蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶通路在动静脉内瘘术后内膜增生部位血管组织和细胞中的表达及意义

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路在动静脉内瘘术后内膜增生部位血管组织中的表达及意义,初步探索抑制MAPK/ERK通路对肌成纤维细胞自噬及增殖过程的影响。方法选取2023年1月至3月期间在海南医学院第一附属医院肾内科行动静脉内瘘重建术的患者6例,观察组收集动静脉内瘘重建术患者内膜增生严重部位的静脉血管组织,对照组为重建术中需结扎的侧支正常静脉组织。术前收集患者的一般资料,超声测量拟切取部位血管内径及内膜厚度,蛋白质印迹法检测血管组织中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylation-extracellular regulat-ed protein kinases 1/2,p-ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白相互作用蛋白1(myosin-like B cell lymphoma/lewkmia-2 interacting protein1,Beclin^(-1))、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的表达水平,并分析其与静脉内膜厚度的相关性。以肌成纤维细胞为研究对象,尿毒症血清培养,并予ERK1/2抑制剂去氢钩藤碱(Corynoxeine)干预,提取细胞总蛋白及RNA,蛋白质印迹法及实时定量PCR检测Beclin^(-1)及PCNA的表达变化。结果入组患者透析过程中均存在血流量不足,灰阶超声提示动静脉内瘘狭窄处静脉内膜明显增厚[(0.143±0.014)cm比(0.097±0.016)cm],血管腔内径为(0.166±0.028)cm。蛋白质印迹法结果显示,与正常侧支部位血管组织相比较,内膜严重增生部位血管组织中p-ERK1/2、Beclin^(-1)、PCNA蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组静脉内膜厚度与p-ERK1/2、Beclin^(-1)、PCNA蛋白的表达水平均呈正相关(R2=0.929、0.702、0.789,均P<0.05)。在细胞模型上,与正常对照组相比较,尿毒症血清组自噬相关指标Beclin^(-1)及增殖相关指标PCNA的表达明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。而加入ERK特异性抑制剂Corynoxeine后,Beclin^(-1)及PCNA的表达均明显减低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论MAPK/ERK通路参与了动静脉内瘘内膜增生过程,促进细胞自噬及增殖过程,抑制该通路活性,或可减低细胞自噬及增殖,从而减轻内膜增生。

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的:观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法:将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后,模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水,miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分,测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量,检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率,caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果:miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组,miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组;miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白表达明显低于模型组,Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达高于模型组;miR-17-5p inhibitor组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax、p-ERK1/2蛋白表达显著高于其他2组,Bcl-2蛋白表达低于其他2组。结论:miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的脑损伤具有一定的保护作用,miR-17-5p可抑制ERK1/2信号通路激活。

中药通过细胞外信号调节激酶信号通路调控胃癌的研究进展

胃癌在我国发病率和死亡率较高,存在发现晚、5年生存率低的特点,手术切除仍然是临床治疗的主要方法。大鼠肉瘤蛋白(Ras)/迅速加速性纤维肉瘤蛋白(Raf)/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在调控细胞增殖、转移、凋亡等方面具有非常重要的作用,与胃癌的发生与发展密切相关。近年来,很多学者探索调控Ras/Raf/MEK/ERK信号通路治疗胃癌的作用机制,在信号转导机制研究、靶向抑制剂筛选、中医药治疗等方面取得大量成果,实验验证在胃癌的治疗中干预其信号传递具有良好的效果和应用前景。

细胞外信号调节蛋白激酶在颞下颌关节骨关节炎髁突软骨退变中的作用

目的探究细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在小鼠颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)髁突软骨退变中的作用。方法C57BL/6J雌性小鼠36只,随机分成假手术对照组(Sham组)和单侧前牙反[牙合]组(UAC组),每组于造模3、7、11周后各取6只处死,取颞下颌关节(TMJ)。另18只小鼠随机分成假手术对照+关节腔注射PBS组(Sham+PBS组)、单侧前牙反[牙合]+关节腔注射PBS组(UAC+PBS组)和单侧前牙反[牙合]+关节腔注射ERK抑制剂PD98059组(UAC+PD98059组),11周后处死,取TMJ。HE和番红O染色评价软骨退变程度;RT-PCR检测软骨基质(Aggrecan)、增殖相关分子(Pcna)和分化/降解分子(Mmp13)的mRNA表达水平;免疫组化染色检测髁突软骨中磷酸化ERK(p-ERK)表达。结果与同期Sham组相比,UAC组软骨厚度、番红O阳性面积比、Aggrecan和Pcna mRNA表达显著降低(P<0.01),Mmp13 mRNA表达、p-ERK阳性细胞率显著升高(P<0.01)。与UAC+PBS组相比,UAC+PD98059组软骨厚度、番红O阳性面积比、Aggrecan和Pcna mRNA表达显著升高(P<0.01),Mmp13 mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论ERK参与了TMJOA的软骨退行性变进程,阻断ERK相关通路可以显著逆转髁突软骨退行性变进程。

外源性硫化氢对早期糖尿病肾脏疾病大鼠丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路的影响

目的研究外源性硫化氢(H2 S)通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对早期糖尿病肾脏疾病(DN)大鼠的保护作用。方法随机选取SPF级健康雄性SD大鼠24只腹腔一次性注射1%链尿佐菌素(STZ)60 mg/kg制作DN模型,余下10只(正常对照组)腹腔一次性注射等量的柠檬酸缓冲液。3周后DN造模成功,再将24只DN大鼠随机分为DN组和DN+硫氢化钠(NaHS)组,每组各12只。DN+NaHS组予腹腔注射NaHS溶液56μmol·kg^(-1)·d^(-1),正常对照组和DN组予等量生理盐水腹腔注射,3组大鼠均连续注射12周。检测各组血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24小时尿蛋白(24h Upro)水平,观察其肾脏组织病理变化。采用Katafuchi评分评估大鼠肾脏病变(包括肾小球、肾小管及肾血管)。采用免疫组化法检测ERK1/2、MEK1和MEK2蛋白阳性区域面积百分比。结果DN组大鼠SCr、BUN及24h Upro水平、肾脏组织Katafuchi评分、MEK1、MEK2及ERK1/2蛋白阳性区域面积百分比均显著高于正常对照组和DN+NaHS组(P<0.01),而正常对照组与DN+NaHS组大鼠上述指标水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论外源性H2 S对早期DN大鼠肾脏的保护作用可能与抑制MEK/ERK信号通路有关。

乙型肝炎病毒X蛋白通过激活细胞外蛋白调节激酶转导机制上调大鼠系膜细胞肿瘤坏死因子-α的表达

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的蛋白(HBx)导致大鼠系膜细胞(MC)增殖及TNF-α高表达的细胞外蛋白调节激酶(ERK)1/2信号转导机制。方法PCR扩增HBVX基因,然后与真核表达载体PCI-neo质粒连接,构成含有HBVX基因的质粒(PCI-neo-X),采用限制性内切酶法及测序证实。采用脂质体法将PCI-neo-X转染入体外培养的大鼠MC,采用抑制剂U0126阻断ERK1/2通路,观察培养细胞增殖、TNF-α及其mRNA表达,以不加抑制剂作为对照。Western blot检测HBx、ERK1/2及磷酸化ERK(p-ERK)1/2表达。半定量RT-PCR检测TNF-α mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液TNF-α表达。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测MC增殖。结果无论是否加入U0126,在转染PCI-neo-X36、48h后,肾小球系膜细胞(GMC)明显表达HBx,细胞TNF-α mRNA的表达加入U0126较不加入U0126显著下降。不加入U0126组上清液TNF-α水平在转染后36h和48h分别为(189.0±18.1)ng/L和(172.3±24.3)ng/L;加入U0126组上清液中TNF-α水平在转染后36、48h分别为(65.6±11.6)ng/L和(84.0±24.6)ng/L,组间不同时间点比较均有显著性差异(Pa<0.05)。加入U0126后MC增殖也显著下降。结论HBx可促使MC增殖,细胞TNF-αmRNA及上清液TNF-α表达均增高,这一作用可能是通过HBx激活ERK1/2信号通路实现的。

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均<0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均<0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均<0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。

人A431皮肤鳞状细胞癌中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路对P53的调节作用

目的观察丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路的活化及抑制对皮肤鳞状细胞癌(SCC)细胞增殖、凋亡情况的影响,探讨MAPK/ERK信号通路与抑癌基因P53在皮肤SCC中的相互作用机制。方法培养人A431皮肤SCC细胞株,分为低、中、高浓度的MAPK/ERK通路抑制剂(PD98059+DMSO)组及激活剂(IGF+PBS)组、空白对照(DMSO)组。噻唑蓝法检测细胞体外增殖活力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡,Western blot检测各组A431细胞中P-ERK、P53蛋白表达。结果经不同浓度的抑制术PD98059处理A431细胞,细胞增殖受到抑制,呈浓度-效应和时间-效应关系(P<0.05);经不同浓度的激动剂胰岛素样生长因子(IGF)处理A431细胞,细胞增殖受到促进,呈浓度-效应和时间-效应关系(P<0.05)。FCM检测结果显示,PD98059作用于A431细胞,细胞凋亡率明显增高,呈浓度-效应关系(P<0.05);而IGF作用于A431细胞,细胞凋亡率明显降低,呈浓度-效应关系(P<0.05)。Western blot检测结果显示,PD98059处理A431细胞,P-ERK蛋白的表达降低,P53蛋白的表达增强,随着PD98059浓度的增加,P-ERK蛋白明显降低,P53蛋白明显增强(P<0.05);而IGF处理A431细胞,P-ERK蛋白的表达增强,P53蛋白的表达降低,随着IGF浓度的增加,P-ERK蛋白明显增强,P53蛋白明显降低(P<0.05);经过Pearson相关性分析,P53与P-ERK的表达呈负相关(P<0.05)。结论人A431细胞中MAPK/ERK信号通路被IGF激活后,促凋亡因子P53表达降低,细胞增殖能力增强,凋亡能力降低;而该通路受抑制后,促凋亡因子P53表达增高,细胞增殖能力降低、凋亡能力增强。

磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶1/2在正常小鼠脑内的免疫细胞化学定位

细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2是重要的信号转导分子。现已知在正常动物的中枢神经系统内有其活化形式即磷酸化的ERK1/2(pERK1/2)分子的存在,但其在小鼠脑内的分布目前还没有全面的观察。本研究用免疫组织化学技术(ABC法)研究了pERK1/2样免疫反应阳性产物在脱臼处死的正常小鼠全脑内的分布。结果发现pERK1/2在正常小鼠脑内有广泛的表达,阳性产物主要存在于神经元,亦见于个别白质内的胶质细胞,脑膜及室管膜细胞也有表达。强阳性表达的核团主要有:岛皮质、视听皮质、边缘前皮质、扣带前皮质、海马垂直部、弓状核、蓝斑和小脑Purkinje细胞;中等阳性表达的核团主要有:感觉运动皮质、外侧隔区、内侧杏仁核、皮质杏仁核和外侧杏仁核、丘脑室旁核前部、视交叉上核、穹隆下器、终板血管器、前腹侧视前核和下丘脑背内侧核;弱阳性表达的核团主要有:视上核、下丘脑室旁核大细胞部、下丘脑后区、顶盖前区、室周灰质腹外侧柱、A5区、孤束核和延髓腹外侧网状结构等。本文结果观察到pERK1/2在正常小鼠脑内广泛存在,提示pERK1/2作为重要的信号转导分子,可能参与许多脑区在正常状态下的功能活动,揭示其分布特点为了解其在脑内的多样性功能提供了形态学依据。

磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶加重糖尿病大鼠脑缺血性损伤

目的探讨高血糖加重脑缺血性损伤的分子机制。方法采用大鼠全脑缺血模型,通过免疫组化、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记方法和Western blot技术,对比研究Streptozotocin诱导的糖尿病大鼠脑缺血时神经元细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化和神经元凋亡的关系。结果糖尿病组脑缺血30min和再灌注1、3、6h后,扣带皮质和海马CA3区ERK1/2阳性细胞数和神经元凋亡明显高于正常血糖组(P<0.05)。ERK1/2抑制剂U0126可明显减少ERK1/2的磷酸化和凋亡神经元的数量。Western blot分析可见,在缺血脑组织中磷酸化ERK1/2明显增高,再灌注3和6h糖尿病组显著高于正常血糖缺血组(P<0.05)。结论糖尿病高血糖加重缺血性脑损伤与MAPK家族激活有关,特别是ERK1/2参与了脑细胞的损伤。

细胞外信号调节蛋白激酶5/凋亡调节蛋白信号途径在低温诱导心肌细胞损伤及凋亡中的调控作用

目的:探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡,以及细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。方法:基于乳鼠原代心肌细胞,低温培养箱施加低温刺激;使用特异性小干扰RNA(siRNA)下调ERK5或Bim的表达;细胞凋亡使用流式细胞仪检测;各蛋白表达水平通过Western blot检测;细胞内钙离子、活性氧簇(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)通过荧光标记及流式细胞仪检测。结果:在低温刺激下的心肌细胞中,ERK5 siRNA可加剧Bim蛋白表达;Bim siRNA不影响ERK5,但减轻p-ERK5表达;ERK5 siRNA导致更高的细胞凋亡率,Bim siRNA则可减弱ERK5 siRNA的促凋亡作用;ERK5 siRNA加重了细胞内钙离子超载、ROS激活、线粒体膜电位破坏,Bim siRNA则可对抗上述损伤性作用。结论:在低温干预下的心肌细胞中,下调ERK5可释放对Bim的表达抑制,加重凋亡、细胞内钙离子超载、ROS爆发,造成更严重的线粒体膜电位破坏,而下调Bim则产生反向的保护作用。结果显示ERK5/Bim途径在低温诱导心肌细胞损伤中的重要调控作用。

不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶和细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的观察不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶(MEK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2表达的影响,探讨隔姜灸治疗脾虚证的可能作用机制及量效特征。方法将75只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、隔姜灸3壮组、隔姜灸6壮组、隔姜灸9壮组,每组15只。200%大黄浓缩液4℃灌胃制作脾虚证大鼠模型。造模成功后,隔姜灸组选取"足三里""中脘"予不同灸量治疗,连续8 d。HE染色镜下观察大鼠胃组织病理学改变,免疫组化检测大鼠胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤明显,可见较大的破损、脱落;与模型组比较,隔姜灸3壮组大鼠胃黏膜表面有部分脱落、破损情况改善,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组大鼠胃黏膜表面较完整、脱落及破损明显改善。与空白对照组比较,模型组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,隔姜灸各组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白明显表达升高(P<0.01);与隔姜灸3壮组比较,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01),但二者作用效果相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论隔姜灸通过提高胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达,激活MEK/ERK信号转导通路,进而促进脾虚证大鼠胃黏膜的修复。

细胞外调节蛋白激酶通路对胃癌细胞化疗效果的影响

目的:观察细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinase,ERK)信号通路对胃癌细胞化疗效果的影响并探讨其机制.方法:足叶乙甙作用于胃癌SGC7901和BGC823细胞,采用MTT比色法检测细胞的生存率,采用流式细胞仪和Hoechst33258荧光染色检测细胞周期分布和凋亡,Western杂交法检测ERK1/2的磷酸化以及c-Myc和P53蛋白表达水平.同时采用PD98059抑制ERK信号通路后观察足叶乙甙对细胞增殖、凋亡、c-Myc和P53表达的影响.结果:足叶乙甙呈时间-剂量依赖性抑制SGC7901和BGC823细胞的生长并明显诱导细胞的凋亡,同时上调ERK1/2的活性(磷酸化水平),并增强c-Myc和P53的表达,与对照组比较,足叶乙甙组凋亡率明显增高(19.48%±1.57%vs5.67%±0.81%,17.38%±1.49%vs4.97%±0.73%,均P<0.01),PD98059可明显增强足叶乙甙的细胞生长抑制作用并提高细胞的凋亡水平,与足叶乙甙组比较,足叶乙甙组+PD98059组凋亡率(34.35%±2.84%,32.11%±3.25%)明显增加(P<0.01);同时上调足叶乙甙诱导的P53表达,并抑制c-Myc表达的上升趋势.结论:足叶乙甙可活化胃癌细胞ERK信号通路而影响胃癌细胞的化疗效果,其机制可能是通过抑制P53并上调c-Myc的表达,从而抑制细胞的凋亡实现.

前列腺增生组织中细胞外信号调节蛋白激酶表达的意义

目的 :探讨细胞外信号调节蛋白激酶 1(ERK1)在良性前列腺增生症 (BPH)发病机制中的作用。方法 :应用免疫组化方法检测 6 8例BPH和 12例正常前列腺 (NP)组织中ERK1和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达。结果 :ERK1主要分布于前列腺上皮细胞 ,BPH组织中ERK1表达显著高于NP组织 (P <0 .0 5 ) ,而且BPH组织中ERK1表达与PCNA指数密切相关 (P <0 .0 5 )。结论 :ERK1异常表达在前列腺细胞增殖、增生过程中起着重要作用。

中药补阳还五汤对大鼠脑出血神经元凋亡及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶蛋白表达的影响

目的探讨补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围神经元凋亡的影响。方法清洁级成年SD大鼠96只采用Rosenberg法建立大鼠脑出血模型后第2天,按照组别(假手术组、模型组、补阳还五汤组、银杏叶片组)灌胃给药,1次/d,连续14 d。末次给药后,Garcia法检测大鼠神经功能评分,转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)法检测神经元凋亡;Western印迹检测蛋白磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)的表达,免疫组织化学法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织TUNEL阳性神经元凋亡数目明显增多,Bax增加的同时Bcl-2明显下降(P<0.05);补阳还五汤组、银杏叶片组Bax蛋白表达降低并且Bcl-2明显升高(P<0.05),TUNEL阳性神经元数目显著减少(P<0.05)。结论补阳还五汤对脑出血具有保护作用,其机制可能与减少凋亡蛋白Bax及增加抑凋蛋白Bcl-2的表达,抑制脑出血诱发的神经元凋亡有关。

肾炎宁对LPS诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的探讨肾炎宁对人肾小球系膜细胞(HMC)细胞增殖及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)的影响。方法应用细胞培养技术,进行HMC培养,采取血清药理学方法,制备肾炎宁药物血清,利用脂多糖(LPS)为刺激因子,应用四唑盐(MTT)比色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞的增殖和磷酸化ERK1/2的表达。结果肾炎宁可显著抑制HMC增殖,抑制率在12、24和48h分别为16.0%、15.4%、18.2%,LPS组磷酸化ERK1/2的含量与空白组比较明显升高(P<0.05);中药组与空白组比较,磷酸化ERK1/2含量明显降低(P<0.05);LPS+肾炎宁组与LPS组比较,磷酸化ERK1/2表达明显降低(P<0.05)。结论肾炎宁具有抑制正常培养条件及LPS刺激条件下磷酸化ERK1/2,从而发挥对肾小球硬化的治疗作用。

加味脑泰方对卵巢摘除脑缺血大鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶1/2和c-Jun氨基末端蛋白激酶蛋白活化的影响

目的探讨加味脑泰方对卵巢摘除脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响及其机制。方法雌性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、雌激素组(n=10)和加味脑泰方组(n=10)。模型组、雌激素组、加味脑泰方组大鼠摘除卵巢。去卵巢术后11 d,雌激素组、加味脑泰方组分别予雌激素和加味脑泰方灌胃3 d;术后14 d,模型组、雌激素组、加味脑泰方组线栓法制备局灶性脑缺血模型。缺血24 h后取脑组织,TUNEL法观察神经细胞凋亡率,Western blotting检测海马细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)蛋白活化程度。结果与模型组比较,加味脑泰方组和雌激素组神经细胞凋亡率显著降低(P<0.001),ERK1/2蛋白活化程度明显升高(P<0.01),p-JNK蛋白活化程度明显降低(P<0.01)。结论加味脑泰方可能通过提高p-ERK1/2蛋白活化,降低p-JNK蛋白活化,降低脑缺血后神经细胞凋亡率。

复元胶囊对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路的作用研究

目的观察复元胶囊对体外原代培养软骨细胞凋亡的影响及对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated kinase,包括ERK1和ERK2)信号通路的作用,探讨其治疗骨关节炎的作用机制。方法建立体外原代培养软骨细胞体系,制备复元胶囊血清.采用硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡,并用复元胶囊血清以及ERK1/2的特异阻断剂UO126干预。透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构,流式细胞仪检测其对软骨细胞凋亡的影响,免疫印迹技术(Western印迹法)检测磷酸化ERK1/2、p53蛋白表达水平,比色法观察caspase-3活性变化。结果复元胶囊血清能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率,促进磷酸化ERK1/2蛋白表达,降低凋亡基因p53蛋白表达,抑制凋亡执行因子caspase-3的活性;使用UO126阻断ERK1/2信号通路后,复元胶囊血清也能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率,减少凋亡基因p53蛋白表达,抑制凋亡执行因子caspase-3的活性,但是对促进磷酸化ERK1/2蛋白表达作用不明显。结论复元胶囊血清通过促进磷酸化ERK1/2表达、调节ERK1/2信号通路下游p53和caspase-3因子而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡。

磷脂酰肌醇3激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖的协同调控作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气管平滑肌细胞（ASMC）增殖的协同调控作用。方法 6~8周龄SPF级雄性SD大鼠,复制大鼠慢性哮喘模型,离体培养大鼠气管ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、TGF-β1＋PD98059组、TGF-β1＋渥曼青霉素（wortmannin）组、TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况及Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）表达情况。结果 CCK-8法检测各组大鼠ASMC OD值,TGF-β1组高于正常组和哮喘组,TGF-β1＋PD98059组、TGF-β1＋wortmannin组和TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组低于TGF-β1组,TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组低于TGF-β1＋PD98059组和TGF-β1＋wortmannin组（P〈0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-Akt的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1＋wortmannin组低于TGF-β1组（P〈0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-ERK1/2的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1＋PD98059组低于TGF-β1组（P〈0.01）。结论 PI3K和ERK信号通路协同调控了TGF-β1刺激哮喘大鼠ASMC增殖过程。