细胞外分泌蛋白抑瘤素M在宫颈癌中的研究进展

抑瘤素M(OSM)是Zarling等[1]研究发现的一种对A375黑色素瘤细胞生长有抑制作用的细胞外分泌蛋白。OSM来自于白介素6(IL-6)家族,它在调节细胞生长分化、基因的表达及细胞存活等方面有着显著作用。它主要由T淋巴细胞、中性粒细胞和巨噬细胞分泌,最初是作为抗癌剂引入的。然而,在某些情况下,它会促进癌症进展[2-3]。目前国内外对OSM的研究热情仍很高,其具体的作用及相关机制仍有极大的研究空间。

hUMSCs外分泌蛋白治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎模型大鼠的机制初探

目的:探讨腹腔注射人脐带间充质干细胞外分泌蛋白(hUMSCs-S)治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)模型大鼠的可能性及其相关作用机制。方法:6~8周龄Lewis大鼠72只,用随机数字表分方法均分为3组,分别为正常对照(CTRL)组、EAU模型组及hUMSCs-S治疗组,每组24只。EAU组与hUMSCs-S组大鼠采用光感受器间维生素A结合蛋白(IRBP)联合弗氏完全佐剂建立EAU模型,hUMSCs-S组大鼠在建模的同时予以腹腔注射hUMSCs-S,EAU组及CTRL组大鼠均腹腔注射等量PBS。裂隙灯显微镜拍摄记录各组大鼠眼前段情况,根据Caspi评分标准评价眼前段炎症程度;于免疫后第7天(初发期)、14天(高峰期)、21天(恢复期)取眼球组织制成石蜡切片进行HE染色、免疫组化及免疫荧光染色,分别用于眼球组织病理学评分、前房浸润细胞情况评估,观察眼球组织中CD3^(+)T细胞及紧密连接蛋白ZO-1的表达。无菌操作下采腹主动脉血,制备血清,行ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素10(IL-10)和IL-17的浓度。结果:(1)通过裂隙灯显微镜观察和比较,EAU组大鼠出现明显眼前段炎症反应,在建模后第11~17天,hUMSCs-S治疗有降低眼前段Caspi评分的作用(P<0.05);(2)眼球组织切片HE染色结果显示,建模后第14天,hUMSCs-S组大鼠虹膜睫状体和视网膜结构破坏及前房炎细胞浸润数量均低于EAU组(P<0.05);(3)眼球组织切片免疫组化及免疫荧光染色结果显示,hUMSCs-S组大鼠虹膜睫状体、前房和视网膜中CD3^(+)T细胞浸润较EAU组减少,视网膜及视网膜色素上皮(RPE)层ZO-1表达量较EAU组增加;(4)ELISA法检测大鼠外周血血清IL-17及IL-10浓度结果显示,与EAU组相比,hUMSCs-S组大鼠外周血IL-17表达下降、IL-10表达增加(P<0.05)。结论:hUMSCs外分泌蛋白对EAU模型大鼠治疗有效;腹腔注射hUMSCs外分泌蛋白可影响EAU大鼠外周血中炎症因子表达,减少眼内炎症细胞浸润,减轻RPE层紧密连接蛋白的破坏程度。

丁酸钠、激活素A和地塞米松诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰腺外分泌细胞

目的:探讨丁酸钠、激活素A(activinA)和地塞米松诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为胰腺外分泌细胞的可行性,并对诱导作用进行比较。方法:小鼠ES细胞悬浮培养为拟胚体后,以不同浓度的丁酸钠(1mmol/L,2mmol/L,3mmol/L)诱导分化,通过RT-PCR检测不同时点胰腺特异性外分泌基因的表达水平,确定丁酸钠诱导ES细胞向胰腺外分泌细胞分化的最佳浓度和作用时间。进一步单独或联合应用丁酸钠、activinA、地塞米松诱导ES细胞分化,并通过细胞形态学变化、RT-PCR和免疫荧光检测观察不同诱导方案对胰腺外分泌基因和蛋白表达的影响,确定最佳诱导方案。结果:1mmol/L丁酸钠能明显促进胰腺外分泌基因amylase、chymot-rypsinogen、elastase1、elastase2和carboxypeptidase的表达,随着丁酸钠浓度的增加,丁酸钠的诱导作用逐渐减弱;1mmol/L丁酸钠诱导第3d后可检测到amylase、chymotrypsinogen、elastase1、elastase2和carboxypeptidase的表达,在第5d外分泌基因mRNA表达水平达到高峰,随后逐渐下降。与自发对照组相比,单独应用丁酸钠、activinA、地塞米松诱导ES细胞分化,均能提高amylase、chymotrypsinogen、elastase1、elastase2和carboxypeptidase的表达水平。但联合应用丁酸钠、activinA、地塞米松诱导后,ES细胞形态更为均一,上述胰腺外分泌基因的表达进一步增强;免疫荧光结果显示amylase表达为阳性。结论:低浓度的丁酸钠、activinA以及地塞米松均可以诱导小鼠ES细胞胰腺外分泌基因的表达,多种诱导因子的联合作用能明显提高胰腺外分泌细胞的诱导效率。

糖尿病小鼠左肾被膜下胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型的建立

目的：建立糖尿病小鼠左肾被膜下同种异体胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型及探讨胰腺外分泌细胞对胰岛移植物的损伤作用.方法：（1）体内实验：采用胆总管内逆行灌注胶原酶联合淋巴细胞分离液的方法来分离纯化胰岛,人工挑取胰岛细胞并收集胰腺外分泌细胞.链脲佐菌素腹腔注射诱导BALB/C小鼠成为糖尿病小鼠.单纯移植组（n=10）每只小鼠于左肾被膜上极移植胰岛细胞250个,共同移植组（n =10）每只小鼠于左肾被膜上下极同时移植胰岛细胞250个和等体积的胰腺外分泌细胞,持续观测血糖及生命体征变化,1个月后切除左肾并继续检测血糖.（2）体外实验：利用双硫腙对胰岛进行特异性染色来计算胰岛产量及纯度,利用台盼蓝染色鉴定胰岛细胞的活性,以及用葡萄糖刺激胰岛素释放实验来检测胰岛功能.结果：（1）胰岛移植后,单纯移植组及共同移植组血糖均逐步降至正常,共同移植组较单纯移植组血糖恢复正常时间延迟,移植术后第2,3,4,5天,单纯移植组受鼠血糖低于共同移植组,差异有统计学意义（P＜0.05）.切除两组受鼠左肾3d后,两组受鼠血糖均＞21 mmol/L.（2）每只小鼠可获得150～200个高质量胰岛,纯度及活性均高于90％,葡萄糖刺激后胰岛素释放量明显增加（SI=2.90）.结论：（1）成功建立糖尿病小鼠左肾被膜下同种异体胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型.（2）胰腺外分泌细胞与胰岛细胞同时移植会延迟植入胰岛功能恢复正常的时间.

急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺外分泌细胞中hsp70基因的表达

给大鼠胆胰管内逆行注射牛磺胆酸钠制备急性坏死性胰腺炎动物模型，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及免疫组织化学方法检测了ｈｓｐ７０基因在胰腺外分泌细胞中的表达。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析发现，术后１ｈ即出现ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的高表达，然后开始下降，术后８－１６ｈ恢复至对照组水平。免疫组织化学检测发现，术后１ｈ即可见明显的ＨＳＰ７０蛋白染色，２ｈ最强，然后开始减弱，一直持续至１６ｈ，仍高于对照组水平；阳性染色位于腺泡细胞顶部并呈大颗粒状，而基底部、细胞核及腺泡腔内未见阳性信号。推测急性胰腺炎时胰腺外分泌细胞高表达ｈｓｐ７０基因，可能与其参与大量合成的胰酶的转运及抑制胰酶激活等保护作用有关。

奥曲肽对缺氧环境下大鼠胰腺外分泌细胞增殖、氧耗及HIF-1α、VEGF表达的影响

目的:探究奥曲肽(Oct)在胰岛移植早期缺氧环境下对胰腺外分泌细胞AR42J的影响及可能机制。方法:将胰岛β细胞Min6分为常氧培养组和缺氧培养组,CCK-8法检测Min6细胞在常氧、缺氧环境中的增殖活性以确定培养时间。AR42J细胞分为常氧阴性对照组、常氧+Oct组、缺氧阴性对照组、缺氧+Oct组,将Oct稀释为不同浓度(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L、10-9 mol/L、10-10 mol/L)处理细胞。CCK-8法检测常氧、缺氧条件下Oct对AR42J增殖活性的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测AR42J细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)含量,磷氧探针检测细胞耗氧量,Western blotting法检测缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白表达。结果:Min6细胞在培养9 h后增殖活性达到最佳。与缺氧阴性对照组比较,缺氧+Oct组在作用3 h、6 h、9 h细胞活力上升(P<0.05)。与缺氧阴性对照组比较,除10-10 mol/L Oct组细胞HIF-1α表达无明显差异(P>0.05)外,其他各浓度Oct组HIF-1α蛋白表达量显著下降(均P<0.05)。与常氧阴性对照组比较,各浓度Oct组HIF-1α蛋白表达量均显著降低(均P<0.05)。与缺氧阴性对照组比较,缺氧+Oct组细胞上清VEGF含量和耗氧量降低(均P<0.05)。与常氧阴性对照组比较,各加药组HIF-1α表达降低(P<0.05),而VEGF含量、细胞耗氧量无明显差异(P>0.05)。结论:Oct提高缺氧环境下胰腺外分泌细胞活力,抑制HIF-1α与VEGF,降低细胞耗氧量,这可能是Oct对胰岛移植后缺氧环境中的胰岛细胞起到保护作用的机制之一。

实验性胰腺炎大鼠胰腺外分泌细胞的坏死与凋亡

按Ａｈｏ等的方法，给大鼠胆胰管内逆行注射牛磺胆酸钠，制成急性坏死性胰腺炎动物模型。采用ＨＥ染色及ＤＮＡ末端标记法（ＴＵＮＥＬ）观察了术后（注药后）不同时程胰腺外分泌细胞的病理组织学改变。发现牛磺胆酸钠可引起胰腺组织的坏死及凋亡，前者出现较早并随术后时间延长而逐渐加重，且伴有明显的炎症反应；后者出现略迟，占较小部分。这表明，这种胰腺炎动物模型可引起胰腺外分泌细胞的坏死及凋亡。

阿萨希毛孢子菌胞外分泌酶水平的比较

目的探索阿萨希毛孢子菌细胞外分泌酶的种类与活性。方法采用卵黄琼脂培养基、BSA-琼脂培养基和AIP-ZYM试剂盒,观察11株阿萨希毛孢子菌细胞外分泌酶的种类及酶活性。结果 11株阿萨希毛孢子菌中9株磷脂酶活性较强,2株酶活性弱;均未测得酸性蛋白酶分泌。AIP-ZYM试剂盒显示11株菌有共性分泌酶,也有部分菌株有特异性分泌酶。结论阿萨希毛孢子菌细胞外分泌酶种类多样,不同来源菌株产酶种类及酶活性亦不相同。

海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ在大肠杆菌中的分泌表达及纯化

海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ(hainantoxin-Ⅳ,HNTX-Ⅳ)是从海南捕鸟蛛(Selenocosmia hainana)的毒液中分离得到的一种可以特异性抑制河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的多肽毒素,并且能够选择性抑制Nav1.7亚型电压门控钠离子通道。HNTX-Ⅳ的成熟肽含有35个氨基酸残基,其结构通过3对二硫键稳定。HNTX-Ⅳ是研究钠通道结构和功能以及镇痛药物开发过程中非常有用的一种分子探针,但是其在天然毒素中的含量较少,很难分离足够量的组分进行后续研究。在本研究中,我们通过OEPR克隆构建了HNTX-Ⅳ的大肠杆菌分泌表达质粒pSE-G1M5-SUMO-HNTX-Ⅳ。将质粒pSE-G1M5-SUMO-HNTX-Ⅳ转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行自动诱导分泌表达,含有6×His标签和SUMO标签的融合蛋白质6×His-SUMO-HNTX-Ⅳ成功分泌到大肠杆菌的细胞外培养基中。通过弱阳离子交换柱富集和Ni-NTA柱纯化之后,成功获得了纯度较高的融合蛋白质6×His-SUMO-HNTX-Ⅳ。通过Ulp1激酶切割,重组HNTX-Ⅳ(rHNTX-Ⅳ)被释放出来,并通过RP-HPLC分离获得。通过MALDI-TOF质谱鉴定rHNTX-Ⅳ分子量为3.9876kD。通过膜片钳技术,10μmol/L的rHNTX-Ⅳ能够抑制90%以上的hNav1.7的电流,其IC_(50)值为126 nmol/L。本研究成功将HNTX-Ⅳ分泌到了大肠杆菌的细胞外培养液中,并最终获得了纯度较高且具有生理活性的rHNTX-Ⅳ分子,丰富了HNTX-Ⅳ的制备方法,为其后续研究奠定了基础。

细胞凋亡在干燥综合征中的研究进展

干燥综合征是由自身免疫系统异常激活所引发的结缔组织病变,病因不明,控制该疾病仍然是一项重大挑战。细胞凋亡在维持免疫微环境稳态中发挥着关键作用,是干燥综合征的重要发病机制。本文总结了干燥综合征中的细胞凋亡过程,从外分泌腺细胞和淋巴细胞出发,对凋亡的具体机制进行论述,并介绍了现有干预手段,启发今后的研究方向。

高脂血症大鼠胰腺腺泡细胞缩胆囊素/三磷酸肌醇信号通路的变化及意义

目的探讨高脂血症对胰腺腺泡细胞三磷酸肌醇(IP3)介导的信号通路的影响。方法将24只大鼠随机分为两组各12只,观察组建立高脂血症模型,予高脂饲料饮食,对照组予普通饲料饮食,4周后检测两组胰腺腺泡细胞内IP3水平及缩胆囊素(CCK)刺激的腺泡细胞淀粉酶释放率。结果观察组胰腺腺泡细胞IP3水平、淀粉酶释放率均明显高于对照组,P均<0.01。结论高脂血症大鼠胰腺腺泡细胞CCK/IP3信号通路发生变化,其信号分子IP3表达增高,腺泡细胞对CCK刺激的外分泌敏感性增加。

人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的治疗作用（英文）

背景:肝纤维化具有较高的发病率和死亡率,肝星状细胞的活化和增殖是肝纤维化进程中的关键环节。目前还没有针对单一环节或靶点的有效抗纤维化药物。目的:分析人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法:①通过酶溶解法获取健康人群来源脂肪中干细胞,体外培养获取一定数量细胞后通过多重超滤法获取外泌体。体外培养的肝星状细胞经转化生长因子β1活化后利用不同浓度外泌体进行处理,通过定量PCR检测细胞内α-平滑肌动蛋白的表达明确其活化程度,以及分别使用CCK-8及流式细胞术检测各组外泌体处理后活化肝星状细胞的生长率及凋亡率。②通过腹腔注射四氯化碳构建肝纤维化大鼠动物模型,尾静脉注射外泌体进行治疗。检测各组动物的肝功能及血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原,肝组织Ishak评分及肝纤维化半定量,以及通过免疫荧光法检测肝组织内基质金属蛋白酶组织抑制剂1、基质金属蛋白酶9及α-平滑肌动蛋白的表达。实验方案于2017年1月经同济大学动物实验伦理委员会以及医学伦理学委员会批准。结果与结论:人脂肪干细胞来源外泌体可抑制活化的肝星状细胞增殖,其可能的机制为抑制活化巨噬细胞的增殖,减少胶原纤维、α-平滑肌动蛋白及基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达,并促进基质金属蛋白酶9的表达。提示外泌体可治疗四氯化碳诱导肝纤维化。

IL-37对脂多糖诱导AR42J细胞炎症反应及p38MAPK/NF-κB通路的影响

目的探究白细胞介素-37(IL-37)对脂多糖(LPS)诱导AR42J细胞炎症反应的影响及可能的作用机制。方法体外培养AR42J细胞,将细胞分为空白组(细胞不进行任何处理)、阴性对照组(转染pcDNA3.1质粒)与IL-37过表达组(转染pcDNA3.1-IL-37重组载体),转染后在培养液中添加10μg/mL LPS,诱导AR42J细胞炎症反应。CCK-8法检测细胞增殖活性;酶联免疫法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β水平;酶动力学法检测淀粉酶分泌率;免疫印迹法检测细胞中p-p38MAPK、p38MAPK、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况。结果与空白组与阴性对照组相比,IL-37过表达组AR42J细胞中IL-37蛋白表达量升高,AR42J细胞增殖率升高,TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,细胞淀粉酶分泌率降低,AR42J细胞核NF-κB蛋白表达降低,细胞质NF-κB蛋白表达升高(P<0.05)。结论IL-37能够抑制LPS诱导AR42J细胞炎症反应,上调细胞增殖活性,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB通路活化有关。

α-1抗胰蛋白酶减轻人胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤

目的 探讨胰腺外分泌细胞对胰岛移植物的损伤作用及α-1抗胰蛋白酶（A1AT）对胰岛β细胞的保护作用.方法 （1）体内实验：消化成人尸体部分胰腺,人工挑选胰岛,并收集胰腺外分泌细胞.链脲霉素腹腔注射诱导Balb/c-Nu裸小鼠成为糖尿病小鼠.对照组（n=6）小鼠每只于左肾包膜下移植成人胰岛250个;共同移植组（n=7）小鼠每只分别于左肾包膜上、下极同时植入胰岛250个和等体积的胰腺外分泌细胞.持续检测受鼠血糖,28d后切取左肾,以免疫组织化学染色（SP法）观察左肾包膜下抗淀粉酶抗体的表达,并继续检测血糖.（2）体外实验.纯化胰岛组（n=6）,每孔250个胰岛进行培养;非纯化胰岛组（n=6）,每孔250个胰岛和等体积外分泌细胞同时培养;非纯化胰岛＋A1AT组（n=6）,每孔250个胰岛和等体积外分泌细胞同时培养,并加入A1AT0.5 mg/ml.48 h后,测定各孔胰岛中胰岛素含量和上清液中胰蛋白酶浓度.结果 （1）胰岛移植后,对照组和共同移植组受鼠血糖均逐步恢复正常.共同移植组较对照组血糖恢复正常时间延迟,组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）.切取受鼠左肾后5 d（移植后33 d）,两组受鼠血糖均＞21 mmol/L.共同移植组可见肾包膜下有大量抗淀粉酶抗体阳性细胞,对照组少见.（2）纯化胰岛组胰岛素含量为（2.02±0.33）μg/孔,非纯化胰岛组为（1.13±0.27）μg/孔,非纯化胰岛＋A1AT组为（1.68±0.17）μg/孔,各组间差异均有统计学意义（P＜0.01）.纯化胰岛组胰蛋白酶浓度为（1.03±0.25）ng/ml,非纯化胰岛组为（6.92±1.21）ng/ml,非纯化胰岛＋A1AT组为（3.23±0.55）ng/ml,各组间差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 胰腺外分泌细胞与胰岛同时移植会延迟植入胰岛功能恢复正常的时间,这与腺泡细胞内胰蛋白酶被激活、释放有关;在胰岛、胰腺外分泌细胞共同培养时加入A1AT,可以缓解腺泡细胞分泌的蛋白酶对胰岛的破坏.

生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤

目的 观察与探讨生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤及其机制.方法 （1）体外实验：选取20只雄性BALB/C小鼠,采用随机数字表法分为生长抑素组和生理盐水组,每组10只.在获取胰岛手术麻醉前30 min,生长抑素组小鼠腹腔注射生长抑素10μg/g,生理盐水组注射等体积的生理盐水,然后分别收集两组小鼠的胰腺外分泌细胞及胰岛细胞,流式细胞仪检测两种细胞凋亡情况.（2）体内实验：获取小鼠胰岛及胰腺外分泌细胞,并对胰岛进行纯度及活性检测.应用链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型,然后进行胰岛移植,分别于小鼠左肾被膜上、下级同时移植胰岛250个及等体积的胰腺外分泌细胞.采用随机数字表法将成功建立胰岛移植模型的40只小鼠平均分为2组,实验组术后腹腔注射生长抑素,连续28 d,对照组术后注射等体积生理盐水,连续28 d.同时两组小鼠分别腹腔注射5乙炔基-2＆#39;-脱氧尿苷（EDU）5 μg/g,连续28 d.术后连续监测小鼠血糖;术后第8天,两组小鼠均进行葡萄糖耐量实验（IPGTT）;术后10和28 d两组各随机选取10只小鼠分别切除左肾,采用免疫组织化学法检测左肾包膜下抗淀粉酶抗体的表达,采用免疫荧光染色法检测移植胰岛β细胞增殖情况.结果 （1）流式细胞检测结果显示,生长抑素组小鼠胰腺外分泌细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）,两组间胰岛细胞凋亡率的差异无统计学意义（P＞0.05）;（2）获取的小鼠胰岛纯度及活性均高于95％.胰岛移植后,两组小鼠血糖均恢复正常,对照组较实验组血糖恢复正常时间延迟（P＜0.05）,对照组的血糖水平明显高于实验组;IPGTT实验结果显示移植物血糖调节功能正常;术后10d实验组和对照组移植物周围均可见抗淀粉酶抗体阳性颗粒,但实验组阳性颗粒数较对照组减少（P＜0.05）;免疫荧光检测显示,实验组移植胰岛Insulin＋ EDU＋β细胞数较对照组明显增多（P＜0.05）.术后28 d,实验组抗淀粉酶抗体阳性颗粒数较对照组明显减少（P＜0.05）,但与术后10d相比两组均无明显变化（P＞0.05）,实验组增值的β细胞数仍明显高于对照组（P＜0.05）,但与术后10天相比两组增殖率均显著降低（P＜0.05）.结论 生长抑素可以减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤,这可能与生长抑素诱导小鼠胰腺外分泌细胞的凋亡,抑制胰腺外分泌细胞胰淀粉酶的分泌,以及促进胰岛β细胞增殖等因素有关.

胰腺内分泌肿瘤中外分泌细胞成分的免疫组织化学研究

目的 探讨胰腺内分泌肿瘤中外分泌细胞成分的存在及其来源。方法 应用免疫组织化学技术 (S P法 )对 5 7例胰腺内分泌肿瘤 (非功能性胰腺内分泌肿瘤 2 3例 ,胰岛素瘤 34例 )进行上皮膜抗原 (EMA)的染色 ,对肿瘤中外分泌细胞成分的存在和分布进行观察。结果 2 1例 (36 .8% )胰腺内分泌肿瘤中具有EMA阳性染色。阳性细胞多构成导管或腺泡样组织学结构。部分阳性细胞具有与正常外分泌细胞不一致的组织学形态和EMA染色特征。结论 胰腺内分泌肿瘤中具有一些胰腺外分泌组织学结构和细胞成分 ,支持胰腺肿瘤共同起源学说即多能干细胞理论。

α-1抗胰蛋白酶减轻小鼠胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤

目的探讨α-1抗胰蛋白酶（A1AT）减轻胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤及促进胰岛口细胞增殖。方法（1）体外实验：选10只BALB／c小鼠，挑取所有的胰岛并收集胰腺外分泌细胞。纯化胰岛组（n=6），每孔100个胰岛，常规培养；实验组（n=6），每孔100个胰岛和等体积外分泌细胞同时培养，并加入A1AT（0．5mg／m1）；对照组（n=6），每孔100个胰岛和等体积外分泌细胞同时培养。48h后，收集各孔上清液，分别检测胰岛素含量及胰蛋白酶浓度；然后分别换低糖、高糖RPMI-1640培养液，行胰岛素释放实验。（2）体内实验：链脲佐菌素腹腔注射诱导BALB／c小鼠成为糖尿病小鼠。实验组（n=10）和对照组（n=10）分别于小鼠左肾被膜上下级同时移植胰岛细胞250个和等体积的胰腺外分泌细胞，术后实验组按腹腔注射A1AT83mg／kg（28d），对照组注射等量生理盐水（28d），同时两组小鼠分别按0．5btg／g腹腔注射EDU（28d）。1个月后切除左肾，免疫组织化学染色法检测左肾包膜下抗淀粉酶抗体的表达，免疫荧光染色法检测移植胰岛B细胞增殖情况，并继续检测血糖。结果（1）纯化胰岛组胰岛素含量为（1．53±0．33）μg／孔，实验组为（1．26±0．13）μg／孔，对照组为（0．82±0．24）μg／孔，各组间的差异均有统计学意义（P〈0．01）。纯化胰岛组胰蛋白酶浓度为（1．05±0．22）ng／ml，实验组为（2．42±0．44）ng／ml，对照组为（5．73±1．12）ng／ml，各组间的差异均有统计学意义（P〈0．01）。纯化胰岛组胰岛素刺激指数为4．11±1．45，实验组为2．53±1．52，对照组为1．32±1．12，各组间的差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）胰岛移植后，实验组和对照组血糖均降至正常，对照组较实验组血糖恢复正常时间延迟，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。切除两组小鼠左肾3dN，两组小鼠随机血糖均〉21mmol／L。对照组移植物周围可见大量抗淀粉酶抗体阳性颗粒，实验组较对照组明显减少。免疫荧光检测显示实验组移植胰岛Insulin’／EDU’8细胞数较对照组明显增多。结论（1）胰岛细胞与胰腺外分泌细胞在体外共同培养时加入A1AT可以缓解胰腺腺泡细胞分泌的蛋白酶对胰岛的破坏。（2）胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植在糖尿病小鼠体内，腹腔注射AIAT可以明显减少腺泡细胞胰蛋白酶的分泌，减轻胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤，促进胰岛B细胞的增殖。

外分泌细胞直接转化胰岛β细胞获得成功

美国科学家实现和达成了发育生物学家长久以来的梦想和终极目标——直接将一种体细胞转变成另一种体细胞，而无需借助胚胎干细胞。这也许将成为把再生医学推向前进的一项神奇创举。该研究成果发表在8月27日的《自然》杂志网络版上。研究负责人、美国干细胞研究所所长道格拉斯·梅尔顿称，通过使用直接重组技术，来自美国哈佛大学医学院和波士顿儿童医院的研究人员将小鼠体内构成胰腺约95％的、原本分泌酶类的外分泌细胞成功地转变成了珍稀的可生产胰岛素的胰岛β细胞。这些约占胰腺1％的胰岛β细胞，就是在1型糖尿病中相继死亡的细胞。

Co-localization of histamine and norepinephrine in sympathetic ganglia and exocytosis of endogenous histamine from cardiac sympathetic nerve endings of macaca mulatto monkey

AIM To provide the evidence about localization, biosynthesis, metabolism and release of histamine from the cardiac sympathetic nerve terminals, and endogenous sympathetic histamine could inhibit itsel frelease from the nerve terminal through the presynaptic histamine H3 receptor. METHODS Using double-labeled immunohistochemistry to observe the co-localization of histamine and NE in the superior cer-vical ganglia (SCG) of macaca mulatto monkey; Different-speed centrifugation to obtain the cardiac sympathetic nerve terminal model (the cardiac synaptosomes), spectrofluorometer and ELISA techniques to detect the release of histamine from the cardiacsynaptosomes. RESULTS ( 1 ) The coexistence of histamine and norepinephrine immunoreactivities was identified in the same neuron within SCG of macaca mulatto monkey. (2) Depolarization of macaca mulatto monkey cardiac synaptosomes with 50 mmol/L potassium caused the release of endogenous histamine,