HIF-1α基因干扰缓解高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡、炎症和细胞外基质沉积

目的探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)基因干扰对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡、炎症和细胞外基质(ECM)沉积的影响。方法将HK-2细胞分为4组:对照组;HG组;HG+shRNA-NC组;HG+HIF-1α-shRNA组。按分组处理细胞后,实时定量聚合酶链反应检测HIF-1α和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的表达水平;细胞计数试剂盒8、流式细胞术和酶联免疫吸附试验分别检测细胞增殖、凋亡和炎性因子的含量;免疫印迹检测蛋白表达。结果与HG组相比较,HG+HIF-1α-shRNA组HIF-1α和NGAL mRNA和蛋白表达水平降低,细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α水平降低,IL-10水平升高,组织金属蛋白酶抑制物l和I型胶原蛋白表达水平降低,基质金属蛋白酶9蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论HIF-1α基因干扰缓解HG诱导的HK-2细胞凋亡、炎症和ECM沉积。

TRPC促进肾小球系膜细胞外基质沉积的机制研究

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential canonical,TRPC)促进大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积的作用机制。方法免疫荧光染色方法观察TRPC1和TRPC6在HBZY-1细胞上的定位及表达;给予AngⅡ干预HBZY-1细胞后,应用qRT-PCR和Western blotting方法检测Gαq/PLCβ4/TRPC信号通路关键蛋白和ECM沉积指标[α-SMA、CollagenⅢ(ColⅢ)和Fibronectin(Fn)]的mRNA和蛋白表达;siRNA技术沉默TRPC1和TRPC6表达后,检测ECM沉积指标的表达;Fluo-4AM Ca^(2+)成像技术测定细胞内Ca^(2+)内流的变化情况。结果TRPC1和TRPC6在HBZY-1细胞中均有表达,主要定位在细胞膜和胞质。AngⅡ刺激后,可以激活Gαq/PLCβ4/TRPC信号通路,表现为Gαq、PLCβ4、TRPC1和TRPC6的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。细胞内的Ca^(2+)内流增加(P<0.01),ECM沉积指标α-SMA、ColⅢ和Fn的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。RNA干扰技术沉默TRPC1和TRPC6表达后,导致胞内Ca^(2+)内流减少(P<0.05),HBZY-1细胞ECM沉积指标的mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。结果表明,沉默TRPC表达可以抑制AngⅡ诱导的HBZY-1细胞ECM沉积,且可能与减少[Ca^(2+)]i内流有关。结论TRPC可能是肾脏纤维化新的治疗靶点。

THEM4/Akt在糖尿病小鼠肾脏细胞外基质沉积中的作用

目的探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)/Akt在糖尿病小鼠肾脏中的表达以及与细胞外基质沉积的关系。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,饲养8周后处死小鼠,应用Western blot、免疫组化及RT-PCR技术检测糖尿病小鼠肾脏中THEM4/Akt、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ、FN蛋白及THEM4 mRNA的表达。结果与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠肾脏中THEM4蛋白低表达,相对于对照组下降了37.7%;同时伴随phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ及FN蛋白表达升高,较对照组分别上调了3.66、1.29、2.33、1.99及2.82倍;糖尿病小鼠肾小管间质可见细胞外基质沉积。结论糖尿病小鼠肾小管间质细胞外基质沉积可能是由于THEM4的低表达进而激活Akt,上调TGF-β1和α-SMA蛋白的表达而实现的。

糖尿病大鼠肾间质TGF-β_1和α-SMA的表达与细胞外基质沉积的关系

目的:观察糖尿病大鼠肾小管间质中转化生长因子(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与纤维连接蛋白(FN)和胶原Ⅲ型(ColⅢ)沉积的关系。方法:大鼠随机分为正常对照组(A组),糖尿病1周组(B组),糖尿病2周组(C组),糖尿病1月组(D组)和糖尿病2月组(E组)。用免疫组化方法检测肾间质TGF-β_1、α-SMA、FN和ColⅢ,PAS染色观察肾组织形态学改变,生化法测定大鼠血糖、血脂、血尿肌酐以及尿蛋白。结果:糖尿病2周开始肾小管见TGF-β_1表达,并随病程进展而逐渐增多。糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多,2月时更多,且可见肾间质中有α-SMA表达;FN和ColⅢ增多与TGF-β_1、α-SMA呈正相关。结论:TGF-β_1刺激α-SMA的表达,从而促进糖尿病大鼠肾小管间质FN和ColⅢ的沉积。

细胞外基质沉积在高氧致新生鼠肺损伤中的动态变化

目的探讨细胞外基质(ECM)沉积在高氧致新生鼠肺损伤发生、发展中的动态变化。方法将新生足月鼠60例随机分为实验组和对照组,应用酶联免疫吸附法测定肺组织中I型胶原、纤维连接蛋白(FN)及透明质酸(HA)的含量,并同时观察肺组织的形态及肺内胶原沉积变化。结果实验组肺组织初期仅表现为肺泡炎症反应,继之肺间质细胞开始增生,晚期大量成纤维细胞增生及肺内胶原沉积。实验组I型胶原水平7d明显增加(P<0.01),14d持续升高,21d达高峰(P<0.001);FN水平3d开始升高(P<0.05),7d达高峰(P<0.01),21d降至正常;HA水平1d开始升高(P<0.05),3d达高峰(P<0.01),14d恢复至正常水平。结论(1)高氧致足月鼠肺损伤模型在病理过程和病理变化上符合肺纤维化的发生、发展特点;(2)ECM沉积伴随于高氧致足月鼠肺损伤的全过程,早期肺内HA沉积可能参与肺泡的炎症反应,继之FN及I型胶原沉积可能是导致肺纤维化的病理机制之一。

HMGB1在狼疮性肾炎肾小球细胞外基质沉积中的作用及其可能机制

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)的病理改变多种多样,硬化性肾小球肾炎是多数LN患者的终末阶段,因此,该研究探讨了肾小球硬化的原因及机制。该研究通过免疫组化技术检测发现,与癌旁远端正常组织相比,LN肾组织晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)与IV型胶原蛋白(collagen IV,Col IV)的表达水平均明显上调且二者呈明显正相关;ELISA技术检测结果发现,甘草酸及Box A均可抑制由狼疮性肾炎患者置换血浆所诱导的人系膜细胞培养上清中FN蛋白表达的上调;Western blot及IP检测显示,高迁移率组蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)可与HMC表面的RAGE结合并上调其表达水平。综上所述,研究者推测,HMGB1可能先与系膜细胞表面的RAGE结合,继而诱导系膜细胞细胞外基质沉积,从而参与LN肾损伤的发生。

Notch1对糖尿病肾小管间质细胞外基质沉积的影响

本文旨在明确糖尿病肾小管间质中Notch1和自噬水平的变化对细胞外基质沉积的影响,并探讨其机制。取db/m小鼠(正常对照组)和db/db小鼠(糖尿病组)各8只,饲养12周后测定相应的生化指标;同时,体外在正常糖(normal glucose,NG)和高糖(high glucose,HG)条件下培养大鼠肾小管导管上皮细胞(NRK52E细胞),用Western blotting检测各组细胞中Notch1和LC3蛋白表达变化;在NG和HG条件下过表达和敲低Notch1,用共聚焦显微镜观察自噬流变化,用细胞免疫荧光化学法观察肾小管上皮细胞中Notch1、I型和III型胶原蛋白(Collagen-I和III)变化。结果显示,与db/m小鼠比较,db/db小鼠肾组织中Notch1和Collagen-III表达增加(P<0.01),而LC3表达降低(P<0.05);体外实验结果显示,HG组与NG组比较,NRK52E细胞Notch1蛋白表达增加(P<0.01),LC3表达明显降低(P<0.01),高渗组与NG组比较,以上蛋白表达无明显变化;高糖条件下敲低Notch1,激光共聚焦显示自噬增强,而过表达Notch1使自噬向相反方向转变;高糖条件下敲低Notch1,细胞免疫荧光结果显示细胞外基质沉积减少,相反,过表达Notch1使细胞外基质沉积增加。以上结果提示,糖尿病肾组织及高糖培养的肾小管上皮细胞中Notch1表达增加,自噬被抑制;给予外源Notch1敲低干预,自噬恢复,肾小管间质细胞外基质沉积减轻。

基于基质金属蛋白酶2、9调控细胞外基质稳态的离心训练干预2型糖尿病研究进展

骨骼肌胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要病理性特征,但其发生机制仍不十分清楚。近来研究证实,炎症反应引起的细胞外基质(ECM)胶原纤维沉积导致骨骼肌胰岛素抵抗症状发生,原因与基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、9)表达失调有关。鉴于骨骼肌是胰岛素作用的主要靶点,能最大程度吸收和利用脂肪、葡萄糖转运供能,普遍认为运动是预防或治疗2型糖尿病的较好干预措施之一。然而,2型糖尿病患者通常伴有小血管和大血管疾病并发症,进行剧烈运动时很容易出现心血管负荷过载的风险。因此,在具备调控骨骼肌基质金属蛋白酶家族(MMPs)表达量,改善骨骼肌细胞外基质微环境的前提条件下,探讨既可以提高骨骼肌胰岛素敏感性又不诱发心血管负荷过载风险的运动方式具有非常重要的实践意义。本文探讨离心训练干预2型糖尿病的可行性及其运动风险预防优势。结果表明,离心训练能有效增加骨骼肌毛细血管密度、脂肪和葡萄糖代谢量,可能与离心训练通过调控MMP-2、9表达进而改善骨骼肌细胞外基质微环境有关,且由于离心训练时募集的运动单位较少,可以降低运动造成的心血管负荷过载的风险。离心训练干预对2型糖尿病尤其是2型糖尿病血管并发症患者具有独特的降低运动风险的优势。

脂肪间充质干细胞促进皮肤创面修复及其作用机制探讨

大面积深度烧伤以及慢性难愈性创面修复一直是临床治疗的难点。随着干细胞研究的开展和深入，体内外实验证明位于皮下脂肪组织内的脂肪干细胞^[1]（adipose—derivedstemcells，ADSCs）可以有效促进皮肤创面愈合。皮肤刨面愈合^[2]是一个复杂的多因素过程，涉及炎症反应、细胞增殖、细胞迁移、再上皮化、血管生成、细胞外基质沉积以及重塑等多方面。

姜黄素及氧化低密度脂蛋白对系膜细胞增殖和凋亡的影响

系膜细胞（MCs）及系膜基质增生是肾小球肾炎及肾小球硬化过程中常见的病理变化,多数肾小球肾炎呈慢性进行性发展,最终进入终末期肾病阶段,依靠肾替代治疗维持生命.肾小球硬化过程中,MCs不仅是受害者,也是主动参与者,分泌多种细胞炎性因子及细胞外基质,促进肾小球硬化过程.氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）在肾病的发生、发展中扮演重要角色,与细胞膜上的特异或非特异受体结合而沉积于肾脏固有细胞内,促使其释放各种因子,引起肾小球的细胞增殖和细胞外基质沉积,最终导致肾小球硬化.姜黄素有多种药理作用,包括抗炎、抗免疫、抗肿瘤、抑制多种细胞增殖和诱导凋亡作用.本研究通过体外培养大鼠MCs,探讨姜黄素能否通过诱导细胞凋亡和抑制OX-LDL诱导大鼠MCs增殖.

干细胞用于创伤修复的新进展

皮肤组织的创伤修复是整形和烧伤外科中常见的问题,它需要在细胞迁移、细胞增殖和细胞外基质沉积的共同作用下,通过三个相互重叠但又彼此不同的阶段：炎症期、增殖期及成熟期来完成。对于较浅的烧伤创面或小面积的皮肤全层缺损,可以通过残存皮肤附件的干细胞再生或临近皮肤全层缺损，可以通过残存皮肤附件的干细胞再生或临近皮肤的上皮细胞迁移而愈合。

TGF-β/Smad2/3信号在肌成纤维细胞增殖期间需要Wnt/β-catenin信号的激活

动物模型与人类疾病中的纤维化与Wnt/β-连环蛋白（β-catemn)通路的异常活化有关。尽管经过广泛的研究努力，目前科学家仍未发现有效治疗纤维化的方法。肌成纤维细胞（myofibroblasts)是纤维化的主要效应细胞，负责细胞外基质沉积。抑制肌成纤维细胞增殖对于纤维化的治疗至关重要。肌成纤维细胞的增殖可引发一系列效应，从而导致纤维化。近年来,Wnt通路被认为是纤维化疾病的主要影响因素，但其介导的促纤维化的具体机制仍不甚清楚的。

HMG-CoA还原酶抑制剂与肾小球系膜细胞增殖的分子机制

羟甲基戊二酰辅酶A(HMG CoA)还原酶抑制剂不但有抑制HMG CoA还原酶、调节血脂水平的作用 ,还能通过抑制肾小球系膜细胞核因子κB(NF κB)、转化生长因子 β(TGF β)、血小板衍化生长因子 (PDGF)、纤维连接蛋白 (FN)等转录因子、细胞因子和基质蛋白的合成与分泌 ,从而抑制肾小球系膜细胞增殖与细胞外基质蛋白沉积。HMG CoA还原酶抑制剂将在预防和治疗终末期肾病方面发挥重要的作用。

megsin基因对高糖环境中肾小球系膜细胞炎性介质的影响

megsin表达增多可能与以系膜细胞增生和细胞外基质沉积为主的肾小球疾病关系密切。炎性反应在糖尿病肾病（DN）的发生发展中起关键作用已被广泛接受。单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）过度表达介导大量巨噬细胞趋化和激活，加重糖尿病肾损伤。

麝香保心丸减轻自发性高血压大鼠心肌纤维化的研究

目的探讨麝香保心丸对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的作用及其可能的机制。方法将12周龄SHR大鼠分为麝香保心丸治疗组、苯那普利阳性药物对照组及高血压模型对照组,研究麝香保心丸对治疗12周后的SHR大鼠收缩压(SBP)、左室重量(LVM )、左室重量指数(LVMI)、左室心肌胶原含量及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin ,FN)、层粘连蛋白(laminin ,LN)、心脏成纤维细胞(cardiacfibroblast,cFb)和转化生长因子- β1(TGF β1)表达的影响。结果麝香保心丸对SHR无明显降压作用,但与苯那普利一样可降低LVM、LVMI、心肌胶原含量(P <0 .0 5 )。麝香保心丸可明显降低心肌LN、FN含量、心脏成纤维细胞数目和转化生长因子 -β1(TGF -β1)的表达(P <0 . 0 5 )。结论麝香保心丸具有独立降压以外的防治SHR心肌纤维化作用,其机制可能与减少心肌TGF- β1表达和心脏成纤维细胞数目,减少心肌胶原合成及细胞外基质沉积等因素有关。

NF-κB与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是发生在中动脉和大动脉的慢性炎症性疾病，导致血管壁脂质沉积和纤维化。有研究显示，这个复杂的过程包括炎症细胞聚集、纤维细胞增生、细胞外基质沉积、血管生成、纤维化和钙化。其特征是由巨噬细胞衍生而来的泡沫细胞在血管壁蓄积，最终导致斑块形成，并出现管腔狭窄、管壁缺血、缺氧等。