细胞外热休克蛋白70及其生物学功能

热休克蛋白(HSP)一直被描述为一种细胞内蛋白质在胞内发挥一系列生物学作用,参与细胞内蛋白质的折叠、装配、降解和修复过程。近年来,有研究发现HSP70能被主动释放到胞外,成为细胞外HSP70(extracellular HSP70,eHSP70),但关于其功能尚不清楚。循环HSP70水平与多种疾病进程密切相关。有研究发现暴露于物理和心理刺激源作用下,HSP70可能通过脂筏或Exosome介导的分泌途径释放到细胞外,作为一种生物活性因子影响多种疾病的进程。

细胞外热休克蛋白70对严重烫伤大鼠肠道免疫功能的影响

目的了解严重烫伤大鼠肠道细胞外热休克蛋白70（eHSP70）与IL-2表达变化及两者间的关系，另体外观察eHSP70对严重烫伤大鼠肠道派伊尔结CD3＋T淋巴细胞的影响。方法（1）取60只雄性SD大鼠，按随机数字表法分为正常对照组（仅麻醉）10只、烫伤组50只，烫伤组大鼠背部造成30％TBSA Ⅲ 度烫伤。正常对照组于麻醉后即刻，烫伤组于伤后3、6、12、24、48h，各取10只大鼠处死，取小肠组织，ELISA法检测eHSP70和IL-2的表达并进行相关分析。（2）另取2只雄性SD大鼠，同前致伤后12h，分离小肠派伊尔结CD3＋T淋巴细胞，用含体积分数10％FBS的RPMI 1640培养液培养，按随机数字表法分为空白对照组和5、10、20 μg／mLeHSP70组，每组6孔。空白对照组不行其他处理，后3组培养液中分别加入相应质量浓度重组大鼠eHSP70。培养48h，流式细胞仪检测CD3＋T淋巴细胞中Thl和Th2百分比及细胞凋亡率，ELISA法检测细胞培养上清液中IL-2和IL-10的表达。细胞实验均重复10次。对数据行单因素方差分析、Kruskal-Wallis秩和检验、SNK-q检验、Pearson相关分析。结果（1）与正常对照组的（1278±135）、（48．6±4．9）ng／mg比较，烫伤组大鼠伤后3、6、12、24、48h肠道eHSP70[（728±93）、（412±31）、（314±21）、（528±40）、（1028±97）ng／mg]和IL-2[（38．6±2．3）、（32．3±1．0）、（25．3±3．6）、（33．9±4．1）、（44．3±2．6）ng／mg]水平均明显降低（q值为3．48～5．32，P值均小于0．05），均于伤后12h达最低值。IL-2和eHSP70水平呈明显正相关（r：0．920，P〈0．01）。（2）与空白对照组的（8．6±1．1）％、（3．75±0．45）％比较，5、10、20μg／mLeHSP70组CD3＋T淋巴细胞中Th1百分比明显增高[（11．3±2．1）％、（15．7±1．8）％、（10．8±1．5）％，q值为2．97～4．57，P值均小于0．05]，Th2百分比明显降低[（2．39±0．38）％、（1．05±0．23）％、（2．67±0．26）％，q值为2．48～4．32，P值均小于0．05]。与空白对照组的（34．3±2．2）％、（254±16）pg／mL比较，5、10、20μg／mLeHSP70组CD3＋T淋巴细胞凋亡率明显降低[（26．1±2．6）％、（20．7±1．5）％、（31．5±2．4）％，q值为3．47～4．95，P值均小于0．05]，细胞培养上清液中IL-2水平明显增高[（417±22）、（587±19）、（307±27）pg／mL，q值为3．02～4．98，P值均小于0．05]。4组CD3＋T淋巴细胞培养上清液中IL-10水平相近（F=2．12，P〉0．05）。结论大鼠严重烫伤后肠道中eHSP70和IL-2的表达均降低，且两者呈明显正相关。eHSP70可体外促进严重烫伤大鼠肠道派伊尔结中CD3＋T淋巴细胞向Th1方向分化，明显降低其惆亡率，促进其释放IL-2。

热休克蛋白90a通过增强钙库操作性钙离子内流活性促进肝癌细胞转移

目的探讨细胞外热休克蛋白90α(eHsp90α)对肝癌细胞转移的影响及机制。方法 Westernblot检测细胞培养基上清中eHsp90α的水平和细胞中基质相互作用分子1(STIM1)蛋白表达,Confocal检测钙库操作性钙离子内流(SOCE)活性,免疫荧光双染检测STIM1和ORAI1的相互作用水平,Transwell和划痕实验检测细胞转移能力。结果肝癌细胞系中e Hsp90α较正常肝细胞系LO-2显著增加;高度转移能力的MHCC87H和HCCLM3细胞中e Hsp90α水平、STIM1蛋白表达和SOCE活性较低转移能力的HepG2、HL-7702和SNU-449显著升高。hrHsp90α可以显著增加HepG2的转移能力、STIM1蛋白变化和SOCE活性。敲低STIM1蛋白表达或抑制SOCE活性,可以抑制MHCC87H的转移能力和hrHsp90α诱导的HepG2转移能力增加。结论eHsp90α可促进肝癌细胞的转移,其机制是通过诱导STIM1蛋白表达,进而增加SOCE活性。

血必净注射液对创伤后内皮细胞合成血管生成素2及血管内皮钙黏蛋白的影响

【目的】观察细胞外热休克蛋白70(e HSP70)模拟创伤刺激内皮细胞后血管生成素2(Ang-2)及血管内皮钙黏蛋白(VEcadherin)的变化,探讨血必净注射液对血管内皮的保护作用。【方法】培养人脐静脉内皮细胞,检测e HSP70刺激0、2、4、8、16、32 h后细胞Ang-2、VE-cadherin的m RNA和蛋白表达量,找出最佳刺激时间,然后设空白对照组、e HSP70组(终浓度为0.1μg/m L)、血必净组(终浓度为50 mg/m L)、血必净+e HSP70组共4个实验组,检测最佳时间点各组上述指标改变。【结果】e HSP70刺激后Ang-2的m RNA及蛋白表达量增加并于4 h达到高峰,而VE-cadherin的m RNA和蛋白表达量经e HSP70刺激后降低,并于4 h达到最低值。各实验组干预4 h后,e HSP70组与血必净+e HSP70组细胞Ang-2的m RNA及蛋白表达量较空白对照组显著增高(P<0.05),而血必净+e HSP70组的表达量较e HSP70组显著下降(P<0.05);与空白对照组相比较,e HSP70组VE-cadherin的m RNA及蛋白的表达量显著降低(P<0.05),而血必净+e HSP70组及血必净组上述指标表达量均显著上升(P<0.05),其中尤以血必净组的表达增高最为显著(P<0.05)。【结论】血必净注射液通过调控e HSP70对Ang-2与VE-cadherin的表达影响,对创伤刺激的血管内皮细胞具有一定的保护作用。

右美托咪定对宫颈癌细胞HSP90/ERK通路及顺铂敏感性的影响

目的探讨右美托咪定对宫颈癌细胞热休克蛋白90(HSP90)/细胞外信号调节激酶(ERK通路及顺铂敏感性的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组、顺铂组、低浓度组和高浓度组。蛋白印迹(Western blot)法检测各组HeLa细胞中HSP90、ERK、p-ERK、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA聚合酶δ催化亚基(POLD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况;CCK-8法检测各组HeLa细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组HeLa细胞凋亡情况。结果与对照组相比,顺铂组HeLa细胞中HSP90、p-ERK/ERK、DNMT1、POLD1、PCNA蛋白水平、OD值降低(P<0.05),而凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);随着右美托咪定的添加及浓度的升高,HeLa细胞中HSP90、p-ERK/ERK、DNMT1、POLD1、PCNA蛋白水平、OD值依次降低(P<0.05),而凋亡率、Bax蛋白水平依次升高(P<0.05)。结论右美托咪定可抑制宫颈癌HeLa细胞中HSP90/ERK通路,增强HeLa细胞对顺铂的敏感性。

艾灸预处理对幽门螺杆菌胃黏膜炎性损伤大鼠血清IgG和eHSP72含量的影响

目的:探讨艾灸对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)胃炎大鼠血清H.pyloriIgG和eHSP72含量的影响,初步揭示艾灸干预H.pylori胃黏膜炎性损伤,保护胃黏膜的机制.方法:50只健康大鼠随机分为5组,即A空白组、B模型组、C艾灸组、D艾灸非穴点组和E电针组,每组10只.采用H.pylori灌胃造模,酶联免疫法检测大鼠血清H.pyloriIgG和eHSP72含量.结果:与A组比较,B组大鼠胃黏膜UI、血清H.pyloriIgG和eHSP72含量升高(0.50±1.00vs6.50±4.75,76.72μg/L±11.02μg/Lvs131.91μg/L±30.04μg/L,152.2ng/L±22.72ng/Lvs222.59ng/L±56.69ng/L,P<0.01);与B组相比,C组大鼠UI和H.pyloriIgG含量降低(6.50±4.75vs1.00±2.00,131.91μg/L±30.04μg/Lvs86.25μg/L±18.63μg/L,P<0.01),eHSP72含量升高(222.59ng/L±56.69ng/Lvs285.54ng/L±68.23ng/L,P<0.05);与D组相比,C组大鼠UI和H.pyloriIgG含量降低(3.00±5.00vs1.00±2.00,116.19μg/L±31.25μg/Lvs86.25μg/L±18.63μg/L,P<0.01),eHSP72含量升高(185.97ng/L±77.62ng/Lvs285.54ng/L±68.23ng/L,P<0.01);与E组比较,C组大鼠H.pyloriIgG含量降低(120.25μg/L±25.40μg/Lvs86.25μg/L±18.63μg/L,P<0.01).结论:艾灸穴位可干预并减轻H.pylori胃黏膜炎性损伤,此作用可能是通过艾灸诱导血清eHSP72大量表达,启动和调控机体免疫系统对入侵的病原物H.pylori清除,达到抑制H.pyloriIgG形成和保护胃黏膜损伤的作用.

eHSP的研究进展

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)一直被认为是细胞内蛋白质,在胞内通过帮助蛋白质正确折叠、组装以及促进变性蛋白质降解而发挥生物学功能。HSP能被主动地分泌到胞外,成为细胞外HSP(extracellularHSPe,HSP),但其分泌及作用机制尚未定论。HSP偶然释放到外周循环是通过细胞坏死,生理性释放则是通过活化分泌系统。HSP有一种重要的前炎症因子可通过相同的分泌系统分泌,抗HSP自身抗体可以促进HSP的细胞因子样、辅佐样活性,抗HSP自身抗体与HSP或者HSP受体交联是放大HSP免疫信号作用的可能机制。

艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠血清中eHSP70及胃黏膜细胞NF-κB的影响

目的:探讨艾灸预处理对抗胃黏膜急性炎性损伤的机制。方法:健康SPF级SD大鼠32只随机分为正常对照组、模型组、艾灸组、艾灸非穴位组,每组8只,采用无水乙醇灌胃制备急性胃黏膜损伤模型。预先艾灸足三里、中脘等穴,以GUTH法检测胃黏膜损伤指数(UI)、HE染色光镜下观察胃组织形态学变化并进行炎症病理学评分;免疫组织化学法检测胃黏膜细胞中核因子(NF-κBp65)的表达、酶联免疫或放射免疫法测定血清中热休克蛋白(eHSP70)和炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果:与对照组比较模型组胃黏膜损伤指数、血清中eHSP70和炎性细胞因子含量明显升高(P<0.01)、胃黏膜组织炎性浸润明显,胃粘膜细胞NF-κBp65阳性表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组胃黏膜损伤指数、血清中炎性细胞因子含量明显降低(P<0.05或P<0.01),胃黏膜组织形态较为完好,eHSP70含量升高(P<0.05),胃黏膜细胞NF-κBp65阳性表达下调(P<0.01)。2处理组比较,艾灸穴位组对上述指标的影响强于非穴组。结论:艾灸预处理对大鼠急性胃黏膜损伤具有一定的保护作用,其机制可能为诱导eHSP70升高,上调NF-κBp65的表达,减轻炎性细胞因子在胃黏膜的浸润,缓解急性胃黏膜损伤。艾灸穴位对胃黏膜的保护作用优于艾灸非穴位。