喉癌细胞外基质糖蛋白的表达

目的 :探讨细胞外基质糖蛋白 (tenascin ,TN)在喉部良、恶性病变中的表达 ,及其与喉肿瘤发生及发展的关系。方法 :将 5 8例石蜡包埋喉部病变组织用鼠抗人单克隆抗 TN抗体行免疫组化染色 ,用HPIAS 10 0 0型医学彩色全自动图像分析系统进行分析。结果 :TN在喉部良性病变及正常组织的细胞外间质中无阳性染色 ,在喉的原位癌组织的细胞外间质中有弱阳性染色 ,且二者差异有显著性意义 (P <0 .0 0 1)。在喉的侵袭性鳞状细胞癌组织的细胞外间质中有强的TN染色 ,且在有淋巴结转移的肿瘤组织中染色更强 ,染色面积更广。在喉癌的各病理分级之间阳性染色差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :提示TN与喉癌的发生、发展和转移有关 ,而与其病理分级无关。

细胞外基质磷酸糖蛋白在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的:观察细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)在小鼠牙齿发育过程中牙胚和牙周组织中的表达变化,初步探讨MEPE在小鼠牙齿发育过程中可能发生的作用。方法:免疫组织化学染色法观察MEPE在小鼠牙齿发育过程中牙胚和牙周组织的表达变化。结果:牙胚发育早期,MEPE在成釉细胞、成牙本质细胞和牙髓组织中均有表达。随着牙胚的发育,MEPE在上述细胞中的表达逐步减弱,在牙周膜中逐渐表达。在前期牙本质中表达。牙胚发育完成后,MEPE在牙周膜,特别是成熟牙槽骨骨陷窝中的骨细胞中呈现高表达。结论:细胞外基质磷酸糖蛋白可能在牙齿硬组织形成、牙周膜的形成和稳定等方面发挥重要作用。

Ⅱ型乳光牙家系细胞外基质磷酸化糖蛋白、骨涎蛋白基因的检测

目的通过对2个遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系的细胞外基质磷酸化糖蛋白(matrixextracellularphosphoglycoprotein,MEPE)、骨涎蛋白(BonesialoproteinⅡ,IBSP)进行突变检测,寻找Ⅱ型乳光牙致病基因,为临床诊断、基因治疗提供分子基础。方法在MEPE、IBSP基因内设计引物,经PCR和DNA测序对基因编码序列及其临近内含子进行突变检测。结果在MEPE基因发现c.1027G>A的碱基变化,该变化导致MEPE出现V330I的氨基酸变化,在IBSP发现c.797G>A的碱基变化,该变化导致IBSP出现G219R的氨基酸变化。两种变化在家系内与表型不存在一一对应关系。结论排除了MEPE、IBSP为两个DGI-Ⅱ型家系致病基因的可能,进一步缩小了候选基因范围,为最终的基因治疗提供基础。

细胞外基质磷酸糖蛋白在牙发生及骨形成上的研究进展

细胞外基质磷酸糖蛋白（matrix extracelluar phospho-glycoprotein,MEPE），最初由Rowe等Ⅲ从肿瘤相关性骨软化症（ oncogenic hypophosphatemic osteomalacia, OHO）患者肿瘤细胞的cDNA文库中克隆而得，随后L．Argiro等在骨组织中发现MEPE与矿化密切相关。牙和骨组织均为矿化的组织，在细胞外基质中的蛋白组成以及形成机制上是相似的。目前MEPE在成骨细胞、骨细胞和成牙本质细胞上均表达，其在牙形成及骨发生方面作用已成为研究热点。本文现就MEPE在骨及牙这两个矿化组织中的研究进展进行综述。

细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的构建及初步研究

目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制。方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同长度MEPE基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,并同时观察BPM2对小鼠前骨细胞中不同长度MEPE基因启动子转录活性的影响及其时间效应。结果:成功构建了P-78^+66、P-140^+66、P-300^+66、P-500^+66、P-1 081^+66的MEPE基因启动子;分别转染小鼠前成骨细胞后,不同长度MEPE基因启动子的活性两两相比均有显著性差异(P<0.05),其中以P-500^+66的活性最强,推测-140^-500区域可能为MEPE转录表达的调控元件主要结合部位;BMP2作用于不同长度MEPE基因启动子后检测发现,BMP2在启动子-140^-500区域内可明显上调MEPE基因的转录活性(P<0.05)。结论:成功构建了MEPE基因启动子,并发现BMP2调控MEPE基因启动子的主要区域在-140^-500区域。

细胞外基质磷酸化糖蛋白的研究现状

细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)定位于人类染色体4q21.1。由于MEPE在肿瘤相关性低磷性骨软化患者(OHO)的肿瘤组织中高表达,故其被认为是导致低磷性骨软化的调磷因子。MEPE主要表达于分化成熟的成骨细胞和骨细胞中,具有抑制骨形成和矿化的作用,是一种矿化抑制因子。在牙齿组织中,MEPE主要表达于成牙本质细胞,并与多种致病基因位于染色体4q21上的牙体硬组织疾病如釉质发育不全、Ⅱ和Ⅲ型牙本质发育不全有关。

细胞外基质磷酸化糖蛋白与其多肽链片段的生物学作用

细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)是一种细胞外基质的非胶原磷酸化糖蛋白,也是一种调磷因子,对磷酸盐代谢紊乱及各种骨组织疾病的成骨细胞增生及牙周组织生理连接的重建有重要作用。dentonin/AC100作为MEPE的一个基因片段,对骨组织形成的作用已成为研究热点。本文就近年来MEPE与其多肽链片段dentonin/AC100的研究进行一综述。

重组人细胞外基质磷酸化糖蛋白对人牙髓细胞体外矿化的影响

目的:探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白(Matrix extracellular phosphogl ycoprotein,MEPE)对人牙髓细胞(human dental pulpcells,HDPCs)在体外的矿化能力的影响,从而了解该蛋白在牙齿生长发育过程中的作用。方法:常规方法培养获得人牙髓细胞,实验组中使用的MEPEs的浓度为100μg/L。通过Vonkossa染色观察MEPE对人牙髓细胞矿化的影响。结果:MEPE蛋白能促进人牙髓细胞的矿化。结论:MEPE具有促进人牙髓细胞的矿化的能力,可能在牙齿生长发育过程中起着重要的作用。

细胞外基质磷酸糖蛋白在牙齿组织中的表达

目的细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE)是新近在骨和牙齿组织中发现的蛋白。检测MEPE在牙齿组织中的表达以及随着组织分化MEPE表达的变化。方法通过免疫组化染色对MEPE蛋白在人牙胚中的表达进行初步定位。分别分离培养人的牙髓细胞和成釉器上皮细胞,应用半定量PCR技术探讨MEPE在这两种细胞中的时序表达变化。结果MEPE在成釉细胞、牙髓和成牙本质细胞中均有表达。MEPE的表达随着牙髓细胞的分化而逐渐下调。随着成釉器上皮细胞培养代次的增加,MEPE表达逐渐下降。结论MEPE的下调提示MEPE可能在牙齿硬组织的形成过程中起到调控作用。

骨形态发生蛋白与细胞外基质磷酸化糖蛋白相关性研究进展

骨形态发生蛋白(BMP)是转化生长因子β超家族成员,细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)是一种细胞外基质的非胶原磷酸化糖蛋白,两者都是成骨信号通路中的重要蛋白。近年来发现MEPE表达水平受BMP的调节,并在磷酸盐代谢调节、成骨细胞增殖分化中发挥重要作用,同时与肿瘤细胞的骨转移有着密切的关联。在此,我们简要综述近年来BMP与MEPE的关系以及它们在肿瘤细胞骨转移方面的作用。

细胞外基质磷酸糖蛋白对细胞增殖能力的影响

目的:探讨细胞外基质磷酸糖蛋白对细胞增殖能力的影响。方法:构建含细胞外基质磷酸糖蛋白基因的质粒,稳定转染293T细胞,通过激光共聚焦显微镜与RT-PCR检测转染细胞株hMEPE蛋白表达结果。通过MTT实验检测细胞增殖与迁移能力。通过RT-PCR检测p53基因的表达水平的差异,进一步探讨肿瘤细胞增殖的分子机制。结果:与转染空载体细胞相比,稳定转染hmepe细胞株增殖能力有明显提高,RT-PCR结果显示p53基因在转染目的基因细胞中较转染空载体细胞其表达增高。结论:细胞外基质磷酸糖蛋白可以提高细胞增殖能力。

细胞外基质磷酸糖蛋白对体外细胞生物学行为的影响

目的:探讨细胞外基质磷酸糖蛋白对体外细胞生物学行为的增殖影响及基因表达。方法:构建含细胞外基质磷酸糖蛋白基因的质粒后稳定转染细胞株,利用RT-PCR检测转染后细胞株h MEPE蛋白表达结果。基于蛋白表达结果基础上通过RT-PCR检测p53基因的表达水平,MTT实验检测细胞增殖水平。结果:RT-PCR结果显示与转染空载体细胞相比p53基因在转染目的基因细胞表达增高。MTT结果有统计学意义(P<0.05),显示转染后的hmepe细胞株较转染空载体细胞相比增殖能力明显提高。结论:细胞外基质磷酸糖蛋可以通过p53信号通路提高细胞增殖能力。

稳定转染细胞外基质磷酸糖蛋白细胞株构建及附着力改变研究

目的:检测细胞外基质磷酸糖蛋白对MRC5细胞附着能力的影响。方法:构建含细胞外基质磷酸糖蛋白基因及细胞周期检查点蛋白的质粒,稳定转染MRC5细胞,检测其附着能力的改变。结果:稳定转染细胞外基质磷酸糖蛋白与细胞周期检查点蛋白的MRC5细胞株的附着能力明显高于其他细胞株。结论:细胞外基质磷酸糖蛋白可以促进细胞附着。

细胞外基质磷酸糖蛋白在大鼠牙周组织缺损愈合过程中的表达

目的:观察细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE)在大鼠牙周组织缺损愈合过程中的表达,初步探讨MEPE在牙周组织再生中可能发生的作用。方法:24只成年健康雄性Wistar大鼠随机分2组:术后14 d组和术后28 d组各12只,行左侧下颌骨开窗术,制备牙周组织缺损模型,HE染色观察牙周组织缺损愈合情况,免疫组织化学染色法观察MEPE在牙周组织缺损愈合过程中各组织的表达。结果:术后14 d,术区有部分新生牙槽骨形成,部分牙周纤维附着于根面牙本质上;术后28 d,术区完全被新生牙槽骨覆盖,在新生牙槽骨和牙本质之间可见牙周膜和部分牙骨质生成,牙周膜大部分附着于根面上;牙周组织缺损愈合过程中,MEPE在健康对照侧仅呈弱阳性表达,而在缺损区牙槽骨和牙周膜相关细胞中均呈阳性表达。结论:在牙周组织缺损愈合过程中,细胞外基质磷酸糖蛋白参与牙槽骨以及牙周膜的再生。

转录因子Runx2调控前成骨细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达

背景:细胞外基质磷酸化糖蛋白基因在骨的矿化和吸收、成骨细胞与破骨细胞的平衡中起重要的作用,研究细胞外基质磷酸化糖蛋白的功能及其调控机制可为骨质疏松症的治疗提供新的思路。目的:分析转录因子Runx2在小鼠前成骨细胞中对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的调控作用,进而初步研究转录因子Runx2在骨形成发育过程中的作用。方法:首先根据Genbank中Runx2的基因序列构建Runx2真核表达载体;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析Runx2对不同长度的细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响,以确定Runx2有明显作用的启动子区段,分析3种MAPK信号通路抑制剂调控Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响;最后利用定时定量RT-PCR法分析Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子表达活性的影响。结果与结论:成功构建Runx2真核表达载体;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示Runx2能够上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,在(-300-+66)366 bp片段区域内上调效果较为显著,Runx2可通过激活MEK激酶MAPK通路上调细胞外基质磷酸化糖蛋白启动子活性;定时定量RT-PCR法检测再次验证Runx2上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达水平。提示转录因子Runx2可以通过MEK激酶MAPK信号通路对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因表达进行调节,为探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白在骨形成发育过程中的意义奠定基础。

靶向细胞外基质磷酸糖蛋白的microRNA的筛选及鉴定

目的:寻找靶向细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)基因的微小RNA(miRNA),并检测其对人HeLa细胞内源性Mepe基因表达的影响。方法:通过NCBI检索人源Mepe的3'UTR,利用miRNA预测工具TargetScan预测可能靶向Mepe的所有miRNA,通过双萤光素酶报告基因系统检测miRNA与Mepe3'UTR的结合情况,从而初步筛选出可能靶向Mepe的miRNA;同时,用Western印迹检测miRNA经转染后对Mepe基因表达的影响。结果:利用TargetScan预测出36条可能靶向Mepe的miRNA,根据分值及匹配情况从中挑选出6条进行验证;与转染空载体pGL3-cm的相对荧光素值相比,转染miR-376a的相对荧光素值降低较为明显,而当Mepe3'UTR与miR-376a结合位点突变后,miR-376a不能抑制萤光素酶的活性;Western印迹结果显示miR-376a能明显抑制MEPE的表达。结论:miRNA-376a可能是靶向Mepe基因的miRNA,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。

人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备

目的原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体。方法设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白。结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。

细胞外基质磷酸糖蛋白及其重要的结构片段

细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)是一种细胞外基质的非胶原性磷酸化糖蛋白,主要表达于骨组织、牙组织和肾近球小管中,在骨形成矿化以及调节磷吸收方面发挥重要作用。酸性丝氨酸-天冬氨酸-富集细胞外基质磷酸糖蛋白相关性基序与细胞外基质磷酸糖蛋白活性片段/AC-100多肽是MEPE的重要结构域,其生物学功能是近来研究的热点。

人细胞外基质磷酸化糖蛋白对人牙髓细胞生长和黏附的影响

目的探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)对人牙髓细胞(HDPCs)黏附、伸展、增殖的影响。方法常规培养获得人牙髓细胞,各实验组中MEPEs的浓度分别为0.01,0.1,1,10,100μg/L以不加MEPE作为空白对照组。细胞计数法测定细胞的黏附能力;通过计数高倍视野中伸展的细胞数,计算骨髓基质细胞在不同时间的伸展率;MTT法检测各组细胞的增殖活性。结果体外培养的人牙髓细胞生长良好;各实验组间及与对照组比较,100μg/L组对细胞的黏附性的影响有差异;各组细胞的伸展率无差异;MEPE对人牙髓细胞有较明显的促增殖作用。结论 MEPE对体外培养的人牙髓细胞的伸展率无影响,但可明显促进其黏附性和增殖。

小分子整联蛋白结合配体N-连接糖蛋白家族成员在牙髓干细胞分化过程中的作用

体外诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化并观察其过程,是目前研究牙髓干细胞分化机制和寻找其分化标志的主要方法。在成牙本质细胞分化和矿化过程中,小分子整联蛋白结合配体N-糖蛋白(SBLING)家族成员发挥着重要作用。下面就SBLING家族成员牙本质涎磷蛋白、牙本质基质蛋白-1和细胞外基质磷酸糖蛋白在牙髓干细胞分化过程中的作用作一综述。