柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白90和组蛋白4对DF-1细胞凋亡的影响

为了探究柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白90(EtHSP90)和组蛋白(EtH4)在体外对鸡胚成纤维细胞(DF-1细胞)凋亡的影响,本试验构建真核荧光表达质粒pEGFP-N1-EtHSP90和pEGFP-N1-EtH4并转染至DF-1细胞,用荧光显微镜观察转染效果,Western blot验证蛋白表达,流式细胞术检测DF-1细胞凋亡。结果显示,经验证成功构建重组质粒pEGFP-N1-EtHSP90和pEGFP-N1-EtH4。流式细胞术检测发现,pEGFP-N1-EtHSP90组早期凋亡率显著低于空白组、pEGFP-N1组和pEGFP-N1-EtH4组(P<0.05);pEGFP-N1-EtH4组早期凋亡率与空白组和pEGFP-N1组相比差异不显著(P>0.05)。因此,EtHSP90早期可抑制细胞凋亡,EtH4既不促进细胞凋亡,也不抑制细胞凋亡。本试验结果为后续深入探究2个蛋白的凋亡机制提供理论基础。

牦牛热休克蛋白B11通过抗凋亡缓解热应激对肾细胞的体外损伤

热休克蛋白B11(Heat shock protein beta‑11,HSPB11)是小热休克蛋白家族的成员之一,具有抗凋亡、促进细胞存活和维持细胞形态等功能。在热应激条件下,自噬失调是急性肾损伤、肾损伤修复不全及慢性肾脏疾病的发病机制之一,而肾细胞的基础自噬是维持肾脏稳态、结构和功能的关键。为探讨牦牛HSPB11对热应激牛肾细胞(Madin Darby Bovine Kidney,MDBK)活性和凋亡的作用,本研究将MDBK细胞分为对照组、热应激组和处理组,采用PCR扩增、生物信息学分析、原核表达载体构建、CCK‑8法、吖啶橙染色法、荧光酶标仪检测、荧光定量PCR等方法。扩增得到牦牛HSPB11目的片段757 bp;构建的系统进化树显示,牦牛与黄牛HSPB11的相似性高达99%;成功构建pET‑32a‑HSPB11重组质粒,表达获得约35 kDa的牦牛HSPB11;筛选得到牦牛HSPB11最佳浓度为10.0μg/mL,作为处理组HSPB11浓度。研究结果显示,对照组细胞相对活性极显著高于热应激组(P=0.004),处理组细胞相对活性极显著高于热应激组(P<0.001)。热应激组细胞出现收缩、细胞核裂解呈现碎片状,处理组少见细胞裂解。此外,热应激组MDBK细胞核酸荧光强度均极显著高于对照组和处理组(P<0.001)。热应激组caspase‑3、caspase‑9、Bcl‑2的mRNA表达量极显著高于对照组和处理组(P<0.001)。综上,推测牦牛HSPB11通过凋亡途径缓解热应激对MDBK细胞损伤,为探究牦牛HSPB11的功能提供基础资料。

热休克蛋白90α在肺癌患者中诊断价值的荟萃分析

目的:肺癌是临床上最为常见的恶性肿瘤,晚期患者预后差,5年生存率低,因此早期诊断成为提高患者预后的关键。本研究旨在评价热休克蛋白90α在肺癌诊断中的应用价值。方法:计算机检索中国知网、万方、维普、PubMed、Embase等数据库,搜索有关热休克蛋白90α与肺癌相关的研究,检索时间均从建库至2023年8月,并根据纳入与排除标准进行文献筛选。采用Meta-Disc1.4、RevMan5.4和Stata16.0软件进行了偏倚风险、适用性评价、Meta分析、回归分析、亚组分析、发表偏倚、敏感性分析和临床应用价值等统计学分析。结果:最终纳入文献18篇,综合各项数据后,采用随机效应模型进行分析。热休克蛋白90α诊断肺癌的合并敏感度为0.76 (95% CI: 0.680.83),合并特异性为0.81 (95% CI: 0.730.87),合并阳性似然比为3.98 (95% CI: 2.805.57),合并阴性似然比为0.29 (95% CI: 0.220.39),合并诊断比值比为13 (95% CI: 822),综合受试者工作特征(SROC)曲线下面积为0.85。费根(Fagan)列线图显示,设定验前概率为50%,诊断肺癌的符合率为80%。结论:血液标本中热休克蛋白90α的表达水平有助于肺癌的临床诊断,可作为辅助诊断肺癌的分子生物学标志物。

热休克蛋白90对hERG-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)对人类ether-a-go-go相关基因(hERG)-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究。方法构建野生型(WT)、突变型(A561V)、杂合型(WT/A561V)细胞模型,采用蛋白质印迹法检测各组细胞hERG及Hsp90蛋白表达差异。转染减表达空载(Itf NC)、Hsp90减表达(Hsp90-)、过表达空载(Ovp NC)或Hsp90过表达(Hsp90+)质粒至各细胞模型(即Itf NC组、Hsp90-组、Ovp NC组、Hsp90+组),另设不加载体的对照(Ctl)组,采用蛋白质印迹法检测各组细胞调控Hsp90前后hERG及Hsp90蛋白表达差异。采用免疫荧光法检测Hsp90调控前后杂合型细胞模型hERG及Hsp90蛋白定位表达情况。采用全细胞膜片钳技术检测调控Hsp90前后杂合型细胞模型hERG通道激活电流及尾电流密度。结果突变型、杂合型细胞模型Hsp90及hERG(135 kDa)蛋白表达水平均较野生型明显升高(均P<0.05)。野生型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)、hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),突变型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),杂合型细胞模型Hsp90+组hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05)。融合Hsp90和hERG蛋白后,Ctl组hERG表达于细胞膜、细胞质,Hsp90-组细胞膜上hERG蛋白表达减少,Hsp90+组细胞膜上hERG蛋白表达增多。与Ctl组比较,Hsp90+组Ikr曲线左移14.709,斜率因子k值未见明显变化。杂合型细胞模型Ctl组、Hsp90-组、Hsp90+组激活电流及尾电流密度均在50 mV处达到最高;杂合型细胞模型Hsp90+组在20、30 mV处的激活电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05),在30、40 mV处的尾电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05)。结论Hsp90在hERG-A561V通道蛋白折叠转运中起作用,而上调Hsp90可促进WT/A561V hERG的折叠转运,进而影响通道功能。

miR-155对慢性髓细胞白血病细胞凋亡及热休克蛋白表达的影响

目的探讨微小RNA-155(miR-155)对慢性髓细胞白血病(CML)细胞凋亡情况和对热休克蛋白(HSP)27、HSP60及HSP70表达的影响。方法采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)分别检测miR-155在CML耐伊马替尼(IM)细胞株K562-G和CML细胞株K562中的表达水平。以携带miR-155的慢病毒和阴性对照慢病毒感染K562-G细胞,分别命名为miR-155组和对照组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测miR-155对耐药细胞增殖的影响。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-155对HSP27、HSP60、HSP70表达的影响。流式细胞术检测miR-155组和对照组细胞的凋亡比例。结果与K562细胞相比,K562-G细胞中miR-155呈低表达(P<0.05)。miR-155组细胞的增殖情况与对照组相比从第36 h开始降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-155组HSP60、HSP70升高(P<0.05),而HSP27降低(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,miR-155组细胞的凋亡率高于其对照组(P<0.05)。结论miR-155促进CML细胞的凋亡,并使细胞中的HSP60、HSP70表达升高,HSP27表达降低。

超声造影肝脏影像报告和数据管理系统分类联合血清热休克蛋白90α、异常凝血酶原鉴别肝细胞癌和肝内胆管细胞癌

目的 探讨血清热休克蛋白90α(HSP90α)、异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)联合超声造影肝脏影像报告和数据管理系统(LIRADS)分类在肝细胞癌和肝内胆管细胞癌中的鉴别诊断价值。方法 选取绵阳市中心医院2020年5月至2021年11月确诊的35例肝内胆管细胞癌(ICC)病人为ICC组,另选取105例肝细胞癌病人为肝细胞癌组。采用全自动发光免疫分析仪检测血清PIVKA-Ⅱ水平,采用ELISA法检测血清HSP90α水平,对所有病人进行超声造影检查,根据LI-RADS分类系统收集各超声特征;受试者操作特征(ROC)曲线分析超声造影LI-RADS-M(简称LR-M)类特征(动脉期环状高增强、门脉早期消退、显著消退)、血清HSP90α、PIVKA-Ⅱ及三者联合诊断ICC的价值。结果 与肝细胞癌组[(8.89±1.63)μg/L,(526.18±83.75)mAU/mL,16.19%,10.48%,15.24%,6.67%,48.57%,21.90%]相比,ICC组血清HSP90α(12.15±2.56)μg/L、PIVKA-Ⅱ(679.42±95.74)mAU/mL水平及胆管扩张(60.00%)、肿瘤边界模糊(60.00%)、形态不规则(62.86%)、动脉期环状高增强(51.43%)、门脉早期消退(94.29%)、显著消退(65.71%)比例显著较高(P<0.05)。超声造影LR-M类特征、血清HSP90α、PIVKA-Ⅱ及三者联合诊断ICC的曲线下面积(AUC)及其95%CI分别为0.80(0.72,0.88)、0.78(0.71,0.90)、0.78(0.68,0.87)、0.90(0.82,0.98),其中联合诊断效能最佳。结论超声造影LR-M类特征和血清HSP90α、PIVKA-Ⅱ联合后对ICC有较高的诊断性能,可有效鉴别诊断肝细胞癌和ICC。

血浆热休克蛋白90α表达对老年原发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞术后预后的预测价值

目的 探讨血浆中热休克蛋白90α(Hsp90α)在老年原发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)后预后评估中的价值。方法 选取2020年2月-2022年2月就诊于吉林省肿瘤医院高新院区综合外科介入组的110例老年原发性肝癌患者进行回顾性分析。采用ELISA法检测术前血浆中Hsp90α表达情况,以60 ng/mL作为截断值,分为Hsp90α高表达组(55例)和Hsp90α低表达组(37例)。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank检验比较生存曲线的差异。采用多因素Cox回归模型分析血浆中Hsp90α表达与TACE治疗的老年原发性肝癌预后的关系。结果 Hsp90α高表达组的2年总生存及无进展生存的累积生存率均低于Hsp90α低表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示:Hsp90α高表达是影响患者总生存及无进展生存的独立危险因素(P<0.05)。结论 老年原发性肝癌患者血浆Hsp90α表达水平可作为接受TACE治疗后短期预后的独立预测因子。

热休克蛋白90α联合AFP、AFP-L3诊断原发性肝癌研究进展

原发性肝癌常用的血清学指标有甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白同工酶L3(AFP-L3)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、脱-γ-羧基凝血酶原(DCP)、热休克蛋白90、血浆DNA和RNA标志物、循环肿瘤DNA等,对诊断都有一定的意义,但是单项检测都存在特异性和敏感性不足问题,对早期诊断有局限性,越来越多的研究表明联合检测意义更大。为进一步阐明热休克蛋白90α联合AFP、AFP-L3联合检测的临床价值,本文综述热休克蛋白90α这一新的检测指标的生物学特性,联合AFP和AFPL3检测对诊断的特异性和敏感性,潜在优势和面临的问题,为原发性肝癌的早期诊断提供新的方向和参考。

热休克蛋白90α、β_(2)-微球蛋白及胃泌素释放肽前体在肺癌患者血清中的表达水平及检测意义

目的:探讨热休克蛋白90α(HSP90α)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)及胃泌素释放肽前体(ProGRP)在肺癌患者血清中的表达水平及检测意义。方法:选取接受诊治的肺癌患者133例为肺癌组,另选择肺部良性结节患者106例(良性肺病组)及体检健康者112例(对照组)。比较三组血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP水平,并分析HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP对肺癌的诊断价值;比较肺癌组不同病理类型患者血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP阳性检出率以及肺癌组化疗后不同疗效患者血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP水平。结果:肺癌组血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP水平高于对照组、良性肺病组(均P<0.05)。血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP联合检测肺癌的AUC为0.861,高于三者单独检测的AUC(均P<0.05)。血清HSP90α、β_(2)-MG在NSCLC阳性检出率高于SCLC,血清ProGRP在SCLC阳性检出率高于NSCLC(均P<0.05)。肺癌组化疗后,无效患者血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP水平高于有效和稳定患者(均P<0.05)。稳定患者血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP水平高于有效患者(均P<0.05)。结论:肺癌患者血清HSP90α、β_(2)-MG、ProGRP水平升高,且与不同病理类型和化疗效果有关,三者联合检测对肺癌诊断价值较高。

基于热休克蛋白(HSPs)表达的变化探讨熊果酸对H9C2心肌细胞H_(2)O_(2)过氧化损伤的保护作用

目的:探讨熊果酸对H9C2心肌细胞H_(2)O_(2)过氧化损伤的保护作用及其与热休克蛋白(HSPs)的表达的相关性。方法:采用H_(2)O_(2)诱导H9C2心肌细胞氧化应激模型,实验分为正常对照组(Control)、H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2))、熊果酸+H_(2)O_(2)组(Ursolic Acid,UA)。CCK8检测各组细胞活力值,ELISA法检测培养基上清液HSP27、HSP70、HSP90含量,Western blot检测各组细胞HSP27、HSP70、HSP90、HSF1蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,H_(2)O_(2)组细胞活力值降低,HSP27、HSP70、HSP90含量及HSP27、HSP70、HSP90、HSF1的表达水平上升(均P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,熊果酸+H_(2)O_(2)组细胞活力值升高,HSP27、HSP70、HSP90含量及HSP27、HSP70、HSP90、HSF1的表达水平上高(均P<0.05)。结论:熊果酸可以通过促进HSPs的表达提高H9C2心肌细胞的抗氧化能力从而发挥对H_(2)O_(2)过氧化损伤的保护作用。

热休克蛋白90在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法使用免疫组化SP法和细胞原位杂交技术检测45例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中HSP90蛋白、HSP90mRNA的表达情况,另取15例健康血样进行正常对照。结果45例SLE患者PBMC中HSP90蛋白阳性表达17例(37.78%),15例正常对照组中未见明显阳性细胞。半定量分析SLE活动组PBMC中HSP90蛋白表达的平均吸光度(A)值为(0.412±0.230),显著高于正常对照组(0.117±0.033)和SLE非活动组(0.187±0.019)(均P<0.01);SLE非活动组也显著高于正常对照组(P<0.05)。45例SLE患者中HSP90mRNA阳性表达20例(44.44%),15例正常对照组中未见阳性细胞。半定量分析SLE活动组PBMC中HSP90mRNA表达的平均A值为(0.350±0.225),显著高于正常对照组(0.114±0.009,P<0.01)和SLE非活动组(0.221±0.040,P<0.05);SLE非活动组与正常对照组比较也显著升高(P<0.05)。SLE中抗心磷脂抗体阳性患者HSP90水平明显高于阴性患者。结论SLE患者中存在HSP90的过度表达,且在抗心磷脂抗体阳性的患者中尤其明显,并与疾病的活动性相关。提示HSP90可能在SLE的发病机制中起着重要作用。

肿瘤异常蛋白、热休克蛋白90α联合血清肿瘤标志物检测对非小细胞肺癌的诊断价值

目的 探讨肿瘤异常蛋白(TAP)、热休克蛋白90α(HSP90α)联合血清肿瘤标志物[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]检测对非小细胞肺癌的诊断价值.方法 选取90例非小细胞肺癌患者和90例健康体检者,分别作为肺癌组和对照组,比较两组患者血清TAP面积及HSP90α、NSE、CEA、CYFRA21-1水平.以病理学检查结果为金标准,评估TAP面积、HSP90α、NSE、CEA、CY-FRA21-1联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值.结果 肺癌组患者血清HSP90α、NSE、CEA、CYFRA21-1水平均明显高于对照组,TAP面积明显大于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).五项联合检测诊断非小细胞肺癌的灵敏度为93.33%,阴性预测值为91.55%,均高于血清CEA、NSE、CYFRA21-1、TAP面积、HSP90α单独检测.结论 TAP面积、HSP90α、NSE、CEA、CYFRA21-1联合检测可提高对非小细胞肺癌的诊断效能.

热休克蛋白90对氧化应激激活的大鼠血管平滑肌细胞细胞外信号调节激酶的作用

目的探讨热休克蛋白90对氧化应激激活的细胞外信号调节激酶的作用。方法取SD雄性大鼠胸主动脉做原代平滑肌细胞培养。用1μmol/L可溶性鸟苷酰环化酶抑制剂6-Anilinoquinoline-5,8-quinolinedione（LY83583）处理4~12代大鼠血管平滑肌细胞不同时间,蛋白免疫印迹检测细胞内热休克蛋白90、磷酸化和未磷酸化细胞外信号调节激酶1/2。用格尔德霉素（热休克蛋白90的特异性阻断剂）预处理细胞30 min,再用LY83583处理120 min,免疫共沉淀和蛋白免疫印迹检测热休克蛋白90与细胞外信号调节激酶及磷酸化的细胞外信号调节激酶的结合,免疫荧光检测细胞核内磷酸化的细胞外信号调节激酶。结果LY83583处理120 min时细胞内热休克蛋白90表达达高峰,较0 min时增加9倍,与细胞外信号调节激酶1/2的第二个活化高峰一致。LY83583处理血管平滑肌细胞120 min后,热休克蛋白90与磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2结合较对照组升高了5.5倍（P〈0.01）,磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2的量增加了6.1倍（P〈0.01）,而细胞核内的磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2也明显增加;5μmol/L格尔德霉素预处理后,LY83583的这些效应则被阻断。结论氧化应激增加大鼠血管平滑肌细胞内热休克蛋白90,并增加其与细胞外信号调节激酶1/2及磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2的结合,促进磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2核转位。这可能是氧化应激激活大鼠中膜血管平滑肌细胞内细胞外信号调节激酶1/2信号通路活性的重要机制之一,为抗氧化应激引起的血管中膜平滑肌细胞增殖提供新的分子靶点。

外源性皮质酮对大鼠主动脉内皮细胞热休克蛋白90表达的影响

目的在细胞水平观察皮质酮对热休克蛋白90(HSP90)表达的影响及量效动态变化。方法采用培养的大鼠主动脉内皮细胞,给予不同干预剂量的皮质酮(0.1μM、50μM和100μM)干预,在2～72h的不同时段检测HSP90的表达水平。结果皮质酮干预大鼠主动脉内皮细胞,HSP90蛋白表达在6h达到高峰,其中干预浓度为0.1μM组HSP90的蛋白含量增加最为明显,到72h时与正常对照组已无显著差异。结论不同干预剂量的皮质酮(0.1μM、50μM和100μM)均可促使大鼠主动脉内皮HSP90表达增加,应激时大量分泌的皮质酮可能是大鼠主动脉内HSP90蛋白表达增加的主要始动环节之一。

血清热休克蛋白70、热休克蛋白90和胃泌素水平对重症颅脑损伤并发应激性溃疡的预测

目的探讨血清热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90)和胃泌素(GAS)水平对重症颅脑损伤并发应激性溃疡的预测价值。方法选取126例重症颅脑损伤患者,入院后均采用酶联免疫法(ELISA)检测血清HSP70、HSP90和GAS水平,并实施标准去大骨瓣减压术联合腰大池引流术。统计应激性溃疡发生率,分析血清HSP70、HSP90和GAS水平与患者并发应激性溃疡的关系及三者联合对该并发症的预测价值。结果应激性溃疡发生率为32.17%;并发应激性溃疡患者入院后血清HSP70、HSP90和GAS水平均高于未并发者(P<0.05);年龄、入院格拉斯哥昏迷量表(GCS)3~5分、入院后血清HSP70水平、入院后血清HSP90水平、入院后血清GAS水平、入院后转铁蛋白(TRF)水平、入院后随机血糖水平、低血压、低氧血症、代谢性酸中毒、应用糖皮质激素均是并发应激性溃疡的危险因素(P<0.05),入院后血红蛋白(Hb)水平、入院后红细胞压积(HCT)、应用保护胃黏膜药物、应用乌司他丁是其保护因素(P<0.05);血清HSP70、HSP90、GAS水平联合预测重症颅脑损伤并应激性溃疡的灵敏度均高于单独预测(P<0.01),曲线下面积(AUC)均高于单独预测(P<0.05),特异度均与单独预测差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清HSP70、HSP90、GAS水平升高可增加重症颅脑损伤并发应激性溃疡的风险,且年龄、入院GCS3~5分等也均是其危险因素,入院后Hb水平、入院后HCT等是其保护因素,血清HSP70、HSP90、GAS水平联合预测并发应激性溃疡的效能高。

非小细胞肺癌患者热休克蛋白90β表达水平及其与病理学关系研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆热休克蛋白90β(Hsp90β)表达水平及其与病理学关系。方法选择2020年7月至2021年7月入住解放军海军陆战队医院的120例NSCLC患者作为患者组,另外选择同期80名在我院参与健康体检的健康者作为对照组。经标本收集、准备、样本制备、加样、温育、洗板、显色、终止、检测及计算等过程,采用上海信裕生物科技有限公司生产的酶联免疫分析仪对Hsp90β水平进行检测分析。另外给予患者组4个周期以上的顺铂+吉西他滨、顺铂进行化疗。比较患者组与对照组Hsp90β的阳性表达率;分析Hsp90β阳性表达率与病理学之间的关系;比较化疗治疗前后Hsp90β表达水平。结果①患者组Hsp90β阳性表达率为63.33%(76/120),显著高于对照组的18.75%(15/80),差异有统计学意义(P<0.05);②有淋巴结转移患者的Hsp90β阳性表达率显著高于无淋巴结转移患者(P<0.05),Ⅲ期患者的Hsp90β阳性表达率显著高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);组织分化程度越高,患者Hsp90β阳性表达率越低,差异有统计学意义(P<0.05);③化疗后,NSCLC患者Hsp90β水平为(109.34±10.08)ng/ml,显著低于化疗前[(142.29±16.56)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hsp90β在NSCLC中的表达显著异常,且有无淋巴结转移、不同临床分期及组织分化者的表达差异显著,具有一定的临床检测意义。

热休克蛋白90α在下肢深静脉血栓诊断中的应用价值

目的探索并评价热休克蛋白90α(HSP90α)在下肢深静脉血栓(LDVT)辅助诊断中的意义及价值。方法选取2019年1月至2021年12月于成都医学院第一附属医院确诊为LDVT的患者81例作为试验组,同期于该院进行体检的健康体检者81例作为对照组,收集两组血浆样本,检测血浆中HSP90α的表达量以及D-二聚体(D-D)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)和纤维蛋白原(Fib)的指标水平,采用统计学方法分析数据。通过受试者工作特征曲线(ROC)分析HSP90α对LDVT的诊断价值及诊断临界值。结果试验组患者血浆中HSP90α、D-D、FDP、Fib水平均高于对照组(P<0.05)。试验组患者血浆中HSP90α水平与FDP、D-D和Fib均具有相关性。Logistic回归分析显示,FDP(OR=27.927,95%CI:4.703~166.355)、D-D(OR=1.028,95%CI:1.011~1.046)、Fib(OR=8.342,95%CI:4.047~17.195)及HSP90α(OR=1.092,95%CI:1.056~1.130)与LDVT发生风险具有相关性。HSP90α用于诊断LDVT的曲线下面积(AUC)为0.876(P<0.05),HSP90α诊断LDVT的最佳临界值为55.55μg/L。结论血浆中HSP90α的表达水平与LDVT的发生发展密切相关,可作为独立预测因子;检测血浆中HSP90α水平对LDVT的辅助诊断具有重要意义。

热应激对体外培养奶牛乳腺上皮细胞生长、凋亡及其热休克蛋白mRNA转录的影响

本研究旨在探讨热应激对奶牛乳腺上皮细胞生长、凋亡及热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)mRNA转录的影响。本文以体外高温(42℃)作为热应激模型温度,38℃作为对照温度培养奶牛乳腺上皮细胞,并采用台盼蓝染色绘制生长曲线,细胞流式检测细胞凋亡及RT-qPCR检测HSPs mRNA转录。结果表明,42℃高温处理使得奶牛乳腺上皮细胞生长停滞,细胞数量在培养的第2天已显著少于对照组(38℃)(P<0.05),第3～7天极显著的少于对照组(P<0.01);细胞凋亡率在42℃高温培养测定的第3小时达到最大值;42℃高温使得乳腺上皮细胞热休克蛋白HSP27、70、90和热休克因子HSF-1(Heat shock transcriptional factor)的mRNA转录水平上调,分别为对照组的2.72、7.48、2.69和2.71倍,与对照组相比均差异极显著(P<0.01)。结果提示,高温抑制乳腺上皮细胞正常生长,促使细胞凋亡,并诱导乳腺上皮细胞HSF-1和HSPs mRNA的转录表达。

热休克蛋白90在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡PC12细胞的形态学改变;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测Hsp90的表达。结果H2S的供体400μmol·L-1硫氢化钠(NaHS)可上调PC12细胞Hsp90的表达,NaHS作用3h,Hsp90表达达最高峰,作用24h时表达恢复到基础水平;NaHS也能明显地增加CoCl2引起的Hsp90的表达上调。NaHS预处理能对抗CoCl2引起的PC12细胞损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率。Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)可拮抗NaHS预处理对Hsp90表达的上调作用,并明显地减弱H2S诱导的适应性细胞保护作用。结论H2S能保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的低氧损伤作用,诱导Hsp90表达上调可能是其细胞保护机制之一。

人肝细胞癌及其配对非癌肝组织、正常肝组织中热休克蛋白Hsp90基因mRNA水平的分析

为定量分析和比较 2 2对人肝细胞癌 (HCC)及其配对非癌肝组织 (PNL)和 2例正常肝 (NL)组织中热休克蛋白Hsp(heatshockprotein) 90基因mRNA的表达水平 ,用狭缝杂交法检测hsp90 βmRNA的表达 ;并进一步用以特异性复合cRNA为内参照的定量RT PCR法对hsp90α和hspβmRNA的表达进行分析比较 .狭缝杂交结果显示 ,hsp90 βmRNA在 1 3例 ( 59 1 % )PNL中的表达平均升高至NL的 1 87倍 ;在 2 1例 ( 95 5% )HCC中的表达平均升高至NL的 3 45倍 ;在 2 0例 ( 90 9% )HCC中的表达平均升高至PNL的 2 75倍 .以cRNA为内参照的mRNA定量RT PCR结果显示 ,hsp90αmRNA在1 8例 ( 81 8% )PNL中的表达平均升高至NL的 3 0 6倍 ;在全部 2 2例HCC中的表达平均升高至至PNL的 2 0 8倍和NL的 5 1 0倍 .hsp90 βmRNA仅在小部分 ( 8例 ,36 4% )PNL中的表达轻度升高至NL的 1 2 7倍 ,而在全部 2 2例HCC中的表达显著升高至PNL的 2 95倍和NL的 2 52倍 .hsp90α和hsp90 β可能分别在人HCC发生、发展的不同阶段发挥不同的作用 ;以cRNA为内参照的定量RT PCR法是较狭缝杂交法更为灵敏、准确和快捷的mRNA定量分析方法 .