气虚血瘀型Corti器毛细胞损伤动物模型的建立

背景:随着中医药对耳鸣耳聋的疗效越来越受到重视,但对其机制尚缺乏系统深入的研究,利用动物模型进行中医药治疗耳鸣耳聋的机制探索是非常有意义的研究方向。目的:建立一种气虚血瘀证型的Corti器毛细胞损伤动物(豚鼠)模型并评价其效果。方法:12只成年豚鼠按随机数字表法分为正常对照组和造模组。造模组首先采用改良耗气破气加饥饱失常法处理15 d进行气虚造模,之后以光化学反应法复制血瘀Corti器毛细胞损伤模型;正常对照组不干预。造模后检测两组豚鼠血清的D-木糖浓度,行耳声发射DPOAE测试,并观察光镜下耳蜗组织形态。结果与结论:(1)与正常对照组相比,造模组血清D-木糖浓度较低(P<0.01);(2)耳声发射DPOAE测试结果显示,造模组1 560,3 125 Hz DPOAE幅值较正常对照组及造模前降低(P<0.01);(3)造模组耳蜗组织形态发生变化:螺旋韧带、基底膜微血管及蜗轴毛细血管内有血管扩张、微血栓形成,血管纹水肿变性;Corti器内毛细胞变性、坏死或缺失;(4)提示:模型成功模拟了豚鼠气虚血瘀型Corti器毛细胞损伤的过程,未来可应用于中医药治疗耳鸣耳聋特别是突发性耳聋的机制研究。

缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制

背景:建立人肝细胞体外缺氧再给氧损伤模型,模拟移植器官缺血再灌注损伤,从细胞分子水平探讨缺血再灌注所致纤维形肌动蛋白微丝损伤的机制,目前尚无相关研究报道。目的:分析缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制。方法:建立体外大鼠肝细胞缺氧再给氧模型。肝细胞随机分为正常对照组、缺氧再给氧组。缺氧再给氧组又分为缺氧再给氧2 h、缺氧再给氧4 h、缺氧再给氧6 h组(分别为细胞缺氧3 h后再给氧2,4,6 h)。光镜观察细胞形态,电镜观察超微结构的改变,共聚焦激光显微镜观察纤维形肌动蛋白微丝含量变化,Real-time PCR检测HSP27、丝切蛋白基因的转录水平,Western blot检测HSP27、丝切蛋白蛋白的表达水平。结果与结论:光镜下缺氧再给氧各组梭形细胞显著增多,且脱落细胞明显增多;透射电镜下缺氧再给氧组与对照组相比内质网数量明显减少,线粒体密度深,糖原消失;共聚焦激光显微镜可见缺氧再给氧组纤维形肌动蛋白纤维荧光紊乱,形态明显改变,荧光染色明显减弱,平均荧光强度缺氧再给氧各组明显低于对照组(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测H/R各组HSP27、丝切蛋白基因转录和蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0.05)。表明缺氧再给氧可能是通过抑制肝细胞内HSP27、丝切蛋白的蛋白表达和基因转录,从而影响纤维形肌动蛋白微丝的正确装配以及减弱纤维形肌动蛋白的正常循环,进而改变纤维形肌动蛋白微丝骨架。

阳离子化牛血清白蛋白诱导膜性肾病模型大鼠足细胞相关蛋白的表达

背景:膜性肾病动物模型可模拟人类膜性肾病的发病机制,对疾病的研究具有重要意义。目的:观察膜性肾病模型大鼠足细胞相关蛋白nephrin、podocin的表达,以探讨其与膜性肾病发病的关系。方法:将40只SD大鼠随机分为模型组和对照组,每组20只。模型组取阳离子化牛血清白蛋白1 mg溶解于0.5 mL生理盐水中与等量不完全弗氏佐剂充分乳化后在颈背部皮下多点注射预免疫1周后正式免疫,尾静脉给予阳离子化牛血清白蛋白16 mg/kg,隔日1次,持续4周。对照组尾静脉注射等体积生理盐水。造模后第2,4周进行生化指标检测和病理学检查,RT-PCR法检测肾组织中nephrin和podocin mR NA的表达。结果与结论:(1)模型组24 h尿液总量明显减少,且出现了明显的蛋白尿,血清肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油水平显著升高,血清白蛋白水平显著降低,与对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.01),且随着病变继续发展,病情加重;(2)病理检测发现模型组有不同程度肾小管扩张,肾小球基底膜增厚,系膜细胞及基质增生,呈典型的膜性肾炎改变;(3)模型组大鼠肾组织nephrin和podocin m RNA表达量低于对照组;(4)结果表明,nephrin、podocin表达减少可能使足细胞裂孔膜结构的完整性受损,肾小球滤过屏障破坏,导致蛋白尿。

黄芪注射液干预人宫颈永生化上皮细胞体外实验模型的细胞凋亡变化

背景:宫颈永生化上皮细胞H8在致癌因素诱导下可以发生癌变,当有协同因子共同作用时就会导致宫颈癌的发生。但临床上对于癌前病变的女性尚缺乏有效的干预治疗,此项治疗临床为空白。目的:分析黄芪注射液对人宫颈永生化上皮细胞(H8细胞)凋亡的作用及机制。方法:实验分2组,黄芪注射液药物组和空白对照组。1ELISA法检测黄芪注射液作用后人宫颈永生化上皮细胞H8凋亡的DNA片断。2酶标仪分析黄芪注射液作用后人宫颈永生化上皮细胞H8中凋亡酶caspase-3、caspase-9酶活性的变化。3Western blot检测黄芪注射液作用后,人宫颈永生化上皮细胞H8中caspase-3、caspase-9、PARP蛋白表达的变化。结果与结论:1ELISA法检测,20 g/L黄芪注射液分别作用0,6,12,24 h后,人宫颈永生化上皮细胞H8DNA片段随着药物作用时间的延长逐渐增多,且呈时间依赖性(P<0.05)。2酶标仪检测,20 g/L黄芪注射液作用0,6,12,24 h后,人宫颈永生化上皮细胞H8 caspase-3和caspase-9的活性增高,且呈时间依赖性(P<0.05)。320 g/L黄芪注射液分别作用0,6,12和24 h后,人宫颈永生化上皮细胞H8中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达逐渐升高,差异有显著性意义(P<0.05);Cleaved PARP蛋白的表达逐渐下降,差异有显著性意义(P<0.05)。结果说明,黄芪注射液对人宫颈永生化上皮细胞H8具有较显著的诱导凋亡作用,其机制可能与上调caspase-3和caspase-9蛋白表达有关。

红花黄色素对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的影响

背景:红花黄色素有治疗糖尿病肾病等作用,能够保护肾脏功能,减少损害,延缓或阻止糖尿病肾病的发展。目的:进一步验证红花黄色素对糖尿病肾病大鼠肾脏的作用以及其对肾脏细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的表达的影响。方法:选择30只大鼠,随机分为3组,正常对照组、模型组和实验组,每组10只大鼠。实验组和模型组大鼠建立糖尿病肾病模型。建模成功后1周开始实验组大鼠每天给予红花黄色素注射液27.8 mg/kg腹腔注射,1次/d,模型组和对照组每天给予等量生理盐水腹腔注射,共给药23周。观察大鼠的各项肾脏相关生化指标、肾脏组织的病理学变化以及肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体的表达情况。结果与结论:1实验组和模型组大鼠的肥大指数明显高于对照组(P<0.05)。2模型组的24 h蛋白尿、糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油、肌酐及尿素氮均高于对照组(P<0.05);实验组的24 h蛋白尿、糖化血红蛋白、总胆固醇及尿素氮均高于对照组(P<0.05);实验组的24 h蛋白尿、总胆固醇、三酰甘油、肌酐及尿素氮均低于模型组(P<0.05)。3模型组大鼠肾小球肥大,毛细血管的基底膜明显增厚,细胞增生,系膜增宽;对照组大鼠肾脏组织结构发现异常改变;实验组大鼠的肾脏组织病理学损害程度介于对照组和模型组之间。4实验组和模型组的肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达水平高于对照组(P<0.05),实验组的肾脏组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达水平低于模型组(P<0.05)。结果说明,红花黄色素对糖尿病肾病的肾脏具有保护作用,其作用机制可能与其阻断肾脏局部的肾素-血管紧张素系统有关。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症模型小鼠的治疗作用

背景:研究发现粒细胞集落刺激因子可以用于治疗粒细胞减少症,关于粒细胞集落刺激因子治疗脓毒症的研究不多。目的:探讨重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症小鼠的治疗作用。方法:采用腹腔内注射脂多糖的方法建立脓毒症小鼠动物模型,建模后6,30 h皮下注射重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,观察小鼠的肺组织病理变化、外周血中性粒细胞CD64表达以及血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素10水平。结果与结论:(1)治疗后小鼠支气管上皮尚完整,间质轻度增生,见少量中性粒细胞浸润;(2)治疗后1,3,7 d治疗组小鼠外周血中性粒细胞CD64的表达和血清白细胞介素10水平显著高于模型组和正常对照组(P<0.05);(3)治疗后1,3,7 d治疗组小鼠血清肿瘤坏死因子α水平明显高于正常对照组(P<0.05),但低于模型组(P<0.05);(4)结果表明,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子具有增强脓毒症小鼠中性粒细胞功能和抗炎作用。

玻璃体腔注射促红细胞生成素保护糖尿病视网膜病变模型大鼠的视神经作用

背景:糖尿病会导致多种并发症的出现,其中视网膜病变是一种常见的类型,为探究促红细胞生成素在糖尿病视网膜病变中的作用,建立具有临床视网膜新生血管相似病理特征且重复性高的动物模型是十分必要的。目的:观察玻璃体腔注射促红细胞生成素对糖尿病视网膜病变大鼠视神经的保护作用。方法:建立糖尿病视网膜病变模型大鼠,于玻璃体腔注射促红细胞生成素干预,连续注射14 d,设模型组和正常对照组作对比。结果与结论:1透射电镜观察:与模型组相比,促红细胞生成素组视网膜神经节细胞核呈现出均匀的染色,细胞膜完整,内质网呈轻微肿胀,细胞核周围线粒体存在数量较少的空泡;2Western blot和RT-PCR检测:与模型组相比,促红细胞生成素组Caspase-3激活型、Bax蛋白表达降低(P<0.05),Caspase-3原型蛋白和Bcl-2蛋白表达明显提高(P<0.05),两组核转录因子κB和Survivn基因的表达也差异有显著性意义(P<0.05);3结果证实:玻璃体腔注射促红细胞生成素对糖尿病视网膜病变大鼠视神经有保护作用,可能与其抑制细胞凋亡有关。

雌二醇和孕酮对去势模型小鼠子宫内膜巨噬细胞及相关因子表达的影响

背景:有研究表明,巨噬细胞功能及巨噬细胞集落刺激因子的表达可能受雌、孕激素直接或间接调控,但具体影响尚未深入研究。目的:观察雌二醇和孕酮对双侧卵巢切除小鼠子宫内膜巨噬细胞及巨噬细胞集落刺激因子表达的影响。方法:将双侧卵巢切除的小鼠随机分为雌激素组、孕激素组和对照组,分析各组小鼠子宫内膜巨噬细胞的数量和巨噬细胞集落刺激因子的表达强度。结果与结论:免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,雌激素组与孕激素组小鼠子宫内膜巨噬细胞数量、干预6,24 h后巨噬细胞集落刺激因子的表达明显高于对照组(P<0.05)。结果证实,雌二醇和孕酮都对子宫内膜巨噬细胞有趋化作用,并可以诱导巨噬细胞集落刺激因子的表达。

猫视乳头三维模型重建及有限元分析

背景:青光眼是一种以视野缺失为特征的不可逆性致盲眼疾病,临床研究表明,眼底视乳头组织早在视野缺失前已经发生了变化,而且视乳头中各组织的形态变化已经成为目前青光眼早期诊断以及确定病情发展的关键参考点,因此研究高眼压下视乳头各组织的形态变化具有重要的意义。目的:建立包含筛板、视网膜和脉络膜的视乳头组织三维模型,分析急性高眼压下视乳头各组织的厚度变化。方法:1选择健康家猫,排除屈光介质不清等各种眼疾,利用深度增强的频域相干光断层扫描成像技术获得猫在正常眼压下眼底视乳头组织的断层序列图。2分别获得视网膜、脉络膜和筛板的三维结构模型,并组装视乳头三维模型。利用有限元方法分析不同眼压下视网膜、脉络膜和筛板的厚度变化。3通过前房灌注的方法制造急性高眼压动物模型,利用深度增强的频域相干光断层扫描成像技术获得猫眼在不同眼压下的断层序列图。测量不同眼压下脉络膜、视网膜和筛板的厚度变化,并与有限元计算结果进行比较。结果与结论:随着眼压的逐渐升高,脉络膜、视网膜和筛板呈变薄趋势,视乳头的杯盘比逐渐变大。而关于脉络膜、视网膜和筛板的厚度变化,测量结果与有限元计算的结果趋势程度相一致,因此利用光学相干断层扫描仪获得的断层序列图对眼底各组织进行三维重建来分析高眼压下眼底各组织的形态变化可行,用有限元分析的方法可以对眼底各组织在高眼压下的形态变化进行预测,这对确定青光眼的病程发展有一定的指导意义。

头颈部不同部位肿瘤动物模型的建立及生长转移特性比较

背景:建立头颈部肿瘤的动物模型,为进一步研究其发病及转移机制,寻找积极有效的诊断及治疗方案有重要的临床意义。目的:比较头颈部不同部位动物模型肿瘤的生长特性、淋巴结转移及远处转移的特性。方法:VX2肿瘤细胞株复苏培养传代后建立荷瘤种兔,麻醉后从荷瘤处剥离肿瘤,制成肿瘤组织细胞悬液,在兔大腿内侧肌肉处注入瘤细胞悬液,制成传代兔,2周后传代。从传代兔大腿内侧获取肿瘤,制备肿瘤组织悬液,分别在兔耳部、舌部和鼻咽部注入,建立兔头颈部VX2肿瘤模型。结果与结论:3组兔精神、饮食、活动等存在明显差异,耳部移植兔明显好于舌部和鼻咽部。兔耳部、舌部、鼻咽部接种VX2肿瘤细胞悬液,2周后均可成功的建立兔头颈部VX2肿瘤模型,成瘤率耳部最高,为100%(15/15),舌部和鼻咽部成瘤率为93%(14/15);不同部位VX2肿瘤模型经历了肿瘤迅速增长、中心坏死、表面破溃等阶段,生存期为4-6周;3组均出现头颈部淋巴结转移以及肺转移。苏木精伊红染色证实兔VX2肿瘤组织以及转移淋巴结为中至低分化鳞状细胞癌。说明VX2肿瘤组织细胞悬液接种建立的兔头颈部肿瘤模型具有建模周期短,稳定性好、易于重复、移植瘤成功率高、操作简单等特点,兔头颈部不同部位VX2瘤生长各具特点,可根据研究目的选择不同的种植部位。

构建HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物及对乳腺癌细胞增殖的影响

背景:凋亡素(Apoptin)能诱导50种以上不同类型的肿瘤细胞凋亡,有望成为一种极具应用前景的抗肿瘤制剂。如何安全、有效地将其应用于临床,是一个亟待解决的最具现实意义的问题。目的:拟制备人血清白蛋白(HSA)与Apoptin基因的复合物,通过体内外实验验证其抗瘤效果,为Apoptin尽早应用于基因治疗寻找一个简单有效的转移方式。方法:(1)构建含Apoptin基因的真核表达载体pcD NA-Apoptin。以水溶性碳二亚胺(EDC)为交联剂,将聚醚酰亚胺(PEI)与人血清白蛋白(HSA)连接,合成HSA-PEI复合物,然后经电荷中和效应将HSA-PEI复合物与pcD NA-Apoptin重组体及pcD NA空载体分别连接,形成相应HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物;(2)将HSA-PEI-pcD NA-Apoptin复合物转染乳腺癌MCF-7细胞,Western blot检测Apoptin基因在细胞中的表达,MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖情况;(3)建立裸鼠乳腺癌模型,使用尾静脉注射法,分别将0.5 mL HSA-PEI-pcD NA-Apoptin、HSA-PEI-pcD NA及生理盐水注射入裸鼠体内,4周后测量肿瘤体积。结果与结论:(1)成功构建并鉴定了HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物,体外成功转染乳腺癌MCF-7细胞;(2)HSA-PEI-pcDNA-Apoptin转染MCF-7细胞24 h有Apoptin蛋白的表达,而转染HSA-PEI-pcD NA细胞及空白对照组细胞未见Apoptin蛋白的表达;(3)体外细胞增殖实验提示HSA-PEI-pcD NA-Apoptin组吸光度值明显低于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P<0.05);(4)裸鼠乳腺癌模型HSA-PEI-pcDNA-Apoptin组肿瘤体积小于HSA-PEI-pcDNA组及空白对照组(P<0.05);(5)结果表明,HSA-PEI-pcDNA-Apoptin复合物有明显的抑制肿瘤作用。

蓖麻油引产餐提取物影响子宫收缩和羊膜组织前列腺素E2的含量

背景:有研究显示蓖麻籽提取物具有一定的抗生育作用,然而国内对蓖麻籽在抗生育方面的报道很少。目的:探讨蓖麻油引产餐提取物对大鼠子宫收缩和羊膜组织前列腺素E2含量的影响。方法:选取60只Wistar未孕成年雌性大鼠,随机分为生理盐水组、缩宫素组及引产餐提取物组,各20只,观察并记录给药前后各组大鼠离体子宫的收缩强度、频率及活动力。选取90只妊娠18 d的Wistar成年雌性大鼠,随机分为生理盐水组、缩宫素组及引产餐提取物组,各30只,利用放射免疫方法测定给药后各组大鼠羊膜组织前列腺素E2水平。取生理盐水组大鼠羊膜组织,体外培养羊膜细胞,在培养液中加入不同质量浓度蓖麻酸,培养18 h,利用放射免疫方法测定羊膜细胞前列腺素E2水平。结果与结论:与给药前及生理盐水组相比,给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率及活动力均明显提高,与缩宫素组相比,给药后引产餐提取物组大鼠子宫的收缩强度、频率差异无显著性意义(t=2.321,P>0.05),而活动力较低(t=2.765,P<0.05);与生理盐水组相比,引产餐提取物组妊娠大鼠羊膜组织前列腺素E2水平显著增高(t=14.91,P<0.01),但引产餐提取物组妊娠大鼠羊膜组织前列腺素E2水平低于缩宫素组(t=2.769,P<0.05)。大鼠羊膜细胞前列腺素E2水平与蓖麻酸质量浓度及培养时间呈正相关。提示蓖麻油引产餐提取物能够增强宫缩效果、增加羊膜组织前列腺素E2水平,蓖麻酸可能是蓖麻油引产餐的活性成分。