HBV相关肝细胞癌肿瘤组织中热休克蛋白mRNA表达水平与肿瘤分期的相关性分析

目的分析肝细胞癌(HCC)肿瘤组织中热休克蛋白(HSP)mRNA表达水平与HCC肿瘤分期的相关性。方法从NCBI网站的基因表达数据库(GEO)下载GSE14520数据集。从GSE14520基因数据库中获取HSP基因25种,通过与数据库下载的临床资料比对,纳入具有HSP基因mRNA表达水平和有对应临床资料的220例HCC患者。提取220例患者癌组织HSP基因的mRNA表达水平及对应的TNM分期及BCLC分期并进行相关性分析。采用Kruskal-Wallis H非参数检验进行多组间比较,采用单因素及多因素logistic回归分析HSP与HCC肿瘤分期的相关性。结果 HSPA12A、HSPA5、HSP90AA1与HSPA13 mRNA随着TNM分期增高,表达逐渐升高(P值均<0.05);HSP90AA1 mRNA随着BCLC分期增高,表达逐渐升高(P<0.05)。HSPA4L(OR=1.019,P=0.005)、HSPA12A(OR=1.077,P=0.026)与HSP90AA1(OR=1.001,P=0.002)是影响TNM分期的危险因素;HSPA9 mRNA升高与HCC患者TNM分期呈负相关(OR=0.995,P=0.011)。HSPH1(OR=1.005,P=0.041)、HSPA1B(OR=1.002,P=0.048)与HSPA5(OR=1.000,P=0.001)是影响BCLC分期的危险因素;HSPA9 mRNA升高与肝癌BCLC分期呈负相关(OR=0.995,P=0.005)。结论 HSP与HCC患者肿瘤临床分期存在一定相关性。

尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对脑动脉支架置入术后造影剂肾病严重程度的预测价值

目的 评价老年患者尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）对脑动脉支架置入术后致造影剂肾病（CIN）的早期诊断价值及其严重程度的预测价值.方法 选择CIN患者15例（CIN组）,其中CIN Ⅰ期12例,CINⅡ期3例;非CIN患者15例（对照组）,连续收集尿标本进行NGAL分析.结果 与对照组比较,CIN组及CIN Ⅰ期、CINⅡ期患者术后3、6、12、24 h和CINⅡ期患者术后48 h尿NGAL明显增高,CIN组及CIN Ⅰ期、CINⅡ期患者尿NGAL术后0～3 h、0～6 h、0～12 h、0～24 h、0～48 h绝对变化值明显增高（P＜0.05）.与CIN Ⅰ期比较,CINⅡ期患者尿NGAL术后0～6 h、0～12 h绝对变化值明显增高（P＜0.05）.CIN组术后0～6h尿NGAL绝对变化值与术后48 h估算肾小球滤过率呈负相关（r=-0.480,P=0.001）.结论 动态监测尿NGAL既可早期诊断CIN,也可对CIN严重程度有一定的预测作用.

人卵巢癌顺铂耐药细胞中核糖体蛋白基因的表达谱分析

目的研究核糖体蛋白基因在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达。方法以顺铂为诱导剂,采用中等剂量、间歇作用法建立人卵巢癌顺铂耐药细胞系COC_1／DDP,然后以其亲本细胞COC_1为对照,应用cDNA微阵列检测COC_1／DDP细胞的核糖体蛋白基因表达。结果与COC_1细胞相比,COC_1／DDP细胞对顺铂有6．2倍耐药性,细胞倍增时间延长了8．9h,S期细胞减少了(27．4±2．13)％,而G_1和G_2期细胞分别增加了(19．6±3．71)％和(8．3±1．95)％。在143个表达水平发生改变的基因中,有12个核糖体蛋白基因表达下调,多个凋亡抑制基因表达上调,凋亡诱导基因CASP2表达下调。结论 COC_1／DDP细胞对顺铂具有耐药性,耐药性的产生可能与部分核糖体蛋白基因的表达下调有关。

角蛋白支架联合TGF-β3基因过表达载体质粒转染的骨髓间充质干细胞对软骨缺损的修复效果

目的通过构建新西兰种大白兔的软骨缺损模型,探讨角蛋白支架联合转化生长因子-β3(TGF-β3)基因过表达载体质粒转染的骨髓间充质干细胞(BMSC)复合物对软骨缺损的修复作用。方法构建大白兔的软骨缺损模型;将新西兰大白兔随机分为模型组(A组)、支架组(B组)、联合BMSC组(C组)和联合过表达质粒转染BMSC组(D组),每组5只,B组软骨缺损处填充角蛋白支架,C组软骨缺损处填充角蛋白支架联合BMSC复合物,D组软骨缺损处填充角蛋白支架联合TGF-β3基因过表达载体转染的BMSC复合物。利用苏木精-伊红(HE)染色、番红-固绿染色和免疫组织化学染色检测各组大白兔缺损软骨修复情况,并且利用改良O′Driscoll评分系统评估HE染色结果,利用改良Mankin评分系统评估番红-固绿染色结果。结果HE染色和番红-固绿染色结果显示,D组软骨缺损基本愈合,愈合处多为软骨组织。A组、B组、C组和D组O′Driscoll评分比较差异有显著性(F=9.342,P<0.05),其中D组O′Driscoll评分明显低于其他组(q=2.018~2.498,P<0.05);A组、B组、C组和D组Mankin评分比较差异均具有显著性(F=8.549,P<0.05);其中D组Mankin评分明显高于其他组(q=2.237~3.457,P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,C组和D组软骨缺损处填充物均可见Ⅱ型胶原蛋白表达,D组表达量更多。结论角蛋白支架联合TGF-β3基因过表达载体质粒转染的BMSC复合物可以促进缺损软骨的修复。

细胞骨架蛋白tubulin α、β在不同级别胶质瘤中的表达及其与预后的相关性

目的探讨不同病理学分级胶质瘤中细胞骨架蛋白tubu linα、β的表达,评估tubu linα、β表达水平与胶质瘤的恶性程度及其与预后的相关性。方法应用免疫组化方法检测57例不同病理级别人胶质瘤组织中tubu linα、β表达情况,并分析tubu linα、β表达水平与病理分级及患者术后生存时间的相关性。结果不同级别胶质瘤tubu linα、β表达水平不同,高级别(Ⅲ、Ⅳ级)与低级别(Ⅰ、Ⅱ级)胶质瘤tubu linα、β表达水平的差异有显著性(P<0.05),且tubu linα、β表达水平与患者术后生存时间呈正相关性。结论tubu linα、β在胶质瘤恶性进展方面可能具有重要意义,对指导胶质瘤的分期、组织学分级和判断患者的预后有一定参考价值。

非小细胞肺癌组织中SKP2蛋白的表达及其对预后的影响

目的:探讨SKP2蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其对患者预后的影响。方法:利用组织芯片和免疫组化技术检测SKP2蛋白在89例NSCLC、5例肺良性肿瘤和5例正常支气管和肺组织中的表达。结果:NSCLC组织中SKP2蛋白表达阳性率为(23·52±13·57)%,明显高于肺良性肿瘤、正常支气管及肺组织(2·91±1·27)%,两者差异有统计学意义,t′=31·373,P=0·000。SKP2蛋白在NSCLC组织中的表达水平与细胞分化程度密切相关,χ2=14·402,P1=0·000;与年龄、性别、吸烟史、肿瘤位置、大小、病理类型、淋巴结转移和TNM分期等差异无统计学意义,P1值均>0·05。SKP2蛋白表达阳性的NSCLC患者5年生存率较阴性患者降低,χ2=4·119/4·636,P1=0·042/0·031;r=-0·186,P2=0·000。结论:SKP2蛋白表达在NSCLC的发生发展中起促进作用,并对患者的预后产生不良影响。

8-甲氧沙林对黑素细胞内游离钙浓度及细胞骨架蛋白形成的影响

目的:观察8-甲氧沙林对体外培养黑素细胞内游离钙浓度、细胞骨架蛋白形成的影响。方法:正常人黑素细胞取自包皮环切术切取的包皮,用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙浓度,用罗丹明结合毒伞素对细胞骨架蛋白进行特异性染色。结果:8-甲氧沙林可使细胞内游离钙离子浓度升高,促进黑素细胞骨架蛋白合成。结论:8-甲氧沙林可能通过诱导黑素细胞内钙离子浓度升高和细胞骨架actin蛋白生成,从而影响黑素细胞的迁移。

房颤患者心脏结构变化与C反应蛋白、中性粒细胞淋巴细胞比值和白细胞计数相关性研究

目的:探讨房颤患者C反应蛋白(CRP)、中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)和白细胞计数(WBC)与心脏结构变化和房颤发生的关系。方法:选取房颤患者114例作为研究组和同期入院的未发生房颤患者232例作为对照组,观察比较两组外周静脉血CRP、NLR和WBC检测水平,并运用多元Logistic回归分析以上三种炎性因子与患者心脏结构变化与房颤发生的相关性。结果:研究组CRP、NIR水平明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);两组WBC水平比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。研究组左室内径(LVD)、左房内径(LAD)、左室后壁厚度(LVPWT)、右室内径(RVD)与右房心径(RAD)等心脏指标均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。通过多元Logistic回归分析发现,房颤发生与CRP、NIR水平具有明显相关性,与WBC水平不具有相关性;心脏结构变化与以上三种炎性因子均不具有相关性。结论:高水平外周血CRP、NLR与心脏病房颤发生具有明显相关性,可能是房颤发生的独立危险因素,通过检测以上炎性因子水平,可为诊断和预测房颤发生提供临床依据。

热休克蛋白70阳性表达与食管鳞癌临床预后分析

【目的】探讨热休克蛋白70(HSP70)与食管鳞癌预后的关系。【方法】收集100例石蜡包埋食管癌肿瘤组织,用免疫组化方法研究其HSP70的表达情况。【结果】食管鳞癌组织中HSP70蛋白表达阳性率为90%,高于正常黏膜表达(13.3%),差异有显著性(P<0.01),食管鳞癌组织中HSP70蛋白的表达水平比正常食管黏膜明显升高。在伴有与不伴有淋巴结转移的食管鳞癌病例中,HSP70阳性表达率分别为84%和96%,差异有显著性(P<0.05)。在术后生存期<3年的食管鳞癌病例中,83.3%表达HSP70,而在生存期>5年的病人中,HSP70阳性表达率为96.1%,阳性率差异有显著性(P<0.05)。【结论】HSP70蛋白的表达与预后有关,HSP70高表达者预后好,HSP70可以作为判断食管鳞状细胞癌预后的重要生物指标之一。

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100mg/L釉基质蛋白,用含10ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均<0.01),骨粘连蛋白对照组未表达,实验组第3天时检测到表达;实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P<0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P<0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P<0.01)。结论:釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。

β-连环蛋白与皮肤干细胞选择性分化

目的:β-连环蛋白是一种多功能、广泛分布的蛋白,参与了包括胚胎形成及个体发育等许多生物过程,近年来在生物及医学领域受到广泛关注。本文就β-连环蛋白在皮肤干细胞选择性分化的作用进行综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1996-01/2005-01期间的相关文章,检索词为“beta-catenin,epidermalstemcell,differentiation”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1996-01/2005-01期间的相关文章,检索词为“β-连环蛋白,皮肤干细胞,分化”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与β-连环蛋白在皮肤干细胞选择性分化研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到22篇符合纳入标准的文献,涉及β-连环蛋白的生物学特性、皮肤干细胞的分布、表皮干细胞的分化调控、β-连环蛋白与皮肤干细胞的定向分化、β-连环蛋白功能的可能作用机制等方面。资料综合:β-连环蛋白的生物学功能包括粘合连接与信号传导。粘合连接是指细胞膜上的钙黏蛋白依次与细胞膜中的β-连环蛋白、α-连环蛋白及肌动蛋白相连形成的特殊结构以完成细胞-细胞、细胞-细胞外基质之间的黏附和相互作用。信号传导指的是β-连环蛋白在Wnt信号通路中的核心作用。β-连环蛋白的这两种功能相互依赖、相互影响,对于皮肤干细胞的分化有着特殊的意义:干细胞对基底膜的黏附是干细胞维持其特性的基本条件,对基底膜的脱黏附是诱导干细胞脱离干细胞群落,进入分化周期的重要调控机制之一。表皮干细胞的分化受内源性和外源性调控,整合素在表皮基底层干细胞与基底膜的信息调控和黏附中起重要作用。β-连环蛋白作为一种细胞因子,存在于表皮干细胞膜表面,在皮肤干细胞分化途径的选择及定向迁移中发挥着重要作用。结论:β-连环蛋白近年来在生物及医学领域受到广泛关注的原因主要与其粘合连接、信号传导两大功能有关。体内参与调控表皮干细胞与毛囊干细胞分化的因子有多种,β-连环蛋白与它们共同形成一个复杂的网络,为表皮细胞的分化提供了重要的微环境。

丝素蛋白/羟基磷灰石/聚多巴胺/BMP-2多孔支架的构建及促进BMSCs成骨分化的研究

目的构建丝素蛋白/羟基磷灰石/聚多巴胺/骨形成发生蛋白-2(SF/HA/PDA/BMP-2)多孔支架并评估其对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨分化能力的影响。方法冷冻干燥法制备SF/HA支架,PDA涂层后复合BMP-2改性,构建SF/HA/PDA/BMP-2多孔支架。以SF/HA支架、SF/HA/PDA支架为对照组,将BMSCs作为种子细胞分别在上述支架上培养,评价3组支架的表面特征、理化性质及细胞生长状态,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色比较3组支架上BMSCs的成骨分化能力。结果SF/HA支架、SF/HA/PDA支架、SF/HA/PDA/BMP-2支架接触角分别为(54.7±4.8)°、(43.7±3.7)°、(32.3±2.4)°,差异有统计学意义(P<0.05);在PDA涂层及接枝BMP-2后,支架表面粗糙度增加,细胞数量增多;BMSCs在SF/HA/PDA/BMP-2支架上的增殖能力优于其他两组支架(P<0.05)。培养2周后,SF/HA支架、SF/HA/PDA支架、SF/HA/PDA/BMP-2支架上细胞ALP水平分别为(2.9±0.4)、(3.4±0.7)、(6.8±0.8)U/mg,差异有统计学意义(P<0.05);茜素红染色结果提示3种支架均有不同程度的成骨诱导能力,但SF/HA/PDA/BMP-2支架最优。结论SF/HA/PDA/BMP-2多孔支架具有良好的生物相容性,能够促进BMSCs体外增殖及成骨分化,在组织工程骨领域具有广阔的应用前景。

CyclinD1、PCNA、Ki67细胞周期相关蛋白在喉复发癌组织芯片中的表达和意义

目的研究Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白的表达与喉癌复发的关系,并评价其对预后评估的作用.方法回顾分析1958～1999年喉癌手术病例574例,术后随访3年,确诊术后复发56例;正常喉对照标本39例.标本制成组织芯片,采用免疫组化SABC法,对芯片标本进行染色.结果 Cyclin D1、PCNA、Ki-67在喉癌组织及正常喉组织中均有表达,且在喉癌组织的表达强于正常喉组织(P<0.01),在喉癌复发组强于未复发组(P<0.01),与喉癌复发呈正相关.结论 Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白的表达可作为估计喉癌预后的指标.

凋亡时细胞骨架蛋白结构的改变

细胞骨架是细胞重要的组成成分 ,维持着细胞正常形态和功能。凋亡时多种细胞骨架蛋白 (如actin ,myosin等 )由于受凋亡因素作用 ,蛋白结构发生改变 ,进而引起凋亡细胞的形态改变。因而细胞骨架的改变在细胞凋亡发生过程中具有重要作用。

RNA结合蛋白Musashi2与宫颈鳞状细胞癌关系的研究

目的探讨宫颈鳞状细胞癌组织中RNA结合蛋白Musashi2(MSI2)的表达与临床病理因素的关系及其临床意义。方法采用免疫组化(SP)法检测40例正常宫颈组织、60例高级别鳞状上皮内病变组织和126例宫颈鳞状细胞癌组织中MSI2的蛋白表达水平,分析其表达与临床病理因素及患者预后的关系。Western blot法检测30例宫颈鳞状细胞癌和30例癌旁正常宫颈组织中MSI2的相对表达量。结合患者随访资料,分析影响宫颈鳞状细胞癌患者预后的危险因素。结果免疫组化结果表明,正常宫颈组织(7.50%)、高级别鳞状上皮内病变组织(28.33%)和宫颈鳞状细胞癌组织(61.90%)中MSI2的阳性表达率逐渐升高(P<0.05),FIGOⅢ+Ⅳ期、有淋巴结转移、HPV16感染及Ki67高表达者MSI2阳性率更高(均P<0.05)。Western blot结果显示,宫颈鳞状细胞癌组织中MSI2的相对表达量高于癌旁正常宫颈组织(0.80±0.09 vs.0.24±0.06,P<0.05)。生存分析显示,MSI2阳性表达的宫颈鳞状细胞癌患者的生存时间明显短于阴性表达者(Log-rankχ^(2)=6.413,P<0.05),FIGOⅠ+Ⅱ分期、无淋巴结转移者生存时间较长(均P<0.05)。Cox多因素回归分析显示,MSI2阳性表达、FIGOⅢ+Ⅳ期和淋巴结转移均是宫颈鳞状细胞癌患者生存的危险因素(均P<0.05)。结论MSI2在宫颈鳞状细胞癌中高表达,并且与肿瘤进展转移及患者预后关系密切。

生长相关蛋白在脊髓源性神经干细胞向神经主细胞分化过程中的表达

目的:探讨脊髓源性神经干细胞向神经元诱导分化过程中生长相关蛋白43的表达,分析其对脊髓损伤修复的主导作用。方法:实验于2003-03/09在中国医科大学实验动物中心完成。取15只孕14d的胎鼠,自胎鼠的脊髓区提取神经干细胞,经培养及神经巢蛋白免疫细胞化学鉴定,观察在神经干细胞定向诱导分化为神经元过程中,生长相关蛋白43于不同时间点的形态学表达。培养液为添加B27(2%)、碱性成纤维细胞生长因子(20mg/L)、表皮细胞生长因子(20mg/L)的无血清培养基DMEM/F12。置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中悬浮培养,观察其生长情况,每3天换液1次,共培养5次。分别于分化1,2,4,8d取出载玻片,对生长相关蛋白的表达进行免疫组化检测。总细胞和阳性细胞在显微镜下计数。结果:15只胎鼠的脊髓源性神经干细胞全部进入结果分析。①神经干细胞的培养情况:培养24h后,可见神经球;第2天时,神经球数目增多,呈桑椹状,折光性强,死细胞无光泽,仅有轮廓。②神经干细胞的鉴定结果:免疫细胞化学染色可见神经球内圆形细胞呈神经巢蛋白抗原强阳性,核未着色。神经干细胞定向分化后,细胞逐渐贴壁,到第4,8天时,细胞逐渐变大,突起变长,偶见多个突起。神经元特异性烯醇化酶阳性的神经元,胞浆及核膜出现棕色阳性反应,细胞核大而圆,无着色。细胞连续计数共712个,其中神经元特异性烯醇化酶阳性细胞296个,比例为41.57%。③神经干细胞分化过程中生长相关蛋白表达的测定:神经干细胞分化第1天,胞质内出现生长相关蛋白,第4天表达增强,于核周及突起中明显,逐渐向胞膜转移,并且长的突起与其他细胞的突起之间形成连接,至分化第8天时这种突起生长停止,神经干细胞分化为成熟的神经元细胞,生长相关蛋白反应减弱并消失。细胞连续计数共736个,其中生长相关蛋白阳性细胞246个,比例为33.42%。结论:在神经干细胞分化为神经元的过程中,生长相关蛋白基因呈一过性表达,参与引导突起的生长并发挥促进作用。

非小细胞肺癌组织中热休克蛋白HSP70的表达及意义

目的:研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者癌组织的热休克蛋白(heat shock protein, HSP)的表达及病理学意义.方法:通过免疫组化的方法研究HSP70在NSCLC组织中的表达,分析其与NSCLC组织分型、分化程度及临床分期的关系.结果:47例NSCLC组织中37 例HSP70表达阳性,较癌旁组织明显增加,P<0.01;26例鳞癌中20例为阳性表达,21例腺癌中17例阳性表达,P>0.05; 16例高分化癌中有10例阳性表达,31例中低分化癌中27例表达阳性,P<0.05;20例Ⅰ～Ⅱ期癌中有13例阳性表达,27例Ⅲ～Ⅳ期癌中24例表达阳性,P<0.05;30例伴有淋巴结转移的NSCLC中有27例阳性表达,17例不伴有淋巴结转移的NSCLC中10例表达阳性,P<0.05.NSCLC组织HSP70表达显著升高,HSP70表达与NSCLC的临床分期相关,但与NSCLC组织类型无关.结论:HSP70在NSCLC的发展与演进中可能具有重要的意义.

NaCl浓度改变对人类神经元钙传感蛋白结构的影响:来自分子动力学模拟证据

背景:人类神经元钙传感蛋白是一个含有高电荷的蛋白,对溶液温度极其敏感,但溶液中离子浓度的变化是否能够改变蛋白结构,进而影响其正常功能的发挥,尚未发现相关研究。目的:探讨溶液中NaCl浓度的微小改变对人类神经元钙传感蛋白结构动力学影响的分子机制。方法:采用全原子计算机动力学模拟的方法,将蛋白质数据库中ID为2LCP的人类神经元钙传感蛋白前两个能量最低的结构作为初始结构,能量最小化后,将蛋白置于NaCl浓度分别为0.1,0.3和1 mol/L的水溶液中,以高速摄像速度(ps,10-12s)记录蛋白在模拟体系中的运行和变化情况。结果与结论:溶液中NaCl浓度升高,(1)人类神经元钙传感蛋白柔性增加,整体结构和局部的疏水口袋体积增大;(2)蛋白C端尾部L3蜷缩,首尾氨基酸D176和V190之间的次联系路径数量明显减少,导致两者之间的联系减弱;(3)蛋白N段和C段氨基酸之间的联系削弱,但两段段内氨基酸联系明显增强;(4)蛋白正负电荷间形成的盐桥数量和百分比均降低,尤其在0.3 mol/L NaCl水溶液中的减少更为明显。(5)结果说明,人类神经元钙传感蛋白对溶液NaCl浓度的改变非常敏感,NaCl浓度的微小变化能够引起蛋白关键结构的改变,从原子-分子的视角,为人类神经元钙传感蛋白在不同溶液环境中的结构变化提供理论参考。

免疫共沉淀联合质谱分析筛选与HCMV IE86相互作用蛋白

目的利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白。方法通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免疫共沉淀的方法富集两种细胞系中的IE86结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,从胶中切取IE86结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用分析及数据库检索,筛选与IE86相互作用蛋白。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析,在MRC-5细胞中,共鉴定到与IE86相互作用的病毒编码的蛋白质17种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白25种;在U87MG细胞中,共鉴定到病毒编码的蛋白质4种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白8种。结论与胶质瘤细胞系U87MG相比,人胚肺成纤维细胞MRC-5中有更多种病毒蛋白及剪接相关蛋白与IE86有相互作用,协同参与IE86的剪接及病毒早、晚期蛋白的表达,这为进一步研究HCMV在不同细胞环境中的复制机制提供了基础。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合伊马替尼对K562细胞的协同杀伤作用

目的:观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂SAHA联合伊马替尼(imatinib,IM)对人慢性髓系白血病(CML)细胞株的协同杀伤作用,并探讨其分子学机制。方法:将不同浓度的SAHA和IM分别或联合作用于对数生长期的K562细胞,MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用;应用Hoechst荧光染色法和流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡,Western blot法检测药物处理后Bcr-Abl及其下游信号途径蛋白的表达、Caspase途径活化和凋亡相关蛋白表达的改变。结果:SAHA和IM单独作用K562细胞呈剂量依赖性抑制细胞生长(SAHA:F=433.8,P<0.001;IM:F=54.14,P<0.001);两药联合对细胞的生长有协同杀伤作用,联合指数CI<1。FACS分析和Hoechst荧光染色证实,SAHA和IM两药联合能加速K562细胞的凋亡,激活Caspase-3、Caspase-8和PARP,下调抗凋亡蛋白Mcl-1表达。此外,SAHA和IM联用能抑制Bcr-Abl及其磷酸化水平,下调JAK2和磷酸化STAT5表达。结论:HDAC抑制剂SAHA联合IM能协同杀伤CML细胞、加速细胞凋亡。其作用机制可能是两药联用协同抑制了Bcr-Abl及其磷酸化水平,抑制JAK2/STAT5信号途径和下调下游靶基因Mcl-1。