细胞外信号调解激酶对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡影响的研究

目的:探讨细胞外信号调解激酶(ERK)对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡的影响。方法:形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:0.5μmol/L蟾蜍灵作用K562细胞24 h诱导典型的细胞凋亡,预先用ERK抑制剂PD98059处理细胞1 h,明显增加蟾蜍灵诱导的细胞凋亡率(P<0.05);而用佛波酯预先处理后,明显拮抗蟾蜍灵的作用(P<0.05)。结论:ERK负向调节蟾蜍灵诱导的K562细胞凋亡过程。

RNA干扰沉默ERK2基因体外诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨RNA干扰技术对肝癌HepG2细胞ERK2基因表达的抑制作用及对HepG2细胞凋亡的作用。方法:实验分siRNA干扰质粒转染组、阴性质粒对照组和HepG2细胞空白对照组。应用DNA重组技术,制备针对ERK2基因的重组质粒pAAV-ERK2-siRNA-GFP,通过脂质体转染HepG2细胞。MTT细胞增殖实验,TUNEL法细胞凋亡染色及流式细胞仪凋亡细胞法检测体外诱导HepG2细胞凋亡的作用。结果:成功构建ERK2-siRNA重组质粒。MTT细胞增殖实验,TUNEL法细胞凋亡染色及流式细胞仪凋亡细胞检测法显示该重组质粒在体外能够有效抑制HepG2细胞生长,诱导HepG2细胞凋亡。结论:构建ERK2-siRNA重组质粒能抑制HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞凋亡,为肝癌治疗提供新思路。

塞来昔布通过MAPK/ERK信号通路抑制炎症反应改善急性脑出血大鼠神经功能的机制研究

目的 探究塞来昔布对大鼠急性脑出血神经功能的影响。方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组和塞来昔布组。除假手术组外各组采用自体血注入法制作脑出血模型。抑制剂组大鼠在模型组基础上在前侧脑室注射细胞外调解蛋白激酶(ERK)抑制剂(DCZ19931),塞来昔布组大鼠腹腔注射100 mg·kg^(-1)·d^(-1)的塞来昔布,连续两周。采用Longa五级评分法比较大鼠神经功能损伤程度;检测各组大鼠脑组织含水量,同时采用免疫印迹法检测各组大鼠脑组织中水通道蛋白4(AQP4)表达水平;采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;采用免疫印迹法检测各组大鼠丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK信号通路蛋白表达情况。结果 与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑组织中AQP4蛋白相对表达水平、IL-1β、TNF-α、MDA含量、p-ERK1、p-ERK2、MAPK蛋白相对表达水平显著升高,SOD含量显著降低(P <0.05);与模型组相比,抑制剂组和塞来昔布组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑组织中AQP4蛋白相对表达水平、IL-1β、TNF-α、MDA含量、p-ERK1、p-ERK2、MAPK蛋白相对表达水平显著降低,SOD含量显著升高(P <0.05)。结论 塞来昔布可以有效改善急性脑出血模型大鼠神经功能,其作用机制可能与调控MAPK/ERK信号通路并抑制炎症反应相关。

ERK信号转导通路对新生大鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的探讨细胞外信号调解激酶(ERK)信号转导通路在新生大鼠海马神经干细胞增殖中的作用。方法体外培养新生大鼠海马神经干细胞,传至第4代后进行单细胞克隆培养并传代。将培养细胞分为2组,对照组采用神经干细胞培养液进行培养,实验组中在神经干细胞培养液的基础上添加不同浓度的ERK通路抑制剂U0126,Western Blot检测加入细胞中ERK及P-ERK的表达情况,MTT法检测其对神经干细胞增殖的影响。结果神经干细胞加入U0126后ERK磷酸化水平明显低于对照组;当U0126浓度为10M时,细胞的增殖速度较对照组明显降低。结论神经干细胞的增殖可能与ERK信号转导通路有关。