细胞外基质对大鼠卵巢颗粒细胞分泌激素和合成蛋白质功能的影响

为了探讨细胞外基质对卵巢颗粒细胞功能的影响。从未成熟ＳＤ大鼠分离出卵巢颗粒细胞，以３×１０５细胞／孔的密度，培养在铺有不同浓度的层粘连蛋白（ＬＮ）或纤粘连蛋白（ＦＮ）的培养板上，观察细胞贴壁情况。４８小时后加入卵泡刺激素和睾酮，再培养４８小时，收集培养液，测定雌二醇和孕酮。另外在双池培养系统中，在铺有和未铺ｍａｔｒｉｇｅｌ的上池中分别加入不同浓度的颗粒细胞，利用３５硫标记蛋氨酸掺入法观察ｍａｔｒｉｇｅｌ对颗粒细胞合成蛋白的影响，并利用免疫印迹法鉴定颗粒细胞膜蛋白中ＬＮ结合蛋白的分子量。结果显示，４μｇＬＮ即可使颗粒细胞在４小时内贴壁及展开，雌二醇和孕酮的产量增加。ＦＮ却无显著影响。从ｍａｔｒｉｇｅｌ双池培养系统中取上池培养液，测定放射活性，铺有ｍａｔｒｉｇｅｌ组显著高于对照组。放射自显影图象显示ｍａｔｒｉｇｅｌ显著刺激颗粒细胞合成功能。免疫印迹结果显示颗粒细胞膜蛋白存在着ＬＮ的多结合位点。本实验证实：ＬＮ对卵巢颗粒细胞的附着、伸展。

老年人皮肤局部应用17β-雌二醇可通过体内途径刺激TGF-β信号增加细胞外基质蛋白质合成

To investigate the effects of topically applied 17β-estradiol on the expression of extracellular matrix proteins in aged human skin, 17β-estradiol (0.01%) and its vehicle (70%propylene glycol, 30%ethanol) were applied to aged (68-82 y, eight females and five males) human buttock skin under occlusion for 2 wk (three times per week). Topical 17β-estradiol was found to increase the expression of type 1 procollagen mRNA and protein significantly in human aged skin in vivo. In addition, MMP-1 protein levels were reduced by topical 17β-estradiol. The expressions of TGF-β1,TGF-βtype II receptor, and Sma and Mad related (Smad)3 were increased by topical 17β-estradiol in aged human skin, and TGF-β1 neutralizing antibody inhibited 17β-estradiol-induced procollagen synthesis in cultured fibroblasts. We also found that the expressions of tropoelastin and fibrillin-1 mRNA and protein, and elastic fibers in aged skin were also increased by topical 17β-estradiol. Topical 17β-estradiol also increased keratinocyte proliferation and the epidermal thickness in aged human skin. We also observed the same effects of topical 17β-estradiol in young skin. In conclusion, our results suggest that topical 17β-estradiol treatment may improve the cutaneous function of aged human skin by improving the connective tissue and increasing epidermal thickness.

联合检测尿核基质蛋白22和尿脱落细胞在监测膀胱癌术后复发中的临床价值

目的探究联合检测尿脱落细胞和尿核基质蛋白22(NMP22)在监测膀胱癌术后复发中的临床应用价值。方法对我院2017年10月至2022年3月收治的106例膀胱癌手术后患者行荧光膀胱镜检查,检查前分别留取尿液样本行NMP22和尿脱落细胞检测;以荧光膀胱镜检查和病理结果为金标准,评价单独检测与联合检测NMP22和尿脱落细胞在诊断膀胱癌复发中的敏感性、特异性、准确性、阳性率和癌检出率,以及在不同分期、分级肿瘤中的阳性检出率。结果单独检测NMP22和尿脱落细胞诊断膀胱癌复发的敏感性分别为60.78%和50.98%,特异性分别为78.18%和87.27%,准确性均为69.81%,而联合检测的敏感性高达92.16%、特异性为74.55%、准确性升至83.02%。联合检测NMP22和尿脱落细胞的阳性率(57.55%)、癌检出率(44.34%)均高于单独检测NMP22的阳性率(40.57%)、癌检出率(29.25%)以及单独检测尿脱落细胞的阳性率(31.13%)、癌检出率(24.53%)。在Ta期和G1级肿瘤中,联合检测的阳性率明显高于单独检测尿脱落细胞的阳性率(P<0.05);在T1期肿瘤中,联合检测的阳性率明显高于单独检测NMP22的阳性率(P<0.05);在G2级肿瘤中,联合检测的阳性率明显高于单独检测NMP22和单独检测尿脱落细胞的阳性率(P<0.05)。结论联合检测NMP22和尿脱落细胞可以明显提高诊断膀胱癌复发的敏感性、准确性、阳性率和癌检出率,提高在Ta、T1期和G1、G2级肿瘤中的检出阳性率,可在行膀胱镜复查前为膀胱癌患者提供更充分、全面及准确的评估,具有一定的临床意义。

缺血/再灌注损伤模型心脏细胞外基质重构的蛋白质组分析

传统的研究以细胞内的诸种蛋白为重点。本研究与之不同，采用一种全新概念的研究方法，在组织丢失细胞之前或不溶于通常的缓冲提取液的细胞外整合的诸成分未变为可溶解之前，分析新合成的基质蛋白或在细胞外空隙松散地结合的一些因子。

体外循环心内直视术对外周血单个核细胞蛋白质表达谱的作用

目的:观察体外循环(CPB)心内直视术患者外周血单个核细胞蛋白质表达谱的变化。方法:11例体外循环心内直视术患者,分别于体外循环前(T0)、体外循环主动脉开放后1 h(T1)和术毕(T2)3个时点抽取动脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),采用双向电泳和质谱方法比较、分析3个时间点差异蛋白的表达,并采用W estern blot进行验证。结果:双向电泳和质谱鉴定出12个差异蛋白,其中S100A9表达量于CPB后1 h达到高峰,手术结束时开始下降,但未回复到术前水平(P<0.05)。结论:体外循环能上调外周血单个核细胞S100A9等蛋白的表达。

两种细胞外基质糖蛋白在鼻息肉中的表达

目的 探讨细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM)成分纤维粘连蛋白 (fibronectin ,FN)和固生蛋白 (tenascin ,TN)在鼻息肉组织中的表达。方法 采用免疫组织化学法检测 34例鼻息肉和 2 0例下鼻甲组织中TN、FN的表达 ,并分析鼻息肉中的表达与鼻息肉组织类型、嗜酸粒细胞 (eosinophlis,EOS)浸润程度和临床分型、分期及大小的关系。结果 ①TN、FN在鼻息肉组织中表达的平均灰度值分别为 16 3 10± 10 5 4、16 3 2 4± 11 5 2 ,而在下鼻甲组织中表达的平均灰度值分别为 175 4 9± 9 2 9、173 93± 7 92 ;两组间的差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;②TN、FN在水肿型鼻息肉组织中的表达显著强于在腺囊泡型和纤维型鼻息肉组织中的表达 (P <0 0 5 ) ;③FN表达的灰度值与EOS计数有显著相关 (r=- 0 6 0 ,P <0 0 1) ;④TN、FN的表达与鼻息肉分型、分期及大小无明显关系 (P >0 0 5 )。结论除构成组织的物理支架外 ,ECM还可能通过参与鼻息肉上皮细胞增生。

补阳还五汤及有效组分对大鼠增生血管内膜细胞外基质蛋白表达的影响

目的:探讨补阳还五汤有效组分生物碱和苷对大鼠主动脉球囊损伤后增生内膜中细胞外基质(ECM)及其调节因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达的影响,揭示该方作用的物质基础及其机制。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、生物碱治疗组、苷治疗组、补阳还五汤原方治疗组和阿托伐他汀治疗组,以球囊导管损伤主动脉内膜后第2d开始灌胃给药,连续14d,未次给药后第2d(术后第16d)取胸主动脉损伤段,以免疫组化法测定增生内膜中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)和MMP-9、TIMP-1的表达。结果:(1)模型组Col-Ⅰ表达增强(P<0.01);补阳还五汤原方治疗组、生物碱治疗组、苷治疗组和阿托伐他汀治疗组Col-Ⅰ表达显著低于模型组(P<0.01)。模型组FN表达增强(P<0.01);生物碱治疗组和阿托伐他汀治疗组FN表达强度显著低于模型组(P<0.01)。而各组LN表达强度的变化差异均无显著(P>0.05)。(2)模型组TIMP-1表达增强(P<0.05);生物碱治疗可使TIMP-1表达降低(P<0.05);而原方、苷和阿托伐他汀对TIMP-1表达的增强无显著影响(P>0.05)。模型组MMP-9表达无显著变化(P>0.05);生物碱治疗组、苷治疗组和阿托伐他汀治疗组MMP-9表达强度显著高于模型组(P<0.05);而补阳还五汤原方治疗组MMP-9表达无显著变化(P>0.05)。结论:补阳还五汤及其2种有效组分生物碱和苷可抑制增生内膜中Col-Ⅰ的表达,生物碱还可抑制FN的表达。生物碱和苷可增强MMP-9的表达,生物碱还可抑制TIMP-1的表达。提示补阳还五汤及其2种有效组分生物碱和苷可能通过抑制增生内膜中ECM的合成,促进ECM成分的清除和降解以对抗血管内膜增生。

细胞外基质在肝内的代谢与肝纤维化的形成

0引言 肝纤维化(hepatic fibrosis)是肝脏内细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)成份弥散性过度沉积性疾病,无假小叶形成.肝纤维化的发生机制主要是肝内ECM合成与降解失衡,表现为ECM大量堆积,肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)在此过程中起着关键性作用[1-3].

腺相关病毒-1介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠角膜基质细胞体内外转染的研究

目的：探讨血清1型腺相关病毒（rAAV1）介导增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因体内、外转染大鼠角膜基质细胞后绿色荧光蛋白（GFP）的表达及转染率。方法：采用携带绿色荧光蛋白报告基因的血清1型腺相关病毒（rAAV1-EGFP）感染原代培养的SD大鼠角膜基质细胞，通过荧光显微镜和流式细胞仪观察和检测EGFP的表达及阳性率。建立大鼠异体角膜移植模型，用含rAAV1-EGFP转染液的培养基在37℃孵育SD大鼠角膜植片同时浸泡缝线18h，再用此缝线间断缝合，将植片移植到大鼠角膜植床，术后通过荧光体视镜观察Wistar大鼠角膜出现EGFP荧光的起始时间及分布情况。结果：按rAAV1-EGFP不同转染倍数（MOI）转染角膜基质细胞。转染后3d，在倒置荧光显微镜下观察到角膜基质细胞的细胞质有GFP阳性表达。体视荧光显微镜观察到大鼠角膜中开始有GFP阳性表达；随MOI值的增高而增强，转染再7～9d达到高峰，此时检测rAAV1-EGFP对角膜基质细胞的转染效率，MOI=10^时是16．3％，MOI=10^4时是30．3％，MOI=10^5时是43．6％，MOI=10^6时是47．5％.rAA1－ECFP在大鼠角膜中的表达也明显增强。结论：rAAV1-ECFP可以在体内外稳定、有转染大鼠角膜基质细胞，是角膜基质细胞理想的报告基因。

细胞外基质的代谢

0 引言细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)是指位于机体细胞外的非细胞性的有形或无定形成分.ECM的代谢包括ECM的合成与降解,ECM合成与降解失衡是肝纤维化形成的基础.I

S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路调控小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢

目的探讨S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路对小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢的调控。方法不同浓度的外源性S100A11(0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml)与小鼠软骨细胞孵育48 h,检测基质金属蛋白酶13(MMP-13)、ADAMTS-5以及Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白表达,以筛选作用最显著的S100A11浓度。加入不同浓度Anti-P38(0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml)与小鼠软骨细胞预孵育12 h后,再加入作用最强的外源性S100A11孵育(10μg/ml)48 h,检测MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白表达。结果小鼠软骨细胞MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达随外源性S100A11浓度的增加而增加,且明显高于对照组;而Ⅱ型胶原蛋白表达随外源性S100A11浓度的增加而减少,且明显低于对照组。加入Anti-P38预处理后,MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达均明显低于S100A11单独处理组,而Ⅱ型胶原蛋白表达明显高于S100A11单独处理组。结论外源性S100A11通过与RAGE结合,并经P38MARK信号转导通路诱导软骨细胞肥大和细胞外基质的降解,其机制可能与通过P38MAPK信号转导通路诱导MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达,并降低Ⅱ型胶原蛋白表达。

细胞外基质蛋白1基因在病理性瘢痕中的差异表达

目的:病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,比较细胞外基质蛋白1基因在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的表达差异并分析其意义。方法:实验于2003-05/2005-01在南方医科大学分子生物学研究所完成。病理性瘢痕标本来源于南方医院整形外科手术患者,正常皮肤组织来源于无瘢痕体质趋势及无免疫性疾病的包皮手术标本。术前均征求患者同意后方留取标本。抽提增生性瘢痕和瘢痕疙瘩与正常皮肤组织的总RNA,反转录并双色荧光标记,与含有细胞外基质蛋白1基因的人类基因表达谱芯片杂交,经荧光扫描、数据处理和统计学分析,比较细胞外基质蛋白1基因在3种组织中的表达差异。结果:①芯片杂交图像显示荧光信号强度较高,背景均一,符合重复性和可靠性的要求和分析标准。②细胞外基质蛋白1基因在瘢痕疙瘩组织中的表达为正常皮肤组织的3.32倍,而在增生性瘢痕中的表达仅为正常皮肤组织的1.09倍。结论:细胞外基质蛋白1基因在瘢痕疙瘩中高表达而在增生性瘢痕中无差异表达,提示细胞外基质蛋白1基因在瘢痕疙瘩中呈特异性表达。

血管内皮生长因子与细胞外基质蛋白1在胃癌中的表达及意义研究

目的探讨VEGF、ECM-1在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系以及之间有无相关性。方法应用免疫组织化学染色技术检测血管内皮生长因子(VEGF)及ECM-1在胃癌及正常胃组织中的表达。结果 (1)VEGF/ECM-1蛋白在胃癌组织中与正常胃组织两组间差异有统计学意义(P<0.01)。(2)VEGF/ECM-1阳性表达在不同组织分化程度、不同胃癌浸润深度、不同TNM分期及是否有淋巴结转移间,均差异有统计学意义(P<0.05)。(3)VEGF和ECM-1蛋白的表达存在正相关关系。结论 VEGF、ECM-1在胃癌组织中呈高表达状态,并且两者的表达均与胃癌临床病理特征有相关性。

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1在糖尿病大鼠肾组织细胞外基质重构中的作用

目的探讨糖尿病大鼠肾组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的表达特征及在细胞外基质重构中的作用。方法雄性Wister大鼠60只,腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)制备糖尿病大鼠模型,48 h后血糖≥16.7 mmol/L,尿糖3+~4+者入选糖尿病组(DM),DM组造模成功后1、2、4、8、12周各组宰取10只大鼠,另取10只作为对照组。免疫组化检测肾组织MKP-1和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)层粘连蛋白(LN)的表达。Western印迹检测肾组织MKP-1和磷酸化p38 MAPK的水平,RT-PCR检测MKP-1和纤维粘连蛋白(FN)mRNA的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠肾组织1~8周MKP-1蛋白及mRNA的表达降低(P<0.01),磷酸化p38 MAPK水平在第1、2、4、8周表达升高(P<0.01),在第12周差异无统计学意义(P>0.05);LN 4~12周均高于对照组(P<0.01),FN mRNA 2~12周均高于对照组(P<0.01)。结论 MKP-1在糖尿病肾组织中表达下降,在细胞外基质重构中发挥一定作用,可能与p38 MAPK的去磷酸化有关。

细胞外基质对血管平滑肌细胞桩蛋白和纽蛋白表达的影响

【目的】探讨细胞外基质（extracellular matrix，ECM）对体外培养的血管平滑肌细胞（smooth muscle cells，SMCs）黏着斑（focal adhesions，FAs）分子桩蛋白（paxillin）和纽蛋白（vinculin）表达的影响。【方法】将第4～6代大鼠主动脉SMCs分别种植在涂有纤维连接蛋白（fibronectin，FN）或层黏连蛋白（laminin，LN）的盖玻片上或种植在基质胶内进行培养。采用共聚焦免疫荧光技术检测paxillin和vinculin的表达，并通过FAs分子paxillin／F-aetin和vineulin／F-actin的双重荧光染色显示。【结果】种植在FN上的vinculin表达最低，LN次之，而在Matrigel胶中表达最高；在FN上vinculin在胞质分布较多，在FA＇s较少；而生长在LN基质上和基质胶中vincu1in较多定位在FAs，在胞质分布较少。Vinculin的荧光强度在FN、LN及基质胶中分别为（64．72±7．18）AU／μm2，（89．82±5．11）AU／μm2，（117．19土16．99）AU／μm2，依次增高，且组间比较有统计学意义（P〈0．05）。种植在FN上的paxillin最高，LN上次之，而Matrigel胶中表达最低；基质胶中paxillin主要分布于FAs，而FN上的除分布于FAs外，在胞浆的表达水平也较高。Paxillin的荧光强度在FN、LN及基质胶中分别为（129．87±10．22）AU／μm2、（86．59±9．90）AU／μm2、（56．32±7.54）AU／μm2，依次降低，且组间比较有统计学意义（P〈0．05）。【结论】不同的ECM成分对FAs分子的表达有影响：FN上调paxillin的表达，下调vinculin的表达；而LN和基质胶上调vinculin的表达，下调paxillin的表达。

细胞外基质代谢与动脉管壁弹性和脉压差的关系引起的关于高血压病治疗策略的新思考

原发性高血压病的反映指标包括收缩压、舒张压及脉压差。传统高血压病治疗方案的重点放在降低收缩压而较少涉及舒张压及脉压差的改善。本文旨在探讨一种通过改善血管壁弹性从而改善舒张压,缩小脉压差的新型治疗方案,以供临床参考。

白细胞介素-10对肝纤维化大鼠细胞外基质及其代谢酶表达的影响

目的探讨白细胞介素(IL)10对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及其抗纤维化作用的可能机制。方法47只SD大鼠随机分为正常组(N组)和CCl4组(C组)。C组通过CCl4腹腔注射造模。至造模第9周,C组随机分为模型组(M组)、IL10治疗组(T组)和自然恢复组(R组)。SP免疫组化法检测肝脏MMP2、MMP9、TIMP1及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,HE染色判断肝纤维化程度。结果成功建立肝纤维化模型,肝病理组织学显示,与M组比较,T组肝纤维化程度有明显改善(P=0.001),而R组未见明显好转。与N组比较,MMP2、MMP9、TIMP1及Ⅰ、Ⅲ型胶原在M组表达明显升高(P<0.01),T组显著降低(P<0.01),R组表达较M组有所降低(P<0.05),但仍明显高于T组(P<0.01)。结论IL10可抑制纤维化大鼠肝组织MMP2、MMP9、TIMP1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,减弱细胞外基质合成,加速其降解进而发挥抗纤维化作用。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与妇科肿瘤

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)又称CD147,广泛地存在于人类各种肿瘤细胞,刺激与肿瘤有关的成纤维细胞和肿瘤细胞自身的基质金属蛋白酶合成增加,在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中起重要作用。近年来其在肿瘤的早期发生和浸润及肿瘤抗药性方面的作用已受到重视。EMMPRIN与妇科肿瘤的发展关系密切,现就其与妇科肿瘤的关系及其结构和功能作一综述。

热休克蛋白47对转化生长因子β_1诱导肾小管上皮细胞合成细胞外基质的影响

目的探讨热休克蛋白47(HSP47)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肾小管上皮细胞(HK-2)合成细胞外基质(ECM)的影响。方法以10ng/mL TGF-β1刺激HK-2细胞0、12、24、48h,蛋白印迹法检测HSP47的表达,蛋白印迹法及Real-time聚合酶链反应(PCR)法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达。然后转染HSP47小干扰RNA(siRNA)及阴性对照,后采用蛋白印迹法检测HSP47的表达,蛋白印迹法及Real-time PCR法检测ColⅠ和ColⅣ的表达。结果 TGF-β1作用于HK-2细胞后,HSP47蛋白呈时间依赖性表达上调(P<0.05),同时ColⅠ和ColⅣ蛋白及mRNA呈时间依赖性表达上调(P<0.05),转染HSP47siRNA后,蛋白印迹法显示与对照组比,TGF-β1组HSP47表达增强(P<0.01),与TGF-β1组比,HSP47siRNA组HSP47表达降低(P<0.01),对照组无明显变化(P>0.05),蛋白印记及Real-time PCR结果显示,与对照组相比,TGF-β1组ColⅠ和ColⅣ表达明显上调(P<0.01);与TGF-β1组相比,HSP47siRNA组ColⅠ和ColⅣ表达明显下调(P<0.05和P<0.01);而HSP47siRNA(-)组无明显的变化(P>0.05)。结论HSP47可促进HK-2细胞ECM合成,抑制HSP47可延缓肾间质纤维化疾病进展。