三七总皂苷通过激活PPARα/Nrf2减轻内皮细胞屏障和功能损伤

目的研究三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的内皮细胞屏障和功能损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法使用OGD/R诱导bEnd.3细胞以建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组(Control)、模型组(OGD/R)、PNS高剂量组(OGD/R+PNS 400μg/mL)、PPARα抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+PPARαinhibitor)和Nrf2抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+Nrf2 inhibitor)。采用CCK-8检测bEnd.3细胞活性损伤,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)表达,蛋白印迹法检测ZO-1、claudin-5、occludin表达;采用细胞划痕和细胞侵袭实验检测bEnd.3细胞侵袭和迁移的水平;借助小管形成实验检测bEnd.3细胞小管形成能力。结果PNS通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体α/核因子E2相关因子2(PPARα/Nrf2)信号减轻OGD/R诱导的bEnd.3细胞活性损伤和内皮屏障损伤,抑制细胞迁移和侵袭能力,改善血管生成损伤。结论PNS通过激活PPARα/Nrf2信号减轻OGD/R诱导的内皮细胞屏障和功能损伤。

四磨汤通过调控NF-κB信号通路改善重度脓毒症大鼠结肠上皮细胞屏障功能障碍炎症状态作用研究

目的:探讨四磨汤对重度脓毒症大鼠结肠上皮细胞屏障功能障碍炎症状态的改善作用以及其对核转录因子κB(NF-κB)信号的调控机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建大鼠重度脓毒症模型;实验分组为正常组、模型组、四磨汤低剂量组、四磨汤高剂量组、激活剂组,每组10只;试剂盒检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)染色检测各组大鼠结肠组织的细胞凋亡;免疫荧光检测结肠组织中高迁移率蛋白-1(HMGB1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达;免疫组化检测结肠中白细胞共同抗原(CD45)、闭合蛋白1(Claudin-1)和闭锁蛋白1(ZO-1)的表达;Western blot法检测结肠组织中NF-κB、磷酸化NF-κB65(NF-κB p65)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:四磨汤能明显下调重度脓毒症大鼠血清中TNF-α和IL-6的含量;抑制结肠组织中的细胞凋亡,降低结肠组织中HMGB1和NLRP3的表达,上调结肠组织中CD45、ZO-1和Claudin-1的表达;抑制NF-κB p65和Bax的表达,升高Bcl-2的表达,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:四磨汤能明显抑制重度脓毒症大鼠结肠上皮细胞的炎症应激状态,缓解结肠组织的病理损伤,改善结肠黏膜的屏障功能,这可能与抑制NF-κB信号的磷酸化有关。

S1P信号通路:上皮细胞和内皮细胞屏障功能调控的新靶点

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种具有多种生物活性的鞘脂类代谢产物,通过激活G蛋白偶联受体S1PRs调节重要的生理功能。S1P是维持上皮细胞和内皮细胞屏障功能重要的信号分子,S1P信号通路通过调节黏附连接和紧密连接组装、细胞骨架重排、黏着斑形成,发挥对屏障功能的调控作用,因此S1P信号通路可能成为改善急性肺损伤、炎症性肠病和败血症等疾病中屏障功能紊乱的新靶点。本文对S1P信号通路在上皮细胞和内皮细胞屏障功能调控中的作用及其在屏障功能破坏相关性疾病模型中的保护作用的研究进展进行综述,以期为开发治疗屏障功能破坏相关性疾病的新药提供理论参考。

血小板活化因子引起肠上皮细胞屏障非凋亡依赖性的通透性增高

目的研究血小板活化因子(PAF)对肠上皮细胞屏障通透性的影响,并探讨其作用位点。方法体外培养Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型。不同浓度PAF(0,50,100,200 nmol/L)作用24 h,应用TEER和荧光黄透过量检测肠上皮细胞屏障通透性;应用Annexin V和Hoechst染色,用荧光显微镜和流式细胞仪检测肠上皮细胞凋亡情况;透射电镜下观察紧密连接。结果 Caco-2细胞培养21 d左右可形成类似人肠黏膜上皮细胞屏障结构,给予50 nmol/L PAF即可引起TEER的下降和荧光黄透过率的增加,PAF100 nmol/L组肠上皮屏障通透性增加达到高峰,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。实验并未发现PAF引起明显的细胞凋亡增加,但透射电镜下出现了紧密连接的断裂和细胞超微结构的破坏。结论 PAF可直接引起肠上皮细胞屏障通透性增加,该作用是凋亡非依赖性的,作用位点在旁细胞途径。

肺微血管内皮细胞屏障功能损伤与急性呼吸窘迫综合征

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是急性呼吸衰竭发生的主要原因，其特征是弥漫性的肺泡损伤，伴透明膜形成，肺泡腔高蛋白性水肿、毛细血管损伤和肺泡上皮破裂，它最突出的临床表现为顽固的低氧血症。尽管在最佳的通气支持和液体平衡的治疗改善后，它仍有很高的死亡率及短、长期的并发症。因此，对这种综合征的早期识别和治疗性干预措施的早期应用至关重要。本综述描述了肺微血管内皮细胞（PMVECs）屏障功能损伤与ARDS发生、发展的相互关系。具体来说是描述了ARDS定义、PMVECs的屏障功能，以及在ARDS的发生、发展时PMVECs的通透性改变，异常凋亡、分泌和功能失调，以期深入探讨ARDS可能的病理生理学机制。

红霉素改善百草枯致损血管内皮细胞屏障功能的分子机制

目的观察红霉素对百草枯所致血管内皮细胞屏障功能损伤的保护作用,并探讨可能的分子机制。方法采用"二室弥散装置"体外培养人脐静脉内皮细胞。设立百草枯组(P)、百草枯+红霉素组(P+E)、正常对照组(N),利用免疫荧光、放射免疫法分别检测各种因素下单层血管内皮细胞屏障对大分子物质的通透性变化;内皮细胞骨架蛋白F-actin形态分布以及含量变化;内皮细胞内cAMP浓度的变化。结果P组24 h后内皮细胞通透性较其它两组高(P<0.05或P<0.01),且随时间延长逐渐升高(P<0.01),引起细胞骨架F-actin重构和含量增加(P<0.05),同时伴内皮细胞内cAMP浓度降低(P<0.05);而P+E组细胞通透性24 h内升高,但36 h后明显改善(P<0.01),胞浆内F-actin逐渐减少,细胞周边增多,48 h细胞轮廓逐渐清晰,cAMP浓度也随时间延长而升高(P<0.01)。P组和P+E组内皮细胞通透率与细胞内cAMP浓度均呈负相关(r=-0.913,-0.648,P<0.05),而与F-actin含量变化均呈正相关(r=0.921,0.817,P<0.05)。结论红霉素能降低细胞通透性,升高内皮细胞cAMP浓度,稳定细胞骨架,这可能是改善百草枯致损血管内皮细胞屏障功能的机制。

微丝与Sertoli细胞屏障结构关系的研究

本文应用细胞松弛素E和示踪物镧对微丝在维持Sertoli细胞屏障完整性中的作用进行了形态学研究。结果表明,1.睾丸内注射细胞松弛素E(1000μmol/L)6小时后,可使Sertoli细胞外质特化区(ES)的微丝发生不同程度的破坏,微丝与细胞膜排列关系改变,外质特化区的内质网断裂或消失。随着细胞松弛素E浓度的增加(2000μmol/L)和作用时间的延长(14小时),其变化更趋严重。2.注射细胞松弛素E加高渗右旋醣酐后,构成Sertoli细胞屏障的紧密连接在高渗“应力”作用下被拉开,仅保留间断的点状接触,此时生精上皮基底室和管腔室内的生精细胞皱缩,细胞间隙扩大。3.注入细胞松弛素E后,示踪物镧不仅可进入基底室,而且可深入至管腔室,并围绕在精母细胞与精子细胞周围。说明支持细胞屏障的完整性在细胞松弛素E的作用下受到破坏,特别是支持细胞外质特化区中的微丝破坏甚为关键。本文对微丝与支持细胞屏障的紧密连接的关系及其作用机制进行了讨论。

乌司他丁对肠道上皮细胞屏障损伤的保护作用分析

目的探讨乌司他丁(UTI)对肠道上皮细胞屏障损伤的保护作用及其机制。方法培养Caco-2细胞,并建立肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的单层上皮细胞模型,随机分为空白对照组、TNF-α模型组、UTI低剂量组(5万U/kg)、UTI中剂量组(10万U/kg)、UTI高剂量组(20万U/kg)。采用Millicell电阻仪和多功能读板仪分别测定各组上皮细胞电阻(TER)和异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran),酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定白细胞介素6(IL-6)、IL-10水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫蛋白质印记(Western blot)技术测定紧密连接蛋白闭合蛋白(occludin)和紧密黏连蛋白1(ZO-1)表达水平。结果与空白对照组相比,TNF-α模型组TER、FITC-dextran、occludin和ZO-1表达水平均明显下降,IL-6、IL-10、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与TNF-α模型组比较,经UTI处理后,TER、FITC-dextran、occludin和ZO-1表达水平升高,IL-6、IL-10、细胞凋亡率降低(P<0.05),其中以UTI高剂量组变化最显著(P<0.05)。结论 UTI可能通过抑制炎性介质释放,调节紧密连接相关蛋白表达,抑制TNF-α诱导的肠道上皮细胞屏障功能损伤。

中度低温对肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后分泌炎症因子的影响及其临床意义

目的:通过检测中度低温下肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的表达水平,阐明中度低温对其炎症因子表达的影响及其临床意义。方法:应用Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞屏障模型,分中度低温组、常温组、亚低温组3个组,肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后,应用逆转录PCR和实时荧光定量PCR检测细胞内炎症因子mRNA的表达水平,ELISA法检测培养上清中炎症因子的表达水平。结果:肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后,中度低温组细胞内炎症因子的mRNA和以及培养上清中炎症因子的质量浓度明显低于常温组和亚低温组。结论:肠上皮细胞屏障氧化应激损伤后,中度低温比常温、亚低温更能抑制炎症因子的分泌,具有重要的临床意义。

芍药苷对肠易激综合征的作用及肠上皮细胞屏障功能的影响

目的研究芍药苷(PF)对肠上皮Caco-2细胞屏障功能紊乱及炎症的调节作用,探究PF改善肠易激综合征(IBS)腹泻腹痛症状的分子机制。方法采用束缚应激剌激和皮下注射新斯的明等方法分别建立大鼠腹泻和小鼠腹痛模型;采用胰蛋白酶刺激法建立肠上皮Caco-2细胞屏障功能紊乱模型;采用白细胞介素-1β刺激法建立肠上皮Caco-2细胞炎症模型。通过上述模型考察PF 14、28和56 mg/(kg·d)对腹泻腹痛症状的改善作用及对Caco-2细胞功能的分子调节作用。结果芍药苷可显著减少腹泻大鼠的排便频率(P<0.05),明显改善腹痛小鼠的肠异常蠕动(P<0.05)。在屏障功能紊乱模型中,含PF血清可显著升高跨上皮细胞电阻TEER值(P<0.01),降低荧光黄透过率(P<0.01),上调紧密连接蛋白的表达(P<0.01)。在炎症模型中,含PF血清可显著升高Caco-2细胞中核因子抑制蛋白-κBα(IκBα)的表达(P<0.01)。结论本文首次在大鼠腹泻和小鼠腹痛模型中证明了PF具有明显缓解IBS的作用,提示PF干预ZO-1和IκBα表达可能是缓解IBS症状的机制之一。

血管内皮细胞屏障功能的血流动力学调控及其与动脉粥样硬化的关系

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要病理基础。内衬于血管的内皮细胞是血管壁与血流之间的一道具有选择通透性的屏障,对于维持血管内环境稳态发挥重要作用。血管内皮屏障功能的紊乱是动脉粥样硬化发生发展的重要环节之一。近年的研究表明血流动力学能明显影响血管内皮细胞屏障功能。扰动流和振荡流等异常血流形态能改变血管内皮的通透性,甚至形成动脉内膜破裂。本文通过聚焦内皮细胞内外侧的物质交换、动脉内膜破裂方面的最新研究成果,评述血流动力学变化对血管内皮细胞屏障功能的影响,讨论了值得进一步深入研究的领域,以期为进一步阐明动脉粥样硬化发生发展机制以及有效防治策略的选择提供一个新的思路。

连续性血液净化对重症急性胰腺炎细胞屏障功能的影响

重症急性胰腺炎病情凶险、并发症多,细胞屏障功能的损害在其病理生理过程中发挥重要作用,包括血管内皮屏障、肠道黏膜上皮细胞屏障、肺微血管屏障及血脑屏障的损伤。当血管内皮细胞屏障功能受损时,毛细血管通透性增高及微循环障碍,导致血浆渗漏及有效血容量不足。而肠道黏膜屏障的损害会引发细菌移位,进一步激活并扩大炎症反应。肺微血管屏障的损害则导致换气功能障碍,最终导致顽固性低氧血症及呼吸衰竭。连续性血液净化能有效清除炎性介质及改善氧应激,目前被广泛用于重症急性胰腺炎的治疗。

痛泻要方及防风对肠上皮Caco-2细胞屏障功能的影响

目的:研究痛泻要方及防风对肠上皮Caco-2细胞屏障功能的影响。方法:应用蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂(胰蛋白酶)诱导Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障功能障碍模型,以跨膜电阻(TEER)和荧光黄透过率为指标,评价其屏障通透性。分别给予含痛泻要方原方、痛泻要方无防风方、防风的血清研究药物对Caco-2细胞屏障通透性的影响。结果:痛泻要方和防风均显著升高Caco-2细胞屏障的TEER值,降低细胞屏障荧光黄透过率(P<0.05),痛泻要方无防风方对上述指标无显著影响(P>0.05)。结论:痛泻要方及防风对肠上皮Caco-2细胞屏障起保护作用。

腺苷A3受体激活对肠上皮细胞屏障的调节作用及其机制

目的探讨腺苷A3受体(A3AR)激活对体外肠上皮细胞屏障的作用及其潜在机制。方法使用A3AR激动剂2-Cl-IB-MECA处理TNF-α诱导的Caco-2细胞损伤模型。采用跨上皮细胞电阻值(TEER)法和细胞旁通透性测定法评估体外培养的上皮细胞屏障功能。采用免疫荧光法和蛋白质印迹法评估紧密连接蛋白ZO-1的分布和表达。采用蛋白质印迹法检测NF-κB p65、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)的表达水平。采用ELISA法检测细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-1β、IL-8的表达水平。结果与对照组相比,TNF-α组TEER降低,细胞旁通透性增高,ZO-1表达水平降低,NF-κB p65、MLCK、p-MLC、IL-1β和IL-8的表达水平均升高,两组的差异均有统计学意义(P均<0.05)。与TNF-α组相比,2-Cl-IB-MECA组TEER升高,细胞旁通透性降低,ZO-1表达水平升高,NF-κB p65、MLCK、p-MLC、IL-1β和IL-8的表达水平均降低,两组的差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论A3AR激活可减轻肠上皮细胞屏障损伤,该作用可能通过抑制NF-κB/MLCK/p-MLC信号通路实现。

低聚半乳糖和聚葡萄糖联用预防Caco-2肠道细胞屏障损伤

目的探究不同配比的低聚半乳糖(galacto-oligosaccharide,GOS)和聚葡萄糖(polydextrose,PDX)联用对Caco-2肠道细胞屏障损伤模型的保护作用。方法培养同一批Caco-2细胞至形成肠道细胞屏障模型,随机分为无钙损伤模型组、含钙空白对照组(1.8 mmol/L Ca^(2+))、低比-低剂量组(1.8 mmol/L Ca^(2+)+2 mg/mL GOS+2 mg/mL PDX)、低比-中剂量组(1.8 mmol/L Ca^(2+)+4 mg/mL GOS+4 mg/mL PDX)、低比-高剂量组(1.8 mmol/L Ca^(2+)+8 mg/mL GOS+8 mg/mL PDX)和高比-低剂量组(1.8 mmol/L Ca^(2+)+0.8 mg/mL GOS+3.2 mg/mL PDX)、高比-中剂量组(1.8 mmol/L Ca^(2+)+1.6 mg/mL GOS+6.4 mg/mL PDX)、高比-高剂量组(1.8 mmol/L Ca^(2+)+3.2 mg/mL GOS+12.8 mg/mL PDX),共8组,每组做3个平行。培养4 d后测定各组细胞的跨膜电阻值(trans epithelial electrical resistance,TEER)和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp),通过免疫荧光法观察ZO-1、Occludin、Claudin-1紧密连接蛋白的形态,并运用蛋白芯片法测定各组细胞炎性相关因子的表达水平。结果与损伤模型组相比,含钙空白对照组的跨膜电阻值显著增高(P<0.05),而表观渗透系数显著降低(P<0.05);与含钙空白对照组相比,低比-中剂量组和高比-高剂量组的跨膜电阻值显著增高(P<0.05),而表观渗透系数显著降低(P<0.05),且部分炎性因子显著下调(P<0.05)。除了模型组的紧密连接蛋白结构受损以外,其他各组细胞屏障均完好。结论与单独Ca^(2+)作用相比,两种益生元联用可增强Caco-2细胞屏障的致密性和降低其细胞旁路的通透性,并能显著降低部分炎性细胞因子的表达水平,有效保护肠道细胞屏障。

探讨“天麻-红景天”药对调控TNF-α/NF-κB保护低灌注-脑小血管病模型小鼠内皮细胞屏障的作用机制

目的 探讨“天麻-红景天”药对通过调控肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/核因子κB(NF-κB),保护低灌注-脑小血管病小鼠内皮细胞屏障的作用机制。方法 将70只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组、天麻-红景天1~3组(天麻与红景天质量比分别为1∶1、2∶1、1∶2),每组14只。采用单侧颈总动脉闭塞法制备脑小血管病小鼠模型。术后6 h灌胃1次,之后每24 h灌胃1次,天麻-红景天1~3组小鼠给药剂量分别为1.30、1.95、1.95 g/(kg·d),假手术组、模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。在实验第3天(急性期)、第7天(亚急性期)进行脑血流量和行为学检测后取材。激光散斑衬比成像观察脑血流量的变化;步态分析仪评价运动协调能力;HE染色观察脑组织病理形态学变化;蛋白质印迹法检测白蛋白的表达水平;免疫荧光法和蛋白质印迹法检测咬合蛋白(Occludin)和闭锁连接蛋白-1(ZO-1)的表达水平;实时荧光PCR和蛋白质印迹法检测TNF-α、NF-κB、白细胞介素-β(IL-β)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果 与假手术组比较,第3、7天模型组小鼠脑血流量降低(P<0.05);出现摆动时长延长、步频减少、步态平衡性降低(P<0.05)的步态异常情况;脑组织病理损伤严重,白蛋白表达水平升高,Occludin和ZO-1蛋白表达水平下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、IL-β、IL-6 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,第3、7天天麻-红景天各组小鼠脑血流量升高(P<0.05);摆动时长缩短、步频增加、步态平衡性升高(P<0.05);脑组织病理损伤减轻,白蛋白表达水平降低(P<0.05),Occludin和ZO-1蛋白表达水平升高(P<0.05);TNF-α、NF-κB、IL-β、IL-6的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。其中,天麻-红景天2组在第3天综合疗效较好,天麻-红景天3组在第7天综合疗效更佳。结论 “天麻-红景天”药对能提高低灌注-脑小血管病小鼠脑血流量,改善步态异常,减轻脑组织病理损伤,保护内皮细胞屏障的功能和结构,其机制可能与降低炎症因子表达有关。

绿原酸通过TLR4/NF-κB信号通路调控脓毒症大鼠肠上皮细胞屏障功能的研究

目的 观察绿原酸通过调控TLR4/NF-κB信号通路减轻脓毒症(sepsis)大鼠肠道氧化应激损伤、改善肠上皮细胞屏障功能的作用。方法 选取SD大鼠60只,采用随机数字表法分成假手术组、模型对照组、绿原酸(低、高剂量)组,每组15只。术后24 h,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10;比色法测定小肠组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用Western blotting法测定小肠组织中的蛋白表达[密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)及TLR-4/NF-κB通路相关的蛋白]。结果 与模型对照组[(4.45±0.14)分]比较,低剂量组[(4.17±0.22)分]、高剂量组[(1.95±0.08)分]Chiu评分明显下降(t=4.159、60.048,均P<0.001);高剂量组血清TNF-α、IL-6、IL-10水平及小肠组织中NO、MDA含量均显著降低(均P<0.05),SOD含量、Claudin-1、ZO-1蛋白表达量及MyD88、TLR-4蛋白与p-NF-κB p65(Ser536)水平均显著升高(均P<0.05)。结论 绿原酸可经抑制TLR4/NF-kB信号转导途径,减轻脓毒症大鼠的炎症反应程度及小肠组织的氧化应激损伤,进而促进大鼠的肠道屏障功能改善。

β-毒素促进金黄色葡萄球菌破坏血脑屏障的实验研究

目的 探讨β-毒素(Hlb)在金黄色葡萄球菌通过血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)中的作用。方法 通过血琼脂平板划线筛选金葡菌MW2的Hlb高产菌株,验证其对hCMEC/D3模拟BBB细胞模型通透性的影响。采用生物信息学分析筛选hlb基因完整的金葡菌菌株,利用同源重组的方法构建hlb敲除株,血琼脂平板法检测溶血活性改变。利用BBB细胞模型比较不同菌株对其通透性的影响,再将野生株与hlb敲除株经尾静脉注射构建小鼠血源性脑膜炎/脑微脓肿模型并比较感染72 h脑组织中菌载量。结果 金葡菌MW2的Hlb高产菌株对BBB细胞模型破坏导致BBB细胞模型通透性增加的能力较野生株明显增强。NCTC8325-4、COL和RN4220菌株hlb基因无噬菌体插入。成功构建NCTC8325-4Δhlb株,血平板证实敲除株的β-溶血缺失。NCTC8325-4Δhlb株对BBB模型细胞破坏导致BBB细胞模型通透性增加的作用较野生株下降,在小鼠血源性脑膜炎/脑微脓肿模型脑组织中菌载量也较野生株明显降低。结论 β-毒素具有促进金葡菌破坏BBB的作用。

IL-1β对肠上皮细胞屏障通透性的影响

目的炎症性肠病是儿童和青少年时期重要的慢性胃肠道疾病，肠黏膜屏障的损伤在其发病中起重要作用。本研究通过IL-1β刺激Caco-2细胞单层，体外模拟炎症性肠上皮细胞屏障，为研究炎症性肠病的发病及治疗提供基础。方法体外培养Caco-2细胞21d模拟肠上皮细胞单层屏障。炎症1组从培养第5天开始每隔1天应用IL-1β处理2h检测TEER值，至第2l天。炎症2组于培养第18天换用含IL-1β培养液，分别于处理0、12、24、48、72h检测TEER。正常对照组用普通培养液培养，也于相应时间点检测TEER。结果正常对照组细胞TEER从第5天至第15天逐渐增加，在第15天达到600Ω·cm^2，并到达平台期保持至第21d。炎症1组细胞TEER值均低于正常组细胞，并且直至第21天仍〈500Ω·cm^2。炎症2组细胞显示时间依赖性的TEER逐渐降低，在48h达到最大值，然后在72h轻度回升。结论培养2～3周的Caco-2细胞能够形成具有极性的肠上皮细胞单层，对其给予IL-1β刺激可在体外模拟炎症性肠上皮细胞屏障。

Toll样受体2对肠上皮细胞屏障通透性的保护作用及机制

目的肠上皮细胞屏障的损伤与多种胃肠道疾病的发生密切相关，有效维持屏障功能是治疗这些疾病的关键。本研究试图通过体外实验探讨Toll样受体2（toll—like receptor，TLR2）对肠上皮细胞屏障通透性的保护作用及其机制。方法正常组将未转染Caco-2细胞，TLR2基因沉默Caco-2细胞，TLR2基因过表达Caco-2细胞培养21d形成单层，检测跨膜电阻（transepithelial electrical resistance,TEER）值，其反应上皮细胞屏障的通透性。炎症组3类细胞分别于培养第19d给予10ng／ml IL-1β刺激48h，于第21d检测TEER值。抑制剂组3类细胞分别在1L-1β前再给予PI3K／Akt通路抑制剂处理1h，于第21d检测TEER值。结果TLR2基因沉默能够显著减低Caco-2细胞单层的TEER值（P〈0．01），而TLR2基因过表达能够升高TEER值，但不具有统计学意义。TLR2能够防止IL-1β造成的TEER值下降（P〈0．01），此作用在给予PI3K／Akt通路抑制剂后消失。结论TLR2对肠上皮细胞屏障通透性具有调节作用，并且能够防止炎症造成的通透性增高，这种保护作用由PI3K／Akt通路参与介导。