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基于生物信息学筛选纳米二氧化硅致肺纤维化关键因子 被引量:1
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作者 师凡 杨晓静 +3 位作者 熊敏 杨玉姗 张艳淑 金玉兰 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期497-503,共7页
目的构建巨噬细胞-成纤维细胞体外模型模拟肺纤维化过程,探讨纳米二氧化硅(SiNPs)暴露致肺纤维化的关键机制。方法于2021年1月,取对数生长期的人单核细胞白血病(THP-1)细胞,分别采用0、25、50、100μg/ml SiNPs处理24 h,收集THP-1细胞... 目的构建巨噬细胞-成纤维细胞体外模型模拟肺纤维化过程,探讨纳米二氧化硅(SiNPs)暴露致肺纤维化的关键机制。方法于2021年1月,取对数生长期的人单核细胞白血病(THP-1)细胞,分别采用0、25、50、100μg/ml SiNPs处理24 h,收集THP-1细胞上清液分别作用于对数生长期的对照组和低、中、高剂量组人胚肺成纤维(MRC-5)细胞,继续培养24 h。检测不同组别MRC-5细胞增殖情况。检测MRC-5细胞上清液中细胞羟脯胺酸(Hyp)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。检测高剂量组MRC-5细胞中的差异蛋白表达情况,应用GeneCard数据库中肺纤维化相关蛋白对高剂量组MRC-5细胞进行差异肺纤维化蛋白的筛选。应用GO分析对高剂量组的差异肺纤维化蛋白进行富集分析,应用String数据库构建高剂量组的差异肺纤维化蛋白的相互作用(PPI)网络,使用CytoHubba软件筛选高剂量组的关键差异肺纤维化蛋白。使用Pearson相关分析计算关键差异肺纤维化蛋白之间的相关系数,Western blotting检测不同组别中关键差异肺纤维化蛋白表达。结果与对照组比较,低、中、高剂量组MRC-5细胞增殖率增加(P<0.05)。与对照组比较,低、中、高剂量组细胞上清液中Hyp、IL-1β的表达水平均升高(P<0.05),高剂量组细胞上清液中IL-6、TNF-α蛋白表达水平均升高(P<0.05)。用GeneCard数据库结合高剂量组差异表达蛋白共筛选出26个差异肺纤维化蛋白,GO分析显示,差异肺纤维化蛋白主要调控细胞外基质水解、细胞炎症反应、组织修复和细胞增殖等生物过程。CytoHubba软件计算出基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)是PPI网络中的关键节点蛋白。相关分析结果显示,MMP9蛋白与基质金属蛋白酶1(MMP1)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、TIMP1和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达相关(r=0.97、0.98、0.94、0.93,P<0.05)。Western blotting结果显示,与对照组比较,低、中、高剂量组TIMP1蛋白表达均升高(P<0.05),而MMP9蛋白表达仅在高剂量组增加(P<0.05)。结论SiNPs暴露后体外细胞肺纤维化模型中MRC-5细胞的差异肺纤维化表达蛋白主要调控细胞外基质水解、组织修复、细胞炎症等生物过程,且MMP9、TIMP1蛋白可能是影响SiNPs暴露后MRC-5细胞纤维化进程的关键蛋白。 展开更多
关键词 肺纤维化 纳米二氧化硅 生物信息学 金属蛋白酶9 蛋白酶组织抑制因子1 细胞外基质水解
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Purification,characterization,in vitro anti-hepatic fibrosis activity of bioactive peptides derived from Carapax Trionycis hydrolysates 被引量:3
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作者 胡春玲 彭小芝 +3 位作者 唐尹萍 刘焱文 胡祖良 高建蓉 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2017年第8期605-610,共6页
Anti-hepatic fibrosis peptide from Carapax Trionycis was purified, characterized, and inhibitory effect was assessed. Carapax Trionycis extract peptide hydrolysates (CTEPHs) were separated by ultrafiltration, Sephad... Anti-hepatic fibrosis peptide from Carapax Trionycis was purified, characterized, and inhibitory effect was assessed. Carapax Trionycis extract peptide hydrolysates (CTEPHs) were separated by ultrafiltration, Sephadex G-15 gel chromatography and RP-HPLC. One novel anti-hepatic fibrosis peptide (CTEPH-I: Asn-Pro-Asn-Pro-Thr) was obtained and identified. MTS assay and enzyme-linked immunosorbent assay were applied to evaluate the anti-fibrotic effect of CTEPH-1 on activated hepatic stellate cells (HSCs) in vitro. CTEPH-1 efficiently inhibited activation and proliferation of cultured HSC-T6 cells via lowering the contents of collagen and TIMP- 1 except for matrix metalloproteinase- 1 (MMP- 1). The purified peptide might be beneficial as functional food or potential drug for treatment of liver fibrogenesis. 展开更多
关键词 Carapax Trionycis extract peptide hydrolysates Extracellular matrix Hepatic stellate ceils
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