骨髓内皮祖细胞释放的细胞微泡对缺氧-复氧诱导心肌细胞凋亡的影响及机制

目的观察骨髓内皮祖细胞释放的细胞微泡(EPCs-MVs)对缺氧-复氧诱导心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法从小鼠骨髓中分离内皮组细胞(EPCs),收集微泡(MVs)及不含RNA的MVs(rd MVs);将心肌细胞H9c2随机分为4组,EP、DEP、模型组均行缺氧-复氧模型制作,EP、DEP组造模后分别给予EPCs-MVs、EPCs-rd MVs 50μg/m L作用24 h,对照组不造模、不进行干预。采用荧光染色的脂质膜标记法检测EPCs-MVs、EPCs-rd MVs与H9c2细胞的融合程度,MTT实验测算细胞存活率,流式细胞仪测算细胞凋亡率,采用Western blotting法检测PI3K/Akt通路相关蛋白Akt、p-Akt蛋白及PI3K抑制剂(LY294002)阻滞前后的p-Akt蛋白。结果EP、DEP组融合率分别为49.12%±8.79%、47.94%±10.22%,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,各组细胞存活率下降、细胞凋亡率升高、p-Akt蛋白表达量降低(P均<0.05);与DEP组、模型组比较,EP组细胞存活率上升、细胞凋亡率下降、p-Akt蛋白表达量增加(P均<0.05);DEP组、模型组各指标差异均无统计学意义(P均>0.05)。各组细胞Akt蛋白表达量差异无统计学意义(P均>0.05),PI3K抑制剂阻滞后p-Akt蛋白表达量均降低(P均<0.05)。结论 EPCs-MVs可通过激活PI3K/Akt通路减少缺氧-复氧对心肌细胞凋亡的影响。

细胞微泡miRNA对内皮细胞的调控

内皮细胞是内衬在血管内壁表面的单细胞层，在调节血管功能及维持机体内环境稳态等方面发挥重要作用。内皮细胞活化或损伤与诸多疾病相关，如高血压、动脉粥样硬化、冠心病等心血管疾病及肿瘤、糖尿病等。近年研究发现细胞微泡（microparticles，MPs）是参与内皮细胞损伤过程的重要因素，并在很多疾病的发生发展中发挥作用。

多发性骨髓瘤患者淋巴细胞来源微泡的检测及其临床意义

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)患者淋巴细胞来源微泡(LMP)的表达及其临床意义。方法 选取65例初诊MM患者(初诊组)及30例健康体检志愿者为对照组,初诊组经4疗程化疗后8例在3个月内死亡,余57例纳入化疗后组。流式细胞仪检测3组外周血LMP的表达及初诊组外周血淋巴细胞亚群及骨髓MM细胞免疫表型表达;比较化疗后不同疗效组间LMP;受试者工作特征(ROC)曲线确定各LMP预测死亡的截断值,LMP≥截断值为High(H)组,<截断值的为Low(L)组,进行Kaplan-Meier生存分析;将Kaplan-Meier分析中P<0.05的变量纳入Cox回归分析,分析患者死亡的影响因素;比较不同LMP组间淋巴细胞亚群及骨髓瘤细胞免疫表型差异。结果 初诊组LMP、CD3^(+)LMP、CD3^(+)CD8^(+)LMP比例低于对照组,NKLMP比例、CD4^(+)/CD8^(+)LMP高于对照组(P<0.05)。化疗后组CD3^(+)CD8^(+)LMP比例高于初诊组,CD3^(+)CD4^(+)LMP比例、CD4^(+)/CD8^(+)LMP低于初诊组(P<0.05)。完全缓解(CR)+非常好的部分缓解(VGPR)组CD3^(+)LMP、CD3^(+)CD8^(+)LMP比例高于部分缓解(PR)+微小缓解(MR)+疾病进展(PD)组(P<0.01),而NKLMP比例、CD4^(+)/CD8^(+)LMP则低于PR+MR+PD组(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,LLMP组中位生存时间(OS)较HLMP组缩短(P<0.01);LNKTLMP组中位OS较HNKTLMP组缩短(P<0.05)。Cox回归分析显示LLMP、LNKTLMP是患者死亡的独立危险因素(HR分别为4.620、2.706,P<0.05)。LLMP组CD3^(+)CD4^(+)T比例、CD4^(+)/CD8^(+)T高于HLMP组(P<0.05)。LLMP组MM细胞CD117^(+)比例高于HLMP组(P<0.05)。结论 MM患者存在LMP分泌紊乱,LMP、NKTLMP与MM预后密切相关,未来靶向调节LMP分泌或可延长生存,改善预后。

合体滋养细胞微泡对树突状细胞免疫功能影响实验研究

目的研究小鼠合体滋养细胞微泡(STBM)对骨髓源性树突状细胞(BMDCs)免疫功能的影响。方法 2015年于第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科中心,机械分离法将小鼠胎盘剪碎,采用差速离心法制备合体滋养细胞微泡。添加重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-csf)、重组白细胞介素-4(IL-4)培养骨髓源性树突状细胞,6 d后将其分为阴性对照组和实验组1、2、3、4以及阳性对照组。实验组1、2、3、4分别加入终浓度为1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L的STBM,阴性对照组加等量的磷酸盐缓冲液(PBS),阳性对照组加入2.0 mg/L的脂多糖(LPS),继续培养2 d。流式细胞学技术(FCM)检测树突状细胞表面标志物CD11c及CD86的表达情况。同时ELISA法检测不同浓度STBM诱导下树突状细胞(dendritic cells,DCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)及IL-12的含量。结果不同浓度STBM处理后的BMDCs明显上调了CD11c、CD86的表达,其中1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L的STBM诱导DCs的CD11c/CD86双阳性表达率分别为46.1%、56.9%、60.5%、88.9%,与PBS组(18.2%)相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的STBM刺激DCs后产生的TNF-α[(6.91±1.37)、(7.98±1.55)、(9.40±0.93)、(12.65±1.62)ng/L],IFN-γ[(12.14±1.39)、(17.52±1.67)ng/L]及IL-12[(6.98±1.19)、(7.88±0.10)、(9.18±1.69)ng/L]分别与各PBS组[(3.61±0.64)、(3.15±0.90)、(3.51±1.09)ng/L]相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 STBM促进DCs的成熟,激活母体系统性炎症反应,可能是引起子痫前期发生重要原因。

微泡与肿瘤发展进程的研究进展

大多数类型的活细胞都可以分泌产生微泡,包括肿瘤细胞。细胞微泡是有脂质膜所包裹的直径在40～100 nm之间的膜性囊泡。微泡内含有丰富的mRNA、miRNA、蛋白质分子以及脂质分子,其内所含内容物的种类和数量取决于来源的细胞种类。微泡在各种生理和病理过程中起着非常重要的作用。近30年来,对肿瘤细胞所分泌的微泡在肿瘤生长、侵袭、血管生成、免疫调节以及信息交流传递等方面进行了大量研究。本文总结近年来的文献,就细胞微泡的性质和生物学作用以及在肿瘤进展中的潜在作用做一综述,并对微泡在肿瘤临床治疗中的潜在价值做一讨论。

乳腺癌患者白细胞来源微泡的特性及其临床意义

目的:探讨乳腺癌患者白细胞来源微泡(leukocyte-derived microparticles,LMPs)的特性及其临床意义。方法:用流式细胞仪检测44例乳腺癌患者和10例健康志愿者外周血的LMPs以及其中CD44+LMPs、CD24+LMPs和CD44+CD24-LMPs的表达情况。进一步用流式细胞仪检测乳腺癌患者和志愿者外周血单个核细胞(monocytes,MNCs)中CD44+、CD24+和CD44+CD24-细胞的比例。最后分析LMPs的临床相关性以及MNCs与LMPs之间的相关性。结果:乳腺癌组的LMPs、CD44+LMPs和CD44+CD24-LMPs比例显著高于健康对照组(P值分别为0.021、0.011和0.006)。LMPs比例在不同大小的肿瘤组织间差异有统计学意义(P=0.018)。CD44+LMPs比例在不同水平的Her-2表达组间差异也有统计学意义(P=0.020)。MNCs中CD44+、CD24+和CD44+CD24-细胞比例在健康对照组和乳腺癌组之间差异无统计学意义。LMPs与MNCs间无显著相关性。结论:乳腺癌患者的LMPs比例与肿瘤大小有关,而CD44+LMPs比例与Her-2水平密切相关,该指标可用来评估乳腺癌的复发转移及预后情况。

携带微RNA的间充质干细胞来源微泡在风湿性疾病中的研究进展

风湿性疾病的主要特点为免疫紊乱及其介导的组织破坏,多种保护性微RNA(miRNA)的表达失调参与了风湿病的进展,然而目前治疗策略包括激素、DMARDs在内的药物尽管提高了风湿性疾病的缓解率,但存在不良反应大、费用昂贵等缺点。间充质干细胞来源微泡(MSC-MVs)可通过传递miRNA至靶细胞发挥免疫调节与组织修复的生物学功能,并且其免疫原性低、稳定性高以及易于生产和储存,有望在将来成为多种风湿病新的、安全有效的、精准的治疗策略。