细胞外基质凝胶支架与嗅鞘细胞体外生物相容性的研究

目的:体外研究细胞外基质凝胶支架与新生大鼠嗅鞘细胞的生物相容性。方法:利用自备的细胞外基质凝胶支架分别建立二维与三维的培养体系,通过免疫荧光技术、倒置相差显微镜观察和MTT法研究嗅鞘细胞在ECM凝胶支架中的形态特点、生长与增殖的情况。结果:本实验观察到在2种培养体系中嗅鞘细胞均生长良好,尤其在三维培养体系中细胞密度和胞体体积大于对照组,支架内嗅鞘细胞与对照组相比展现了更好的形态特征。MTT法检测二维培养体系中实验组与对照组的吸光度值,两者无明显差异(P>0.05)。结论:体外ECM凝胶支架与嗅鞘细胞有良好的生物相容性,由两者构成的三维结构和生物活性的复合体有可能应用于神经组织工程。

脂肪细胞外基质凝胶(SVF-gel)促进增生性瘢痕重塑的临床研究

目的观察局部注射脂肪细胞外基质凝胶(SVF-gel)治疗增生性瘢痕的临床疗效,为临床治疗增生性瘢痕探索新的途径。方法2019年6月~2022年5月于郑州市第一人民医院整形科门诊就诊的面部增生性瘢痕患者12人,采用Coleman技术获得其下腹部的颗粒脂肪,进一步通过物理方法获得脂肪萃取物SVF-gel,将其精细化注射于瘢痕部位皮下浅层,通过电话和门诊随访,分别在术前、治疗后6个月时拍摄瘢痕区域照片,此外,使用患者和观察者瘢痕评价量表(patient and observer scar assessment scale,POSAS)评估治疗前后瘢痕情况,同时进行患者满意度调查,评价整体治疗效果,进行统计学分析。结果术后6个月,12例患者注射区域的瘢痕质地均较术前有明显改善,未出现明显手术并发症,瘢痕质地均逐渐趋近于正常皮肤,POSAS评分在色泽、柔韧度、厚度,瘙痒程度等方面评分及总分均明显低于术前(P<0.01),12例患者治疗满意度平均分4.5分(0-5分).结论SVF-gel可用于瘢痕部位的精细化注射,能够明显改善瘢痕质地、弹性,软化瘢痕,促进增生性瘢痕重塑。

大鼠子宫去细胞支架及其细胞外基质凝胶的制备

本研究采用化学提取法制备大鼠子宫去细胞支架,以探究大鼠子宫细胞外基质(ECM)凝胶制备的可行性。取大鼠子宫,经1%十二烷基磺酸钠(SDS)、3%曲拉通X-100(Triton X-100)、4%脱氧胆酸钠(SDC)溶液依次振摇,制得大鼠子宫去细胞支架。通过扫描电镜、组织化学染色、免疫组化等方法检测支架去细胞化情况。将成功制备的大鼠子宫去细胞支架经胃蛋白酶消化得ECM凝胶,特异性检测ECM凝胶中蛋白含量,测定其流变学性能。结果表明,化学提取法能有效去除细胞,完全保留支架中ECM蛋白成分;本研究制得的ECM凝胶中含有大量ECM蛋白,胶凝稳定,或可为体外子宫内膜构建提供合适的支架材料。

阳离子脂质体转染神经营养因子3基因修饰许旺细胞与基质凝胶桥接损伤的坐骨神经

背景:周围神经损伤后给予外源性神经营养因子3对促进神经再生及保护肌萎缩均有作用。目的:观察阳离子脂质体转染神经营养因子3基因修饰的许旺细胞与细胞外基质凝胶桥接修复坐骨神经损伤的效果。方法:取80只成年Wistar大鼠制作左侧坐骨神经缺损模型,随机分组,以不同材料进行修复:细胞外基质凝胶组、许旺细胞-聚乳酸/羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组、神经营养因子3基因-聚乳酸/羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组、神经营养因子3基因修饰许旺细胞-聚乳酸/羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组。结果与结论:①腓肠肌肌肉组织学检查:术后8,12周神经营养因子3基因修饰许旺细胞-聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组腓肠肌横截面积结构清晰、肌纤维粗大,呈基本正常肌肉结构,纤维组织较少,肌横截面积明显大于其他3组(P<0.05,P<0.01)。②肌细胞凋亡检测:术后4,8,12周神经营养因子3基因修饰许旺细胞-聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞外基质凝胶组肌细胞凋亡数低于其他3组(P<0.05)。表明阳离子脂质体转染神经营养因子3基因修饰的许旺细胞与细胞外基质凝胶可较好修复损伤神经,防止失神经肌萎缩细胞凋亡。

在基质材料中生长的许旺细胞:存活、黏附、三维生长和迁移特性

目的:将许旺细胞与细胞外基质凝胶、聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维丝复合培养,观察许旺细胞的存活、黏附、三维生长和迁移等生物学行为。方法:实验于2005-02/2006-03在四川大学完成。①实验材料:3～6月龄SD大鼠40只。16～24周流产胎儿由四川大学华西二医院计划生育科提供,产妇及其家属均签署知情同意书,实验经医学伦理委员会批准。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(中国科学院成都分院化学所提供);细胞外基质凝胶(Sigma)。②实验方法:将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解,旋转抽丝法制成直径为20～40μm的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维丝。无菌条件下取胎儿坐骨神经,去除神经外膜,胰酶消化+差速贴壁法去除成纤维细胞,达80%融合时行BrdU标记。③实验评估:将许旺细胞离心制成0.1～0.2mm3的微粒,接种在细胞外基质凝胶中,观察许旺细胞在凝胶中的存活、生长和移行。将许旺细胞制成1×1010L-1的30%细胞外基质凝胶后,分别滴加在经过胶原、细胞外基质凝胶预处理的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维丝的一端,观察许旺细胞在纤维丝上的黏附、生长和迁移。将BrdU标记的许旺细胞复合细胞外基质凝胶后,置入聚乳酸纤维管用以修复大鼠坐骨神经缺损,术后3,6周取材,BrdU免疫组化染色观察许旺细胞的存活情况。结果:①许旺细胞在无血清状态下能在细胞外基质凝胶中存活,并分裂、增殖,相互移行形成类似Bungner带状的许旺细胞柱状结构。②许旺细胞能贴附在聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维丝上生长并沿纤维丝移行,形成多层排列的类似Bungner带状的许旺细胞柱,细胞外基质凝胶能显著增加贴附和移行细胞数量,而胶原作用不显著。③许旺细胞和细胞外基质凝胶复合移植,6周后BrdU阳性细胞数明显低于第3周(t=3.71,P<0.01),成活细胞能在细胞外基质凝胶中移行。结论:许旺细胞与细胞外基质凝胶、聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维丝等生物材料复合培养时,能存活、分裂、增殖,相互移行形成类似Bungner带状的细胞柱,并可贴附在纤维丝上生长迁移,该生物学行为对神经组织工程具有重要作用。