纤溶酶原激活物抑制因子1在腹膜透析患者中的表达变化及对基质金属蛋白酶-2/血管内皮生长因子/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的调控作用

目的揭示纤溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)在腹膜透析患者中的表达及其功能。方法选择100例腹膜透析患者作为研究对象,透析7个月后,根据腹膜平衡试验结果将患者分为高转运组和低转运组。透析1个月时和7个月时,使用酶联免疫吸附测定试剂盒检测所有患者透析液中PAI-1、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平。对C57/BL6小鼠连续28 d腹腔注射3 mL含4.25%葡萄糖的腹膜透析液来建立腹膜纤维化(peritoneal fibrosis,PF)小鼠模型。将小鼠按随机数字表法分为3组(n=12):对照组、PF+si-NC组和PF+si-PAI-1组。PF+si-NC组和PF+siPAI-1组小鼠分别腹腔注射300μL阴性对照siRNA(si-NC)或靶向PAI-1的siRNA(si-PAI-1)。通过蛋白质印迹法检测PAI-1、MMP-2、VEGF、磷酸化血管内皮细胞生长因子受体2(phosphorylated vascular endothelial growth factor 2,pVEGFR2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,pErk)的蛋白表达。通过免疫组织化学染色检测巨噬细胞表面标志物(macrophage surface markers,CD68)、VEGF和血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)的阳性表达。结果与透析1个月时相比,透析7个月后患者透析液中PAI-1、MMP-2和VEGF的水平均显著升高(P<0.05)。与低转运组相比,高转运组患者透析液中PAI-1、MMP-2和VEGF的水平均显著升高(P<0.05)。PAI-1、MMP-2和VEGF联合诊断高转运的曲线下面积(area under curve,AUC)、敏感性和特异性依次为0.909、82.61和92.45。与PE+siNC组比较,PE+si-PAI-1组的间质细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积和炎症细胞浸润明显减轻。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织的CD68、VEGF和CD31阳性率降低(P<0.05)。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织的PAI-1、MMP-2、VEGF、pVEGFR2和pErk的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论本研究显示PAI-1、MMP-2和VEGF的联合诊断对腹膜溶质转运速率具有较高的诊断价值。下调PAI-1可能通过抑制MMP-2/VEGF/细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路来抑制血管生成,从而抑制腹膜纤维化。

酪氨酸激酶受体B-脑源性神经营养因子信号传导通路对神经母细胞瘤细胞分泌血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptorB，TrkB）-脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor，BDNF）信号传导通路对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞SH-SY5Y分泌血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的影响。方法用全反式维甲酸（all—trans retinoic acid，ATRA）诱导SH—SY5Y细胞表达TrkB，加入外源性BDNF，从而激活TrkB—BDNF信号传导通路及其3条下游信号通路。再用特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a阻断TrkB—BDNF信号传导通路；用磷脂酰肌醇-3激酶（phos—phatidylinositol 3-hydroxy kinase，P13K）抑制剂LY294002、磷脂酶C抑制剂U73122、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126分别阻断TrkB-BDNF的3条相应下游信号传导通路。采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中VEGF及MMP-9含量。结果ATRA＋BDNF组VEGF[（485．89±109．99）pg／ml]及MMP-9[（15．73±1．72）pg／ml]含量明显高于对照组及ATRA组（P〈0．05）；ATRA＋BDNF＋K252a组VEGF[（272．42±86．33）pg／ml]及MMP-9[（5．25±1．44）pg／ml]含量明显低于ATRA＋BDNF组（P〈0．05），与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；ATRA＋BDNF＋LY294002组VEGF[（314．12±24．68）pg／ml]及MMP-9[（4．91±1．08）pg／ml]含量明显低于ATRA＋BDNF组（P〈0．05），与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；ATRA＋BDNF＋U73122组VEGF[（444．08±64．49）pg／ml]及MMP-9[（13．28±3．38）pg／ml]含量与ATRA＋BDNF组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。ATRA＋BDNF＋U0126组VEGF[（429．97±19．95）pg／ml]及MMP-9{（13．96±4．45）pg／ml]含量与ATRA＋BDNF组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论激活TrkB-BDNF信号传导通路可促进NB细胞合成、分泌VEGF及MMP-9。TrkB—BDNF信号传导通路可能通过进一步激活其下游P13K／Akt通路来促进VEGF及MMP-9的合成及分泌，用K252a阻断TrkB—BDNF信号通路、LY294002阻断其下游P13K通路均可有效抑制NB细胞合成及分泌VEGF及MMP-9。

七氟烷调节ERK-VEGF/MMP-9通路抑制胶质瘤细胞侵袭、迁移的实验研究

目的:探讨七氟烷抑制胶质瘤细胞侵袭、迁移的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶-9(MMP-9)通路的影响。方法:不同气体浓度七氟烷处理人胶质瘤U251细胞24 h,分为空白对照组(0%)、七氟烷低(1.7%)、中(3.4%)、高(5.1%)剂量组和阳性对照组(多柔比星,75 nmol·L^(-1)),采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、改良Matrigel Boyden室测定法和划痕试验法检测细胞存活率、侵袭能力和迁移能力,采用蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞ERK、VEGF和MMP-9蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,七氟烷低、中、高剂量组及阳性对照组人胶质瘤U251细胞存活率、侵袭细胞数、细胞迁移率和ERK、VEGF、MMP-9蛋白表达量均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);七氟烷高剂量组和阳性对照组作用相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:七氟烷能够抑制人胶质瘤U251细胞的侵袭及迁移能力,其机制可能与降低ERK-VEGF/MMP-9信号通路相关蛋白表达量有关。

基因转染DKK1对17β-雌二醇促进子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞VEGF和MMP-9表达的影响

目的利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/-βcatenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17-βE2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/-βcatenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用。方法体外分离培养内异症患者ESCs,利用LipofectamineTM2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs。选用10-10mol/L 17β-E2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果 17-βE2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10-10mol/L作用48 h最明显(P<0.05)。转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均P<0.05)。结论阻断Wnt/-βcatenin信号通路能明显抑制17-βE2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用。雌激素可能通过激活Wnt/-βcatenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植。

丹参多酚酸对心房颤动大鼠心肌组织中VCAM-1和ICAM-1水平及ERK1/2-NF-κB信号通路的影响

目的:研究丹参多酚酸对心房颤动(房颤)大鼠心肌组织中血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平及细胞外信号调节酶1/2-核转录因子-κB(ERK1/2-NF-κB)信号通路的影响,探讨丹参多酚酸防治房颤的可能机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组、房颤组和丹参多酚酸组,每组16只。舌下静脉注射氯化钙-乙酰胆碱混合液建立房颤大鼠模型。丹参多酚酸组大鼠用丹参多酚酸(4 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,对照组和房颤组大鼠用等量生理盐水灌胃,每天1次,共4周。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态表现,Masson染色观察心肌纤维化情况,免疫组织化学染色检测各组大鼠心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中VCAM-1、ICAM-1、ERK1/2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、NF-κB和磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)蛋白表达水平。结果:HE染色,对照组大鼠心肌细胞未见明显异常;房颤组大鼠心肌组织间质增多,可见炎性细胞浸润;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌组织间质稍多,炎性细胞浸润不明显。Masson染色,对照组大鼠心肌间质胶原纤维正常;房颤组大鼠心肌间质胶原纤维明显增多;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌间质胶原纤维较房颤组明显减少。与对照组比较,房颤组和丹参多酚酸组大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9、VCAM-1、ICAM-1、p-ERK1/2和p-NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.05);与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9、VCAM-1、ICAM-1、p-ERK1/2和p-NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.05)。房颤组大鼠心肌组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与VCAM-1(r=0.435,P<0.01;r=0.512,P<0.01)和ICAM-1(r=0.486,P<0.01;r=0.579,P<0.01)蛋白表达水平呈正相关关系。结论:丹参多酚酸可通过抑制房颤大鼠心房组织ERK1/2-NF-κB信号通路激活,降低VCAM-1和ICAM-1水平,抑制心肌纤维化,从而发挥对房颤的治疗作用。

AgNP敷料促进深度烧伤致慢性难愈性创面修复的效果及VEGF/MMP-9信号通路机制研究

目的研究稳定剂合成纳米银(AgNP)敷料促进深度烧伤致慢性难愈性创面修复的效果及血管内皮细胞生长因子/基质金属蛋白酶-9(VEGF/MMP-9)信号通路机制。方法前瞻性选取2019年5月至2021年6月首都医科大学附属北京中医医院收治的74例深度烧伤致慢性难愈性创面患者作为研究对象,采用随机数字表法分为试验组(n=37)和对照组(n=37)。对照组患者接受常规伤口处理,试验组则在对照组基础上给予AgNP敷料治疗。对比两组患者治疗前后创面病原菌阳性率、伤口肉芽形态评分、VEGF以及MMP-9水平;对比两组患者不良反应发生率。结果治疗后,试验组创面病原菌阳性率为16.21%,显著低于对照组(37.83%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组伤口肉芽形态评分为(0.89±0.14)分,显著低于对照组[(1.56±0.21)分],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组血清VEGF为(736.98±10.55)pg/mL,显著高于对照组[(683.64±10.57)pg/mL],MMP-9为(2.08±0.52)μg/L,显著低于对照组[(3.54±0.61)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组与对照组不良反应发生率相比(2.70%vs.5.40%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于AgNP深度烧伤致慢性难愈性创面患者,AgNP敷料对于创面的修复效果较高,可降低MMP-9并提高VEGF,且安全性较高。

熊果酸对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及ERK-VEGF/MMP-9通路的影响

目的:探讨熊果酸对子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶9(MMP-9)通路的影响。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型组、熊果酸低(100 mg·kg^-1)、中(250 mg·kg^-1)、高(500 mg·kg^-1)剂量组、孕三烯酮(60 mg·kg^-1)组,每组12只,另取12只设为假手术组。造模后以熊果酸及孕三烯酮灌胃治疗,1次/d,持续给药7 d。给药结束24 h后处死大鼠,观察药物对大鼠异位子宫内膜体积生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色检测各组大鼠异位子宫内膜组织中CD31表达情况;采用免疫酶联吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中VEGF和MMP-9水平;采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测大鼠异位子宫内膜组织中VEGF、MMP-9 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠异位子宫内膜组织中ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、VEGF、MMP-9蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠CD31阳性细胞表达、血清中VEGF及MMP-9水平、异位子宫内膜组织中VEGF及MMP-9mRNA水平、异位子宫内膜组织中p-ERK/ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组相比,熊果酸组大鼠CD31阳性细胞表达、血清中VEGF及MMP-9水平、异位子宫内膜组织中VEGF及MMP-9 mRNA水平、异位子宫内膜组织中p-ERK/ERK、VEGF及MMP-9蛋白表达均显著降低(P<0.05),异位子宫内膜生长抑制率升高(P<0.05)且熊果酸各剂量组之间呈剂量依赖性;熊果酸高剂量组和孕三烯酮组相比,差异无统计学意义(P>0.05);ERK蛋白表达各组之间无明显变化(P>0.05)。结论:熊果酸可抑制子宫内膜异位症模型大鼠内膜血管生成,可能是通过下调ERK-VEGF/MMP-9通路来实现。

平喘宁调节ERK信号通路干预哮喘气道重塑的机制

目的通过观察平喘宁干预后哮喘模型大鼠ERK信号转导通路相关蛋白以及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达,探讨平喘宁调节寒性哮喘大鼠气道重塑的机制。方法采用SPF级雄性SD大鼠复制寒性哮喘模型。将大鼠随机分成正常对照组,模型组,地塞米松组,桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组。连续给药4周后,光镜下观察肺组织病理形态学变化,采用免疫组织化学法检测肺组织中TIMP-1、MMP-9表达水平;采用Western blot法检测大鼠肺组织血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)、细胞外信号调节激酶-1(extracellular signal-regulated kinase 1,ERK1)、磷酸化细胞外信号调节激酶-1(phosphorylated ERK1,p-ERK1)的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组有明显炎性细胞浸润、气管上皮脱落增多、气管平滑肌增厚等气道重塑现象;与模型组比较,各治疗组炎性细胞浸润减少,气管上皮脱落减少,平滑肌增厚情况改善,气道重塑均得到适当缓解。与正常对照组比较,模型组MMP-9、TIMP-1的表达水平显著升高(P<0.05);而与模型组比较,平喘宁各剂量组MMP-9、TIMP-1表达水平均显著下降(P<0.05),尤其是平喘宁高剂量组下降最为明显。与正常对照组比较,模型组PDGF以及ERK1、p-ERK1蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而与模型组比较,药物治疗组PDGF以及ERK1、p-ERK1蛋白的表达水平均显著下降(P<0.05)。结论平喘宁可通过调节ERK信号通路减轻哮喘大鼠气道炎性反应,延缓气道重塑。

原儿茶酸对子宫内膜异位症大鼠炎症反应及血管生成的作用机制研究

目的:观察原儿茶酸(Protocatechuic acid,PA)对大鼠子宫内膜异位症(heterotopia endometriosis,EMS)组织血管生成的作用及机制。方法:选择动情期雌性SD大鼠,通过子宫内膜自体缝合术建立SD大鼠的EMS疾病模型,将54只SD大鼠随机均分为空白组、模型组、PA(高、中、低)剂量组和孕三烯酮组,PA各剂量组和孕三烯酮组每天灌胃给药1次,模型组给予等容积的生理盐水,连续灌胃28d,空白组大鼠正常喂养。测量大鼠的异位组织体积,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠腹腔积液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及白介素1β(IL-1β)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测组织中血管生成素(Ang)-1和Ang-2水平、血清及组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量、组织中总细胞外信号调节激酶1/2(t-ERK1/2)和磷酸化总细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠14d、42d的病灶体积升高,腹腔液炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β均显著升高,子宫内膜组织Ang-1、Ang-2蛋白表达均显著升高,血清中VEGF和MMP-2、MMP-9蛋白表达均显著升高,子宫内膜异位症组织中p-ERK1/2、VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均显著升高(P<0.05)。原儿茶酸低剂量组、原儿茶酸中剂量组、原儿茶酸高剂量组呈浓度依赖性负向调控上述指标的变化(P<0.05)。结论:原儿茶酸可减轻子宫内膜异位症大鼠创面损伤,抑制炎症反应和血管生成,其潜在的机制可能与失活ERK/VEGF/MMP通路有关。

ERK-VEG FMMP-9信号通路与直肠癌细胞增殖和血管新生的关联

为了探讨ERK-VEGFMMP-9信号通路与直肠癌细胞增殖和血管新生的关联,本研究以不同浓度(10~100μmol/L)的丙泊酚处理HT-29细胞0、48 h、72 h,研究丙泊酚对HT-29细胞中ERK、MMP-9和VEGF的影响,并利用Western blotting法观察HT-29细胞中ERK1/2、MMP-9和VEGF的表达量与信号通路之间的关系。观察丙泊酚处理后对HT-29细胞增殖能力、血管生成能力、细胞侵袭能力的影响。研究结果表明,在细胞中,VEGF与MMP-9蛋白的表达,均随着丙泊酌剂量的增加而呈现逐渐减少的趋势。与对照组相比,50μmol/L组与100μmol/L组降低(p<0.05);细胞内VEGF和MMP-9蛋白的表达量随药物处理时间的增加而逐渐降低,与0 h相比,48 h组和72h组降低(p<0.05)。细胞中pERK与ERK的比率随着丙泊酌剂量的增加而逐渐降低。与对照组相比,50μmol/L组与100μmol/L组降低(p<0.05),pERK与ERK的比率随着用药时间的增加而逐渐降低。与0相比,48 h组与72 h组降低(p<0.05)。与0剂量相比,丙泊酚加PMA组MMP-9蛋白的表达量显著升高,50μmol/L组和100μmol/L组增加(p<0.05),丙泊酚加PMA组MMP-9蛋白的表达量随着时间的增加而明显的增加,与0h相比,48 h和72 h增加(p<0.05)。与0组相比,丙泊酚加PMA组VEGP的表达量明显增加,50μmol/L组和100μmol/L组增加(p<0.05),丙泊酚加PMA组VEGP的表达量随时间增加而增加,与Oh相比,48h和72h显著增加(p<0.05)。25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组Eca109细胞的增殖力、细胞中CAM的新生血管的生成、细胞的侵袭力与对照组相比均显著增加(p<0.05),48 h组、72 h组Eca109细胞的增殖力、细胞中CAM的新生血管的生成、细胞的侵袭力与对照组相比均显著增加(p<0.05)。丙泊酚通过ERK-VEGF/MMP-9的信号的调制,从而抑制人类的HT-29细胞的增殖、侵袭的体外和血管的生成。

激活蛋白-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的相关性研究

目的探讨激活蛋白-1(AP-1)在结直肠癌及癌周组织中与DNA探针结合活性的变化及AP-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的关系。方法采用电泳迁移率分析方法,检测30例结直肠癌手术切除标本及癌旁2cm、5cm组织和远癌切端组织中AP-1与DNA探针的结合活性;采用定量逆转录聚合酶链式反应方法检测各位点血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA转录水平。结果结直肠癌组织AP-1与DNA探针的结合活性明显高于癌旁5cm组织和远癌切端组织(P<0.01);结直肠癌组织AP-1结合活性与肿瘤浸润程度、淋巴结转移呈明显正相关(P<0.01),而与肿瘤组织学分型以及肿瘤分化程度无显著相关性(P>0.05)。结直肠癌组织VEGF、MMP-9mRNA转录水平明显高于癌旁组织和癌远切端组织(P<0.01,P<0.05)。结直肠癌组织AP-1结合活性增强与VEGF、MMP-9高表达显著相关(P<0.01)。结论AP-1信号转导通路与结直肠癌浸润和转移过程密切相关;此通路的活化参与肿瘤转移过程中肿瘤新生血管生成和细胞外基质降解。

二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β/ERK/MMP-9通路及上皮间质转化的影响

目的探讨二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法以0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0mmol/L二甲双胍作用48h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞活力以筛选合适的二甲双胍作用浓度;将体外培养的HK-2细胞分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高渗组(24.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+7.5 mmol/L二甲双胍)和高糖+15 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+15 mmol/L二甲双胍),倒置显微镜观察各组HK-2细胞形态,免疫印迹法(Western blotting)检测各组HK-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β(TGF-β)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β、ERK、MMP-9 mRNA表达水平。结果与对照组相比,30.0、60.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显升高,120.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显降低(P<0.05),而7.5、15.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高渗组细胞形态无明显改变,且细胞中α-SMA、E-cadherin、TGF-β、MMP-9蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),但高糖组细胞失去原有形态变为长梭形,且细胞中α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显升高,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与高糖组比较,高糖+7.5mmol/L二甲双胍组、高糖+15.0mmol/L二甲双胍组细胞形态由长梭形逐渐变成圆形或椭圆形,且α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显降低,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且高糖+15.0 mmol/L二甲双胍组细胞上述指标变化幅度大于高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组。结论二甲双胍可抑制高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β/ERK/MMP-9通路活化有关。

宫腔粘连患者子宫内膜厚度及相关因子变化在宫腔镜手术联合激素治疗中的临床意义

目的探讨宫腔粘连患者宫腔镜手术联合激素治疗后子宫内膜厚度和相关因子表达情况变化。方法选取2020年1月至12月湖南省株洲市妇幼保健院收治的100例中重度宫腔粘连患者作为研究对象。所有患者在宫腔镜下粘连分离术后给予人工周期治疗。连续治疗3个月。统计治疗前、治疗3个月后经量改善情况及子宫内膜形态变化,统计治疗前、治疗3个月后血清及宫腔粘连组织周围的内膜中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(HAb18G)、转录调节因子叉头框F2(FoxF2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、雌激素受体(ER)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平变化。结果与治疗前比较,治疗3个月后,患者月经量、子宫内膜腺体数增多,子宫内膜厚度增厚,子宫内膜纤维化面积比、血清及宫腔粘连组织周围的内膜中HAb18G、FoxF2、TGF-β1、CTGF、VEGF及IGF-1表达降低,ER升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫腔粘连患者子宫内膜状态及月经量异常,伴有子宫内膜纤维化的发生,而宫腔粘连的发生发展可能与HAb18G、FoxF2、ER、TGF-β1、CTGF、VEGF及IGF-1的异常表达有关,临床可据此对宫腔粘连进行早期预测及预防,并评估其临床治疗效果。

ERK抑制剂对1型糖尿病模型小鼠血管内损伤后内膜增生的抑制作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD98059对1型糖尿病模型血管内损伤后内膜增生的抑制作用。方法将实验动物分为3组,假手术组,1型糖尿病模型血管内损伤组,PD98059干预组。各组小鼠于颈动脉损伤后第28天处死并取右颈总动脉,检测颈动脉管腔面积、内膜面积、中膜面积及内膜/中膜面积比(I/M)。免疫组化检测内膜抗磷酸压ERK(p-ERK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平。结果与假手术组相比,1型糖尿病模型血管内损伤组术后28 d,管腔面积明显缩小,内膜面积、中膜面积及I/M明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),颈动脉血管内膜p-ERK及MMP-9水平也明显增强(P<0.01)。PD98059干预组术后28 d,与1型糖尿病模型血管内损伤组相比,管腔面积明显增加,内膜面积、中膜面积及I/M明显降低(P<0.01),颈动脉内膜MMP-9表达明显减低,血脂及血糖水平无统计学意义。结论 ERK抑制剂可能通过抑制MMP-9减轻1型糖尿病高胆固醇饮食模型颈动脉血管内损伤后内膜增生。

MMP-2,9在白血病中的表达与VEGF/N-Ras/ERK信号传导关系的研究

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-2,9、血管内皮生长因子(VEGF)、ras 癌基因以及细胞外信号调节激酶(ERK)

甘草次酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响研究

目的研究甘草次酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响研究。方法 将MDA-MB-231细胞分为空白组、实验组和对照组,实验组以终浓度为20μmol·L^-1的甘草次酸处理,对照组以5μmol·L^-1的依托泊苷处理,空白组以等体积生理盐水处理。以MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,以Wound Healing法检测乳腺癌MDA-MB-231迁移能力,以蛋白免疫印迹(WB)法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。结果 干预24 h后,空白组、实验组和对照组MDA-MB-231细胞活率分别为(99. 65±0. 21)%,(64. 64±6. 18)%,(60. 16±8. 42)%,干预48 h后分别为(98. 26±0. 32)%,(45. 12±4. 25)%,(36. 18±6. 47)%;干预48 h时,空白组、实验组和对照组实验组划痕愈合率分别为(64. 17±4. 67)%,(35. 48±5. 12)%,(32. 45±6. 14)%,细胞p-ERK1蛋白相对表达量分别为0. 85±0. 12,0. 52±0. 11,0. 36±0. 12,MMP-9蛋白相对表达量分别为0. 69±0. 06,0. 41±0. 12,0. 36±0. 10,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 甘草次酸可显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移,可能与抑制ERK1/2通路活化,下调MMP-9蛋白表达有关。

ERK、VEGF和MMP-9在4NQO诱导的小鼠食管癌细胞中的表达

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在4-硝基喹啉1-氧化物(4NQO)诱导的小鼠食管癌细胞中的表达。方法选取雌性BABL/c小鼠200只,分为正常组(50只)和模型组(150只),模型组应用4NQO构建食管癌模型,分为模型10周组、模型15周组和模型20周组,各50只。期间监测体重变化,20周以后均麻醉处死。模型组取食管癌细胞,正常组取正常食管细胞。应用MTT法检测细胞活力,应用RT-PCR及Western blot法检测ERK、VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达量。结果在造模第2天、第10周、第15周、第20周,正常组小鼠体重比较无统计学差异(P>0. 05),各模型组小鼠体重随造模时间延长显著下降(P<0. 01)。MTT结果显示,在饲养20周后,模型10周组、15周组、20周组食管癌细胞增殖率高于正常食管细胞(P<0. 01);随着造模时间的延长(10周→15周→20周),各模型组食管癌细胞增殖率显著增高,差异有统计学意义(P<0. 01)。RT-PCR法结果显示,随着造模时间延长(10周→15周→20周),模型各组癌细胞内的ERK、VEGF和MMP-9 mRNA相对表达量逐渐增加,且均高于对照组(P<0. 01);Western blot结果显示,随着造模时间延长(10周→15周→20周),模型各组癌细胞内的ERK、VEGF和MMP-9蛋白相对表达量逐渐增加,且均高于对照组(P<0. 01)。结论 ERK、VEGF和MMP-9与食管癌细胞增殖和预后转归直接相关。

益气解毒活络中药对早期糖尿病肾病大鼠肾脏ERK1/2信号通路的影响及对肾脏保护作用的研究

目的:研究益气解毒活络中药对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏ERK1/2信号通路的影响及对肾脏保护机制。方法:采用高脂高糖喂养合并STZ腹腔注射建立DN模型,将DN大鼠按血糖随机分为模型组、西药组、预防组、高量组、低量组。干预后,检测空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿微量白蛋白(mAlb)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN);酶联免疫法(ELISA)检测血浆及肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量;蛋白印记法(Western Blot)检测肾组织ERK1/2、p-ERK1/2、CTGF、ColⅣ蛋白表达;半定量PCR检测肾组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA水平。结果:模型组FBG、HbA1c、mAlb、BUN明显升高(P<0.01),Scr无明显变化,AngⅡ含量明显上升(P<0.01),p-ERK1/2、CTGF及ColⅣ蛋白表达增加(P<0.01),MMP-9 mRNA表达下降(P<0.01),TIMP-1 mRNA表达升高(P<0.01);各治疗组上述指标较模型组均明显改善(P<0.01)。结论:AngⅡ、CTGF、MMP-9、TIMP-l、ColⅣ的表达变化与细胞外基质(ECM)降解减少相关,益气解毒活络中药可能部分通过抑制AngⅡ-ERK1/2-CTGF信号通路发挥保护肾脏保护作用。

羟氯喹对肺癌细胞恶性生物学行为影响

目的探讨羟氯喹对肺癌细胞恶性生物学行为及细胞外信号调节激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)/基质金属蛋白酶-9(MMP-9)信号通路的影响。方法体外培养人肺腺癌A549细胞,取对数期人肺腺癌A549细胞分为低、中、高剂量实验组与对照组,分别以20,40,80μmol·L-1羟氯喹与等量生理盐水处理,各组均干预12,24,48 h。用Transwell实验及划痕实验分别检测人肺腺癌A549细胞侵袭与迁移能力;用噻唑蓝(MTT)法检测人肺腺癌A549细胞增殖;用蛋白质印迹(Wb)法检测人肺腺癌A549细胞ERK、VEGF及MMP-9蛋白的表达水平。结果干预48 h时,对照组与低、中、高剂量实验组人肺腺癌A549细胞侵袭率分别为(78.21±4.32)%,(50.22±3.14)%,(21.37±4.06)%,(8.95±3.73)%;划痕闭合率分别为(76.32±4.11)%,(64.52±3.96)%,(47.36±4.02)%,(21.64±5.21)%;ERK蛋白相对表达量分别为0.92±0.08,0.71±0.14,0.39±0.10,0.17±0.05;VEGF蛋白相对表达量分别为0.93±0.07,0.47±0.11,0.33±0.09,0.12±0.03;MMP-9蛋白相对表达量分别为0.91±0.09,0.68±0.12,0.41±0.13,0.09±0.02,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论羟氯喹可呈剂量依赖性地抑制人肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调人肺腺癌A549细胞ERK、VEGF、MMP-9蛋白表达,抑制ERK-VEGF/MMP-9通路信号转导相关。