白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)免疫组化及金标定位分析

ECBP21是我们从白芷悬浮培养细胞外纯化及cDNA克隆的一种钙调素结合蛋白(CaMBP),亦是植物中首次报道的细胞外CaMBP。本实验以大肠杆菌表达的重组ECBP21蛋白为抗原,制备了高效价特异性抗体;随后,利用免疫组化及金标定位技术,研究了ECBP21蛋白组织特异性分布及亚细胞定位。免疫组化结果表明:ECBP21在白芷各组织中均有分布,但在叶、花、花序轴中较多,而在根中较少,并且ECBP21在细胞中多分布于细胞壁区域;免疫胶体金电镜定位结果显示:在白芷花序轴细胞中金颗粒主要分布在细胞壁,表明ECBP21蛋白主要定位于细胞壁区域,从而首次为细胞外CaMBP(ECBP21)的胞外存在提供了直观证据,并为进一步研究其在植物生长发育中的功能提供了初步信息。

白芷培养细胞外钙调素结合蛋白的胶体金电镜定位研究

利用胶体金标记技术制备了具有生物活性的植物CaM-BSA-gold探针,并用此探针建立了白芷愈伤组织培养细胞胞外钙调素结合蛋白(CaMBPs)的透射电镜标记方法。标记结果显示,在1mmol/L Ca^(2+)存在下,用EGTA洗涤过的白芷愈伤组织培养细胞壁表面有金颗粒分布,而分别在含有EGTA、TFP、过量未标记的CaM、CaM抗体存在的情况下,用金标CaM探针进行标记.以及用金标羊抗兔抗体替代金标CaM探针进行标记的各对照组,细胞壁表面金颗粒则消失,说明白芷愈伤组织培养细胞壁表面存在着CaM结合位点或CaMBPs。

RNA结合基序蛋白15在脓毒症小鼠心肌中的表达及与中性粒细胞胞外诱捕网的相关性

目的探讨RNA结合基序蛋白15(RBM15)在脓毒症心肌损伤小鼠中的表达及与中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的相关性。方法腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠脓毒症模型,以生理盐水处理小鼠作为对照组。LPS注射7 d后采用心脏多普勒超声检测小鼠心脏功能;采用HE染色观察脓毒症小鼠心肌损伤情况;免疫荧光染色法检测心肌组织切片中瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)表达水平;ELISA法检测心肌组织中CitH3、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和血浆中髓过氧化物酶(MPO)的酶活性;RT-qPCR检测中性粒细胞相关分子[人核因子κB抑制蛋白α(ⅠκBα)、核因子κB(NF-κB)、B-细胞淋巴瘤因子10(Bcl10)、肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)]、RBM15及N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化酶[甲基转移酶样3(METTL3)、甲基转移酶样14(METTL14)、肾母细胞瘤1关联蛋白(WTAP)、KIAA1429]。Western blot检测中性粒细胞相关分子ⅠκBα、核因子κB/p65(NF-κB/p65)、核因子κB/p50(NF-κB/p50)、Bcl10、PAD4、RBM15及m6A甲基化酶METTL3、METTL14、WTAP、KIAA1429。结果心脏多普勒超声检测小鼠心脏功能结果显示,与对照组相比,实验组小鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)均降低(P均<0.001);HE染色结果显示,对照组小鼠心肌组织结构正常,实验组小鼠心肌部分断裂,可见炎性细胞浸润,细胞水肿;免疫荧光染色结果显示,实验组CitH3荧光强度增强,表达上调(P<0.05);ELISA结果显示,与对照组相比,脓毒症小鼠心肌组织中NETs相关分子CitH3、NE及血浆中MPO均升高(P均<0.01);RT-qPCR结果显示,与对照组相比,实验组Bcl10(P=0.960)、PAD4(P=0.324)、METTL14(P=0.592)、WTAP(P=0.505)mRNA表达水平差异均无统计学意义,ⅠκBα(P<0.01)、NF-κB(p65/p50)(P<0.05)、RBM15(P<0.05)mRNA表达水平上升,METTL3(P<0.05)、KIAA1429(P<0.05)mRNA表达水平均降低;Western blot结果显示,与对照组相比,ⅠκBα(P=0.171)、NF-κB/p65(P=0.191)、NF-κB/p50(P=0.063)、PAD4(P=0.687)、RBM15(P=0.176)、METTL3(P=0.430)、METTL14(P=0.089)、KIAA1429(P=0.238)蛋白表达水平差异均无统计学意义,WTAP蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl10蛋白表达水平降低(P<0.05)。RBM15 mRNA表达水平与CitH3(r=0.631,P=0.011)水平呈正相关性,与MPO(r=0.318,P=0.114)及NE(r=0.099,P=0.410)水平无相关性。结论RBM15、NETs在脓毒症心肌损伤中表达上调,且RBM15与NETs相关分子CitH3具有正相关性,RBM15可能通过调节NETs相关分子参与脓毒症心肌损伤。

白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探

利用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１００ 及ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ层析法，从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了２１ ｋＤ 钙调素结合蛋白（２１ ｋＤＣａＭＢＰ） ，测其等电点的ｐＨ 为８ ．９ ，紫外薄层扫描显示其纯度达９４ ％ 以上。以此蛋白为抗原，用免疫小鼠腹水法制备了特异性抗体。由纯化的２１ ｋＤＣａＭＢＰ及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响，结果表明：加入外源纯化的２１ ｋＤＣａＭＢＰ 抑制细胞增殖，半抑制浓度约８ μｇ／ｍｌ；而加入２１ ｋＤＣａＭＢＰ特异性抗体却促进细胞增殖效应。推测胞外内源存在的２１ ｋＤＣａＭＢＰ在生理条件下可能具有参与调节胞外活化ＣａＭ 信号分子的浓度，从而调节胞外ＣａＭ 的生物学功能。

cAMP反应元件结合蛋白介导磷酸化细胞外信号调节激酶在神经病理性痛形成中的作用

采用行为学、免疫组织化学和Western blot方法,观察鞘内注射细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulate kinase, ERK)信号转导通路阻滞剂对慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠痛行为及脊髓背角内磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP response-element binding protein,pCREB)和Fos表达变化的影响,探讨ERK/CREB转导通路在神经病理性疼痛中的作用。结果表明,CCI可明显增加双侧脊髓背角pCREB、损伤侧脊髓背角浅层Fos阳性神经元表达,以CCI后3与5d时尤为显著。鞘内注射促分裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)阻滞剂U0126及ERK反义寡核苷酸在减轻大鼠痛行为的同时,能叫显抑制双侧脊髓背角内pCREB的表达,同时,Fos阳性神经元的表达也明显减少。大鼠痛行为及脊髓背角pCREB和Fos的表达在时相上一致。上述结果提示pCREB参与pERK介导的神经病理性疼痛。

G蛋白可能参与细胞外钙调素促进蚕豆气孔关闭的过程

存在于蚕豆保卫细胞质外体的细胞外钙调素(CaM)具有调控气孔运动的重要作用。以蚕豆表皮条为材料,利用激光共聚焦显微技术以及表皮条的生物分析方法研究了细胞外CaM促进气孔关闭的机理。实验结果表明,细胞外CaM能诱导保卫细胞[Ca^(2+)]_(cyt)升高,且升高程度随细胞外Ca^(2+)浓度的升高而增加;使用Ca^(2+)通道抑制剂的结果表明细胞外CaM诱导保卫细胞[Ca^(2+)]_(cyt)升高的过程以细胞外Ca^(2+)内流为主,利用G蛋白抑制剂PTX和激活剂CTX后发现,PTX能抑制细胞外CaM诱导的保卫细胞[Ca^(2+)]_(cyt)升高和气孔关闭,CTX也能通过诱导保卫细胞[Ca^(2+)]_(cyt)升高来促进气孔关闭,且Ca^(2+)主要来源于细胞外。说明G蛋白可能参与了细胞外CaM促进气孔关闭的过程。根据以上结果我们提出了细胞外CaM调控气孔运动的可能模式:细胞外CaM可能通过激活保卫细胞G蛋白打开质膜Ca^(2+)通道,诱导细胞外Ca^(2+)内流,导致气孔关闭。

鸡细胞外脂肪酸结合蛋白基因编码区的单核苷酸多态与腹脂性状的相关研究

以明星肉鸡和丝毛乌骨鸡杂交产生的F2鸡群为实验材料,以鸡细胞外脂肪酸结合蛋白基因为影响鸡脂肪性状的候选基因,对该基因编码区和部分内含子用PCR—SSCP(单链构象多态)法进行单核苷酸多态性检测.其中在检测的内含子中有3处碱基突变;在第5外显子中有一处沉默突变.对鸡腹脂性状进行最小二乘分析,结果表明第9对引物扩增的具有HH型基因片段的鸡与GG,II型相比有较低的腹脂重和腹脂率(P<0.001),表明该基因对于鸡腹脂蓄积具有很大的影响或与控制腹脂性状的主基因连锁.

核心结合因子α1在BMP-2调控细胞外基质蛋白表达中的作用

目的:探讨核心结合因子α1(cbfa1)在BMP-2调控体外培养的牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白中的作用。方法:采用反义核酸技术,体外阻断培养的牙乳头细胞中cbfα1的表达,分别用RT-PCR、Western印迹等方法观察200ng/mLBMP-2作用6h后细胞中相关基质蛋白,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨连蛋白(ON)、骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)以及牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达,采用SPSS11.0软件包对数据进行方差分析。结果:外源性BMP-2能明显上调牙乳头细胞中ALP、OC含量以及OPN、BSP和ON的表达,当反义阻断cbfα1的表达时,ALP、OC、OPN和BSP的表达显著降低(P<0.01)。结论:cbfα1参与了BMP-2调控体外培养的牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的信号转导过程。

G蛋白在细胞外钙调素启动花粉萌发和花粉管伸长中的作用

通常认为钙调素(CaM)是细胞内信号转导途径中的主要信号分子。然而我室一系列研究结果表明CaM不仅存在于细胞内,也存在于细胞外,而且细胞外CaM还具有促进细胞增殖、原生质体壁再生及细胞第1次分裂等功能。

淋巴细胞中钙调素结合蛋白的研究

应用^(125)I—钙调素(CAM)覆盖(Overlay)技术,从家兔阑尾(B细胞)、肠系膜淋巴结(T、B细胞)和脾脏(T、B细胞)淋巴细胞胞浆中分别检测到19、20和16种钙调素结合蛋白(CaMBP),其中均含有80、78、70、63、50、41、36、22、17和13.5KD CaMBP,以17KD和13.5KD CaMBP含量最为丰富,且与CaM结合呈部分钙依赖性。

细胞外钙调素对烟草悬浮培养细胞蛋白质磷酸化作用的影响

用液体闪烁计数法研究了细胞外钙调素对烟草悬浮培养细胞质蛋白质磷酸化的作用。结果表明 :烟草细胞细胞质蛋白质磷酸化活性在细胞培养过程中逐渐增加 ,达到最高峰后又开始下降。在细胞质蛋白质磷酸化强度高峰时 ,加入抗CaM血清后 ,细胞质蛋白质磷酸化活性受到了部分抑制。加抗CaM血清后再补加CaM能够部分解除抗CaM血清对细胞质部分与细胞核部分蛋白质磷酸化的抑制作用。外加纯化钙调素可以引起烟草悬浮培养细胞细胞质蛋白质磷酸化的活性增强 ,并且这种增强作用具有时间 (高峰为 70min)与剂量 (最适为CaM 10 -7mmol/L)依赖性。CaM引起的细胞质蛋白质磷酸化变化与红光所引起的细胞质蛋白质磷酸化变化在时间进程上是不相同的。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤时黏结合蛋白多糖1及细胞外信号调节酶表达与肝素酶Ⅰ的调节

背景:研究发现肝素酶可以促使肿瘤细胞的syndecan-1脱落,而且低氧增加的巨噬细胞运动也可能与硫酸已酰肝素蛋白多糖的生物合成调节相关。目的:观察肝素酶Ⅰ对缺氧复氧损伤人脐静脉血管内皮细胞黏结合蛋白多糖1及细胞外信号调节酶的调节作用。方法:采用缺氧复氧处理肝素酶Ⅰ预培养的人脐静脉血管内皮细胞,用免疫组织化学、RT-PCR及western blot检测人脐静脉血管内皮细胞细胞黏结合蛋白多糖1、ERK2的表达。结果与结论:单纯缺氧复氧后人脐静脉血管内皮细胞的黏结合蛋白多糖1和ERK2表达轻度上调。缺氧复氧处理肝素酶Ⅰ预培养人脐静脉血管内皮细胞的黏结合蛋白多糖1和ERK2明显上调,与单纯缺氧复氧处理人脐静脉血管内皮细胞相比差异有显著性意义。黏结合蛋白多糖1与ERK2上调表达成正相关。结果表明,黏结合蛋白多糖1和细胞外信号调节酶参与了人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的病理生理过程,肝素酶Ⅰ可能通过调节黏结合蛋白多糖1来影响细胞外信号调节酶的表达。

胰岛素样生长因子-1通过细胞外信号调节激酶1/2通路下调转录因子基本转录元件结合蛋白表达抗心肌细胞凋亡

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,10nmol/L IGF-1刺激的同时,分别加入磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和Raf-1 3条通路抑制剂(20μmol/L),通过RT-PCR及Western blotting方法观察IGF-1调节基本转录元件结合蛋白(BTEB)的基因表达及其通路调控。100μmol/L H2O2处理诱导心肌细胞凋亡,通过DNA梯度分析、Annexin V-FITC/PI双染色法、Caspase-3活性测定、Hoechest33258染色法观察用BTEB特异性siRNA人为下调BTEB基因表达后对心肌细胞凋亡的影响。结果大鼠心肌细胞经IGF-1刺激60min后,BTEB mRNA和蛋白表达均明显下降;与对照组相比,加入ERK1/2通路抑制剂PD98059组BTEB的mRNA和蛋白表达均明显增高(P<0.01);H2O2诱导的大鼠心肌细胞于下调BTEB表达后,DNA片段化改善,心肌细胞凋亡率下降(P<0.05),Caspase-3活性降低(P<0.05),凋亡小体减少,与IGF-1的抗心肌细胞凋亡效果相似。结论 IGF-1可以通过ERK1/2通路下调转录因子BTEB基因表达而发挥抗心肌细胞凋亡的作用。

白芷细胞壁钙调素结合蛋白的电子显微镜定位研究

钙调素在细胞信号转导的分子途径中占有重要地位,传统的观点认为它是一种细胞内Ca^(2+)信号受体蛋白 但是,1984年MacNeil等在动物细胞、Biro与孙大业等在植物细胞外几乎同时报道发现了CaM.以后,我室用胶体金免疫定位方法进一步证实玉米根尖细胞壁存在CaM,并从小麦细胞壁纯化鉴定了胞外CaM,随后又证实细胞外CaM有促进植物细胞及原生质体增殖的功能,在进一步探索胞外CaM作用机理的工作中,我室又发现胞外还存在钙调素结合蛋白(CaMBPs)、为了进一步证实这一事实,我们对白芷愈伤组织悬浮培养细胞胞外的CaMBPs进行了胶体金电子显微镜定位,主要方法与结果如下:

动物体液中的胞外钙调素结合蛋白（快报）

利用以生物素标记钙调素为探针的凝胶覆盖技术检测动物体液中胞外钙调素结合蛋白（ＣａＭＢＰ）。结果，人的唾液中检测到至少３种分子量分别为１４ｋＤ，２４ｋＤ和５２ｋＤ的ＣａＭＢＰｓ。其中，５２ｋＤ蛋白与ＣａＭ的结合依赖于Ｃａ２＋的存在，而２４ｋＤ和１４ｋＤ蛋白则不依赖于Ｃａ２＋。在鸡血清里，检测到以９４ｋＤ，４４／４５ｋＤ蛋白为主的４～５种胞外ＣａＭＢＰｓ，所有的这些蛋白与ＣａＭ的结合都依赖于Ｃａ２－。此外，在牛奶中也检出胞外ＣａＭＢＰｓ。以上结果，证明了在动物中普遍存在胞外ＣａＭＢＰｓ，为胞外钙调素的作用机理提供了新线索。

异氟烷对新生小鼠神经元细胞外信号调节激酶和cAMP反应元件结合蛋白磷酸化水平的影响

目的观察异氟烷对小鼠神经元细胞外信号调节激酶和环磷酸腺苷(c AMP)反应元件结合蛋白磷酸化水平的影响,探究异氟烷诱导神经元损伤和学习记忆障碍的可能机制。方法原代培养小鼠神经元,分为对照组、0.96 mmol/L异氟烷处理12 h及24 h组。采用MTS方法检测各组细胞活力;Western blot方法检测p-ERK1/2和p-CREB表达情况;逆转录定量PCR(RT-q PCR)方法检测ERK和CREB m RNA表达。结果与对照组比较,0.96 mmol/L异氟烷处理12 h及24 h后神经元活力明显下降(P<0.05);Western blot实验结果显示:与对照组比较,异氟烷处理组小鼠神经元中p-ERK1/2和p-CREB表达水平均明显降低(P<0.05);随着异氟烷处理时间的增加,p-ERK1/2和p-CREB表达逐渐降低,处理12 h与24 h比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-q PCR实验显示:与对照组比较,异氟烷处理组小鼠神经元中ERK和CREB m RNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论一定浓度的异氟烷可以降低原代培养的小鼠神经元活力和ERK1/2、CREB的磷酸化水平。

重组鸡细胞外脂肪酸结合蛋白的原核表达及鉴定

细胞外脂肪酸结合蛋白(Extracellular Fatty Acid-Binding Protein,Ex-FABP)是一种鸡胚发育过程中表达于肥大软骨、肌肉纤维和血粒细胞中的脂蛋白,大小约为21 ku。试验通过构建Ex-FABP原核表达载体,以实现Ex-FABP蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定;以艾维茵肉鸡胫骨软骨总RNA为模板,RT-PCR扩增Ex-FABP基因,连接pGEM-T克隆载体后,再与载体pET-28a连接并转化,获得含pET-28a-Ex-FABP重组表达质粒的Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株;使用IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定表达情况,利用镍柱亲和层析法纯化蛋白,对纯化蛋白进行Western Blot鉴定。结果表明,试验成功构建重组表达载体pET-28a-Ex-FABP;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果显示,目的蛋白在24 ku附近出现特异性条带,表明表达蛋白正确。试验成功表达了大量纯度比较高的Ex-FABP蛋白,可为后续的动物试验以及家禽疾病的研究提供理论依据。

白蛋白结合型紫杉醇对肺鳞癌H520细胞株PD-L1、ERK、p-ERK的调控作用观察

目的探讨白蛋白结合型紫杉醇(ab-PTX)对肺鳞癌H520细胞株的程序性死亡蛋白1配体(PD-L1)表达的影响及其可能的作用机制。方法(1)本研究采用的ab-PTX浓度及作用时间的确定:用0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L ab-PTX培养H520细胞株24、36、48 h,计算细胞增殖抑制率,最终选择细胞增殖抑制作用最显著的48 h及其对应的ab-PTX IC50值(1.221μmol/L)进行后续试验。(2)给予不同浓度ab-PTX培养后H520细胞株PD-L1表达观察:培养基中加入0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L ab-PTX体外培养肺鳞癌H520细胞株48 h(基于(1)中确定的ab-PTX作用时间),采用流式细胞术测算PD-L1阳性细胞率,采用qRT-PCR法检测PD-L1 mRNA。(3)单独或联合给予ab-PTX、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂培养后ERK、p-ERK的表达观察:将H520细胞株分为Control组、abPTX组、PD98059(ERK抑制剂)]组、TPA(ERK激活剂)组、ab-PTX联合PD98059组、ab-PTX联合TPA组,ab-PTX组加入1.221μmol/L ab-PTX(基于(1)中确定的ab-PTX浓度);PD98059组加入50μmol/L PD98059;TPA组加入50nmol/LTPA;ab-PTX+PD98059组加入1.221μmol/Lab-PTX和50μmol/LPD98059;ab-PTX+TPA组加入1.221μmol/L ab-PTX和50 nmol/L TPA,培养48 h,流式细胞术测算PD-L1阳性细胞率,Western blotting法检测ERK、p-ERK。结果(1)不同浓度ab-PTX培养后H520细胞株PD-L1表达:采用0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L ab-PTX培养的H520细胞株PD-L1阳性细胞率分别为33.9%±1.1%、39.5%±2.7%、52.6%±3.3%、60.3%±3.4%、69.9%±2.3%、77.8%±2.2%,PD-L1 mRNA相对表达量分别为1.06±0.07、1.65±0.22、2.12±0.16、3.25±0.11、3.79±0.14、4.45±0.28,随着ab-PTX浓度的增加,PD-L1阳性细胞率、PD-L1 mRNA相对表达量逐渐上升(P均<0.05)。(2)单独或联合给予ab-PTX、ERK抑制剂培养后ERK、p-ERK的表达及PD-L1阳性细胞率:与Control组相比,ab-PTX组p-ERK相对表达量升高,PD98059组p-ERK相对表达量降低,TPA组p-ERK相对表达量升高;ab-PTX联合PD98059组较ab-PTX组p-ERK相对表达量降低,较PD98059组p-ERK相对表达量升高;ab-PTX联合TPA组较ab-PTX组及TPA组p-ERK相对表达量升高(P均<0.05)。与Control组相比,ab-PTX组PD-L1阳性细胞率升高;与ab-PTX组比较,ab-PTX联合PD98059组PD-L1阳性细胞率降低;与PD98059组比较,ab-PTX联合PD98059组PD-L1阳性细胞率升高;与ab-PTX组及TPA组比较,ab-PTX联合TPA组PD-L1阳性细胞率升高(P均<0.05)。结论ab-PTX可上调H520细胞株PD-L1表达,一定范围内呈剂量依赖性;ab-PTX上调PD-L1表达的作用机制可能部分与ERK信号通路激活有关。

口腔鳞状细胞癌患者组织、血清及血清外泌体中脂多糖结合蛋白的表达水平及意义

目的分析口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者血清、组织、血清外泌体中脂多糖结合蛋白(LBP)的表达及意义。方法选取确诊为OSCC的60例患者为观察组,同时选取60例健康体检者为对照组。比较OSCC患者癌组织、癌旁组织中LBP mRNA表达水平,分析OSCC患者癌组织中LBP mRNA的表达水平与临床特征的关系。检测健康体检者与OSCC患者血清外泌体以及血清LBP表达水平,并分析OSCC患者血清LBP表达量与临床特征的关系。统计并分析OSCC患者血清外泌体LBP表达量与临床特征的关系。结果吸烟、饮酒患者中LBP mRNA表达量在癌组织中较高,差异有统计学意义(P <0.05)。2组血清LBP表达水平比较,差异有统计学意义(P <0.05)。淋巴转移、饮酒的OSCC患者血清外泌体LBP mRNA表达量高于无淋巴转移及不饮酒患者,差异有统计学意义(P <0.05)。OSCC患者血清LBP mRNA表达量与TNM分期、淋巴转移、分化程度、吸烟、饮酒等临床特征无显著相关性(P> 0.05)。结论 LBP表达水平与OSCC疾病有一定相关性,能够作为诊断疾病的指标。