松弛素对高糖环境下肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响及其作用机制研究

目的 观察人松弛素（RLX）对高糖培养人肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响,初步探讨其可能作用机制.方法 将人肾小球系膜细胞株分组：正常糖组：含5.5 mmol/L葡萄糖;高糖组：含30 mmol/L葡萄糖;松弛素干预组：高糖（30 mmol/L葡萄糖）＋松弛素（10 ng/ml）;α-平滑肌动蛋白（α-SMA）的检测增加TGF-β1阳性对照组,即5.5 mmol/L葡萄糖＋TGF-β1（5μg/L）.CCK-8法检测松弛素对系膜细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清中Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）的表达.qPCR检测系膜细胞TGF-β1 mRNA表达.免疫印迹技术（Western blot）检测α-SMA表达,确定肾小球系膜细胞表型转化情况.结果 松弛素对正常糖组及高糖组系膜细胞活力均未发现有影响;与正常糖组相比,高糖组各时间点肾系膜细胞分泌ColⅣ、FN显著增加,48 h尤为明显（57.28±0.59 vs 41.85 ±0.03、56.52±0.88 vs 33.80±0.24,P＜0.01）,α-SMA表达增加（P＜0.05）.与高糖组比较,松弛素干预组ColⅣ、FN表达在48 h下降最为明显（47.08±0.03 vs 57.28±0.59、36.16±0.52 vs 56.52±0.88,P＜0.01）,α-SMA表达减少（P＜0.01）,TGF-β1 mRNA表达下降（P＜0.01）.结论 松弛素能抑制高糖培养的系膜细胞分泌细胞外基质,部分作用机制是通过抑制细胞表型转分化及抑制TGF-β1基因表达,具有抗纤维化作用.

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子及基质金属蛋白酶9在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）在卵巢癌组织中的表达意义。方法应用免疫组化sP法对55例上皮性卵巢癌组织、21例良性上皮性卵巢肿瘤组织中EMMPRIN、MMP-9的表达情况，分析卵巢癌组织及良性上皮性卵巢肿瘤组织中EMMPRIN、MMP-9阳性表达率，其与临床病理指征的关系。结果卵巢上皮性癌组织中EMMPRIN及MMP-9阳性表达率[89．1％（49／55），96．4％（53／55）]高于卵巢良性肿瘤[14．3％（3／21），23．8％（5／21），）（2=40．64，45．84，P〈0．01]。上皮性卵巢癌组织中EMMPRIN与MMP9阳性表达呈正相关（rs=0．5535，P〈0．01）。结论EMMPRIN、MMP-9在肿瘤细胞及基质细胞中阳性表达率高，二者参与了卵巢癌的发生、发展，并有促进卵巢癌的浸润和转移作用。

3-溴丙酮酸对人乳头瘤状甲状腺癌TPC-1细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察3-溴丙酮酸对体外人乳头瘤状甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法分别用含0、20、40、60、80、100、120、140、160、180和200μmol/L 3-溴丙酮酸的细胞培养液培养TPC-1细胞24 h后,MTT检测细胞增殖活性。含0、100和200μmol/L 3-溴丙酮酸的细胞培养液培养TPC-1细胞24 h或48 h后,划痕实验及transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-9、人源葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)和Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶(membrane-type 1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)的表达水平。结果100、120、140、160、180和200μmol/L 3-溴丙酮酸均抑制TPC-1细胞的增殖活性,呈剂量依赖性(均P<0.01)。3-溴丙酮酸作用于TPC-1细胞24和48 h,随着药物浓度的增高,TPC-1细胞迁移越慢,侵袭细胞越少(均P<0.05)。3-溴丙酮酸作用于TPC-1细胞24和48 h,TPC-1细胞内Glut1、MT1-MMP、MMP-2和MMP-9表达水平均随药物浓度增高而减弱(均P<0.05)。结论3-溴丙酮酸可抑制TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并可能与下调Glut1、MT1-MMP、MMP-2和MMP-9蛋白表达有关。

过表达NDRG1对TGF-β诱导肺癌A549细胞上皮-间质转化的逆转作用

目的 探讨NDRG1对转化生长因子β（TGF-β）诱导的人肺癌A549细胞上皮-间质转化（EMT）的逆转作用及可能机制.方法 转染NDRG1过表达质粒至A549细胞,采用5 μg/L TGF-β1处理细胞,相差显微镜观察细胞形态学变化;Transwell侵袭实验检测A549细胞侵袭能力;Real-time RT-PCR、Western blot分别检测NDRGl mRNA、蛋白的表达,Western blot检测EMT相关标志物钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）,以及EMT相关信号分子Snail、AKT、Smad的表达.结果 TGF-131可诱导A549细胞向间质样细胞表型转化,上调间质样标志物Vimentin表达和下调上皮样标志物E-cadherin表达,并增强细胞侵袭能力;过表达NDRG1可逆转TGF-131的上述作用;且过表达NDRG1能够抑制AKT的磷酸化,下调EMT转录因子Snail的表达.结论 NDRG1能够逆转TGF-B1对人肺癌A549细胞上皮一间质转化的诱导作用,并降低细胞的侵袭能力,其机制可能与NDRG1抑制AKT/Snail信号有关.

膝骨性关节炎患者关节液软骨寡聚基质蛋白的表达及其临床意义

目的 检测不同严重程度膝骨性关节炎（KOA）患者关节液中软骨寡聚基质蛋白（COMP）的表达情况,探讨COMP与膝骨性关节炎严重程度的关系.方法 选择本院2009年6月至2011年3月期间麻醉科疼痛门诊100例KOA患者,按Michel Lequesen膝骨性关节炎严重度分级（ISOA）进行分为5组（轻度组,中度严重组、严重组、非常严重组、极严重组）,并选择20例健康志愿者作为健康对照组.采集各组患者的膝关节液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测COMP的水平.结果 （1）5组KOA患者膝关节液中COMP的含量均比健康对照组增高（P＜0.05）；（2）5组KOA患者膝关节液COMP与病情严重程度成正相关,即膝关节液COMP含量随着膝关节炎严重程度的增加而逐渐升高（P＜0.05）.结论 膝关节液中COMP含量可作为KOA的诊断指标之一,与KOA的病情发展相关.

Matrilin-3基因表达在骨肉瘤转移中的作用

目的寻找骨肉瘤转移相关基因,初步分析Matrilin-3基因表达与骨肉瘤转移的关系。方法通过RT-PCR、Westen-blot及免疫组化检测该基因在不同骨肉瘤细胞系、正常成骨细胞、骨肉瘤及正常骨组织临床标本中的表达,并分析其与骨肉瘤患者预后的关系。结果 Matrilin-3在高转移MG36-A1细胞系中表达明显下降。RT-PCR、Westen-blot检测发现Matrilin-3在正常成骨细胞中高表达,在SAOS2、143B中表达缺失。免疫组化检测显示在25例骨肉瘤临床标本中,24%(6/25例)的标本Matrilin-3表达为阳性,其余为阴性;在正常骨组织中Matrilin-3表达强阳性。Matrilin-3表达与骨肉瘤患者预后呈正相关(P=0.023)。结论 Matrilin-3的表达随着骨肉瘤细胞系转移能力的增加而出现缺失,Matrilin-3可能成为阻遏骨肉瘤转移的新靶点。

膝关节注射透明质酸钠对力竭性跑台运动大鼠滑膜组织COMP的影响

目的 观察关节腔注射透明质酸钠（HA）对力竭性跑台运动大鼠滑膜组织中软骨寡聚基质蛋白（COMP）表达的影响,探究滑膜中COMP对HA治疗效果是否具有评价作用.方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为安静对照组、力竭性运动组和力竭性运动加HA注射组,12只/组.力竭性运动加HA注射组1次/周,共5次的膝关节腔HA注射,在6周力竭性跑台运动后,取各组大鼠膝关节滑膜组织,HE染色观察其组织变化,并对其滑膜炎程度行组织学评分,应用免疫组化法检测COMP在各组大鼠滑膜组织中的表达.结果 力竭性运动加HA注射组大鼠滑膜组织滑膜炎症程度显著低于力竭性运动组大鼠（t=7.15,P＜0.01）,滑膜组织COMP的表达也显著低于安静对照组大鼠（t=6.30,P＜0.01）.结论 关节腔注射HA对膝关节滑膜炎具有治疗作用,通过检测滑膜组织中COMP的表达可以评价HA对于滑膜炎的治疗效果.

pp67-mRNA在肾移植术后人巨细胞病毒感染中的诊断价值

目的探讨pp67对。肾移植术后人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染及指导抗病毒治疗上的作用。方法采用NASBA测定32例肾移植术后患者外周血中的pp67，同时通过免疫荧光技术（IFA）对早期抗原pp65（CMV-Agpp6S）的检测来判断HCMV活动性，术后第3周，第7周分别用ED-TA管采血5-7rnl，每人每次两管做实验样本，立即送检并将二者结果相比较。其中检测结果有一项阳性的患者，选择更昔洛韦进行对症抗病毒治疗，对pp67-mRNA和pp65抗原检测双阳性患者，在选择更昔洛韦对症治疗时，并随访观察每周采血行pp67检测CMV活动情况，同时CMV抗原血症法检测，将二者结果比较，了解pp67与HCMV活动性感染及CMV病的关系。结果共采集样本128份，其中44份样本CMV-Agpp65阳性，19份样本pp67-mRNA阳性，8例CMV-Agpp65和pp67-mRNA均为阳性。临床诊断为HCMV病患者12例。CMV-Agpp65抗原检测灵敏度（91．7％）高于pp67-mRNA（66．7％），pp67-mRNA特异性（95．O％）高于CMV．Agpp65（50．0％）抗原检测。而在HCM~临床症状出现感染并治疗后期，随访发现选择以pp67作为抗病毒治疗指标较CMV-Ag更早转阴，可以明显缩短用药时间（P〈0．05）。结论CMV-Agpp65、pp67-mRNA对器官移植术后HCMV感染均具有诊断意义，应用NASBA法能更加快捷准确检测巨细胞病毒，pp67较准确地反映了肾移植术后HCMV的活动性，能更好的指导临床抗病毒治疗并提供了较客观的依据。