂肪组织,进行脂肪干细胞的分离、培养并扩增;以胶原及聚乳酸为原料,采用溶剂挥发法及电纺丝法制备新型尿道支架,根据是否加入胶原,将支架分为含胶原组和无胶原组,将脂肪干细胞种植于上述两种尿道支架上复合培养7 d后,行MTT、活死染色、苏木精-伊红染色,评估人脂肪干细胞在尿道组织工程支架上的生长情况。结果与结论:①脂肪干细胞种植于支架7 d后,含胶原组细胞生长状态良好,表面形成两三层细胞,部分细胞浸润生长进入支架内部;无胶原组细胞分布密度低,仅形成一两层细胞,主要存在于支架的表面;②含胶原组支架上有90%以上的种植细胞为活细胞,提示细胞在支架表面存活状态良好,无胶原组支架上的细胞状态较差,仅有50%左右的活细胞;③含胶原组细胞呈持续增殖的趋势,更加适合细胞的生长与增殖;④结果表明,人脂肪干细胞及生物可降解材料聚乳酸/胶原可以用于构建组织工程尿道支架,为尿道损伤修复重建提供了新方法。

兔出血症病毒—红细胞膜复合物的特性及在血清学试验中应用的研究

我国学者于1984年首先发现兔病毒性出血症,随后在很多其他国家发现了本病,其所致的死亡率很高。尽管各国学者对该病毒在细胞上的适应和繁殖进行了大量的工作,但几乎没有成功的报道。

光系统I捕光天线及反应中心、细胞色素b6f复合物的结构与功能研究立项报告

该课题旨在揭示光合膜色素蛋白复合体棗光系统I捕光天线及核心复合体、细胞色素b6f复合物的结构与功能。通过多种光谱学技术研究光能的吸收传递和转化的量子机理,并通过获得膜蛋白晶体,在近原子或原子水平分辨率解析膜蛋白的空间结构,揭示光合作用的物质基础,更深刻地理解光合作用机理。该课题还将研究参与光合膜组装、光能转换和利用与功能调控有关的重要基因以及相应的蛋白的结构与功能,揭示光合作用中光抑制和光氧化调控的分子机理,为提高光能利用效率提供理论依据。

变应性鼻炎中lncRNA-miRNA-mRNA网络构建与相关程序性细胞死亡基因的分析

目的 本研究旨在探讨lncRNA介导的ceRNA网络在变应性鼻炎(AR)病理生理过程中的作用及其在程序性细胞死亡(PCD)中的潜在调控功能。方法 纳入AR患者与正常人,取全血进行RNA测序分析,筛选差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA用于构建基于ceRNA理论的lncRNA-miRNA-mRNA调控网络。采用基因本体(GO)和KEGG富集分析来预测ceRNA网络中mRNA的潜在生物学功能。随后,将差异表达的mRNA与PCD相关基因相互取交集,并依据交集mRNA构建新的ceRNA网络,同时对ceRNA网络中mRNA进行靶器官定位网络分析。结果 基于生物信息学分析,共提取5个lncRNA、4个miRNA和46个mRNA,构建AR中lncRNA介导的上调及下调的ceRNA网络。功能富集分析显示其在“钙信号通路”、“PI3K/AKT信号通路”及“ERK1和ERK2级联”等中显著富集。并对AC008394.1及人类组织相容性白细胞抗原复合物P5(HCP5)2个lncRNA构建PCD相关ceRNA调控网络。在对ceRNA网络中mRNA进行靶器官定位分析中发现,它们多在神经免疫相关器官中表达。结论 本研究构建了AR中新的ceRNA网络,初步探索了HCP5介导的ceRNA网络可能通过影响细胞凋亡对AR发挥作用。为AR发病机制的研究提供了新的见解和潜在的研究方案。

类风湿性关节炎患者滑膜组织lncRNA HCP5表达上调并与免疫细胞浸润相关

目的通过机器学习筛选类风湿性关节炎(RA)滑膜中潜在发病相关长链非编码RNA(lncRNA)及与各种免疫细胞浸润的相关性。方法通过基因表达数据集(GEO)数据库获取多个RA滑膜的基因芯片数据,归一化后通过多种机器学习方法筛选并取交集得到关键的lncRNA。使用估计已知RNA转录本的相对子集识别细胞类型(CIBER⁃SORT)算法计算滑膜中22种免疫细胞浸润情况,计算关键lncRNA与免疫细胞的相关性,最后通过实时定量PCR验证关键lncRNA在RA滑膜细胞中表达情况。结果筛选出RA关键lncRNA人类白细胞抗原复合物P5(lncRNA HCP5)。免疫浸润分析显示,在RA滑膜组织中,CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞比例升高而M2型巨噬细胞的比例减少。lncRNA HCP5的表达与CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞呈正相关。实时定量PCR结果显示在RA滑膜细胞lncRNA HCP5表达上调。结论lncRNA HCP5在RA滑膜细胞表达上调,可能与滑膜免疫细胞的浸润有关。

血清sICAM-1和TGF-β1水平、RBC-ICR率及淋巴细胞比例与剖宫产术后发生产褥感染的关系

目的 分析血清可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平、红细胞免疫复合物花环(RBC-ICR)率、淋巴细胞比例与剖宫产术后发生产褥感染的关系。方法 选取108例剖宫产术后发生产褥感染的产妇作为研究组,依据感染程度将其分为轻度组(41例)、中度组(35例)与重度组(32例)。另选取剖宫产术后未发生产褥感染的60例产妇作为对照组。比较研究组与对照组之间,以及轻度组、中度组与重度组之间产前血清sICAM-1和TGF-β1水平、 RBC-ICR率、淋巴细胞比例。采用多因素Logistic回归模型分析影响剖宫产术后发生产褥感染的因素。结果 研究组的产前血清sICAM-1和TGF-β1水平、 RBC-ICR率、淋巴细胞比例高于对照组(P<0.05)。轻度组、中度组、重度组的产前血清sICAM-1和TGF-β1水平、 RBC-ICR率及淋巴细胞比例依次升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,校正混杂因素后,产前血清TGF-β1水平、RBC-ICR率、淋巴细胞比例是剖宫产术后发生产褥感染的独立影响因素(P<0.05)。结论 剖宫产术后发生产褥感染的产妇产前血清sICAM-1和TGF-β1水平、 RBC-ICR率、淋巴细胞比例升高,且四项指标均随着感染程度的加重而升高。产前血清TGF-β1水平、RBC-ICR率、淋巴细胞比例升高的产妇,其剖宫产术后发生产褥感染的风险增加。

临床大剂量输注两种不同红细胞悬液的疗效评估

目的评估红细胞悬液经滤除白细胞后降低输血副作用的效果。方法选取1998年1月~2001年10月间148份大剂量输血的手术病历,记录红细胞悬液或去白细胞红细胞悬液输注前、输注1d后的指标,包括白细胞计数(WBC)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)、血K和Ca离子浓度、pH值,并比较非溶血性发热反应(FNHTR)的发生率,分析两种成分输血对患者机体的影响。结果在红细胞悬液输注组,术后GOT、ALT、Cr、WBC、GLU、IB、TB的增高与红细胞悬液输注有关(P<0.05),血钾、钙离子浓度和pH的变化不显著(P>0.05);在白细胞去除组,手术前后各项指标的变化均不显著(P>0.05)。输注红细胞悬液组FNTHR发生率为75.6%。结论去白细胞红细胞悬液在大剂量输血中的应用,可有效防止FNTHR的发生,降低因红细胞悬液中白细胞和血小板-白细胞复合物(PLA)对患者机体造成的损伤。

胆管癌和胆总管结石患者胆汁中钙卫蛋白检测的临床意义

目的 探讨胆管癌和胆总管结石患者胆汁中钙卫蛋白水平的差异。方法 收集2021年5月—2022年9月安徽医科大学第一附属医院行ERCP诊治的胆管癌(n=34)和胆总管结石(n=78)患者的临床资料和胆汁标本。采用荧光免疫层析法检测胆汁中钙卫蛋白、血红蛋白和乳铁蛋白水平。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验;计数资料两组间比较采用χ^(2)检验;相关分析采用Spearman相关性检验;DeLong检验比较不同受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)的差异。结果 与胆总管结石组比较,胆管癌患者胆汁中钙卫蛋白水平升高[4 795.50(2 286.79~20 179.73)ng/mL vs 411.16(67.03~1 991.88)ng/mL,Z=5.572,P<0.001],同时氯化物水平升高[115.70(109.10~125.50)mmol/L vs 106.60(98.60~114.40)mmol/L,Z=2.702,P=0.007]。进一步将胆管癌分为高位胆管癌和低位胆管癌,两组钙卫蛋白比较差异无统计学意义[3 867.71(2 235.66~26 407.40)ng/m L vs 4 795.50(2 361.15~13 070.53)ng/m L,Z=0.129,P>0.05]。胆汁钙卫蛋白水平与胆汁白细胞计数、血红蛋白、乳铁蛋白水平具有相关性(r值分别为0.316、0.353、0.464,P值均<0.05)。ROC曲线结果示胆汁钙卫蛋白(敏感度79.4%,特异度75.6%)、血CA19-9水平(敏感度82.4%,特异度78.2%)以及两者联合(敏感度88.2%,特异度73.1%)对诊断胆管癌具有良好的敏感性和特异性。结论 胆管癌患者胆汁中钙卫蛋白水平升高,可能成为胆管癌诊断的生物标志物。

高住低练对游泳运动员红细胞免疫分子表达及功能的影响

目的:研究高住低练(HiLo)及恢复期女游泳运动员红细胞免疫功能的变化;方法:2周HiLo开始前、训练中及恢复1周后检测6名运动员红细胞免疫功能的变化,研究内容涉及红细胞CR1黏附功能和CR1、CD55、CD59分子表达;结果:2周HiLo期间RBC-C3bRR明显下降,RBC-ICR升高(P<0.05),恢复1周后,两个指标已恢复到训练前水平,红细胞CR1数量无明显降低,但恢复1周后CR1数量显著性升高(P<0.05);HiLo期间红细胞CD55、CD59数量相比训练前明显增加(P<0.05),而恢复1周后CD55、CD59表达继续增加并明显高于训练前和训练期间的水平(P<0.05);结论:2周HiLo明显抑制了运动员红细胞CR1免疫黏附功能,恢复1周后CR1黏附功能及数量已经恢复,CD55、CD59高表达有利于红细胞抵御补体的攻击,防止溶血。

复方中药多糖对鸡红细胞免疫功能的影响

为研究最佳纯度多糖对雏鸡红细胞免疫功能的影响规律,本试验将350羽雏鸡随机分为7组(空白对照组,免疫对照组,盐酸左旋咪唑组,黄芪多糖组,最佳纯度复方中药多糖高剂量、中剂量、低剂量组),于雏鸡8～14日龄时给药,分别在雏鸡15、22、29、36、43、50日龄时采集血样,测定红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率。结果显示,中、低剂量复方中药多糖组显著高于其他4组,且以中剂量复方中药多糖组效果最好;高剂量组也可提高免疫效果,但效果不显著。